端粒酶抑制劑在惡性腫瘤治療中的作用

陳取 趙力挽 杜志成

端粒酶抑制劑對(duì)于惡性癌癥的臨床作用，通過近幾年來的研究，正逐漸為人所熟悉。其作用機(jī)制各有不同，但最終的效用都能夠抑制惡性腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)與分裂［1］。此類物質(zhì)包括：反義寡核苷酸，逆轉(zhuǎn)錄抑制劑，G-四連體穩(wěn)定劑，蛋白激酶C抑制劑，化療藥物。

1 反義寡核苷酸(antisense oligodexoynuclectide，ASODN)

反義寡核苷酸能夠與靶RNA或DNA特異性互補(bǔ)，能夠使得惡性腫瘤細(xì)胞端粒酶活性降低，進(jìn)而其增殖能力下降，甚至調(diào)亡。應(yīng)用這一原理，人工的合成針對(duì)模板序列的反義核苷酸抑制劑在研究中已取得很大突破。

例如 Mete等［2］使用硫代反義核苷酸(PAS-ODN)對(duì)Burkitt's瘤中淋巴瘤細(xì)胞系OMA-BLI生長(zhǎng)有明顯的壓制作用，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。此外夏雪梅等［3］對(duì)凋亡抑制基因survivin反義寡核苷酸的研究表面，通過使用bcl-2反義寡核苷酸對(duì)肺癌細(xì)胞株的抑制作用十分顯著，可出現(xiàn)肺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制以至凋亡，細(xì)胞survivin mRNA明顯下降。肺癌細(xì)胞株survivin基因表達(dá)受到survivin反義寡核苷酸的有效抑制。并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和生長(zhǎng)延緩，同時(shí)也證明聯(lián)合bcl-2反義寡核苷酸對(duì)提升抗癌能力有明顯功用。

2 逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(reserve transcripitase inhabitors)

3'-疊氮-3-脫氧胸腺核苷(3'-azido-2'，3'-dideoxythymidine，AZT)作為逆轉(zhuǎn)錄抑制劑中最為人所關(guān)注的一種，其臨床價(jià)值得到廣泛肯定。

呂繼博［4］用改良的MTT法測(cè)定不同濃度AZT處理C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞后，在不同階段的藥物敏感性。MTT結(jié)果顯示，ATZ對(duì)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞有著異常強(qiáng)烈的抑制作用，且隨著AZT的濃度增加及作用時(shí)間的延長(zhǎng)，其抑制細(xì)胞的增殖作用逐漸增強(qiáng)，有時(shí)間-劑量相關(guān)關(guān)系。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)可得：伴隨AZT濃度的增加，膠質(zhì)瘤干細(xì)胞及膠質(zhì)瘤細(xì)胞的S期細(xì)胞比例增高，并伴有凋亡細(xì)胞的增多。進(jìn)一步表明AZT作用于S期細(xì)胞，抑制C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞的生長(zhǎng)，但C6膠質(zhì)瘤干細(xì)胞對(duì)AZT存在耐藥性，需注意。

3 G-四聯(lián)體穩(wěn)定因子

G-四聯(lián)體穩(wěn)定因子的作用機(jī)制在于特異性的結(jié)合于端粒3端由鳥嘌呤折疊形成的四鏈DNA，既是G-四連體上，從而阻止端粒和端粒酶的結(jié)合，抑制其活性。

目前，三乙烯四胺(TETA)的研究有較大進(jìn)展。殷菲等［5］通過實(shí)驗(yàn)證明三乙烯四胺(Triethylene tetramine，TETA)能夠與G4-DNA產(chǎn)生相互作用提高其穩(wěn)定性。TETA能夠促進(jìn)G4-DNA這一有分子間平行特性的分子的形成，繼而抑制端粒酶陽(yáng)性的 HeLa、MCF-7、K562、ECV·304及PC12細(xì)胞的增殖。作用72 h，TETA對(duì)各種細(xì)胞的半數(shù) 抑制濃度(IC5o值)分別為：HeLa細(xì)胞75株，MCF-7細(xì)胞124株，K562細(xì)胞175株，EeV-304細(xì)胞221株，PelZ細(xì)胞452株;而對(duì)人體內(nèi)端粒酶陰性的HLF細(xì)胞的增殖則無明顯效用。上述研究結(jié)果表明TETA的作用機(jī)制為：穩(wěn)定G4-DNA的結(jié)構(gòu)的同時(shí)抑制端粒酶活性，以達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用。

4 蛋白激酶C抑制劑

蛋白激酶C作為激活細(xì)胞活性的重要環(huán)節(jié)，在信號(hào)傳導(dǎo)系統(tǒng)中的作用不言而喻。Ku-WC等［6］發(fā)現(xiàn)蛋白抑制劑和H-7對(duì)鼻炎癌細(xì)胞NPC-076端粒酶活性，有很強(qiáng)的抑制作用。

此外，張海泉等［7］發(fā)現(xiàn)，通過對(duì)星型孢菌素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造可以得到一系列吲哚馬來酰亞胺類化合物，既是一類新型蛋白激酶C抑制劑。采用MTT法對(duì)的抗腫瘤活性進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)吲哚馬來酰亞胺類化合物在10 μm濃度下，對(duì)人宮頸癌Hela細(xì)胞株均表現(xiàn)出不同程度的抑制作用。而對(duì)其他腫瘤細(xì)胞株，諸如白血病K562等的抑制作用以及其進(jìn)一步的抗腫瘤活性和作用機(jī)理目前尚未徹底闡明。

5 化療藥物

化療作為癌癥治療的常規(guī)手段，對(duì)于癌癥的治愈有重要作用。順鉑作為一種常用的化療藥物，在臨床中廣泛使用。何春容等［8］發(fā)現(xiàn)順鉑對(duì)表達(dá)鋅指蛋白217(ZNF217)的卵巢癌組織的化療敏感性呈負(fù)相關(guān)關(guān)系。既是卵巢癌耐藥株ZNF217為高表達(dá)，而卵巢癌敏感株則為低表達(dá);ZNF217在卵巢癌耐藥株中為核表達(dá)，但在卵巢癌敏感株則主要為漿表達(dá);此外順鉑可以下調(diào)凋亡終末效應(yīng)酶caspase 3和caspase 9活性，并作用于端粒酶，最終促進(jìn)卵巢癌組織細(xì)胞的凋亡(鋅指蛋白217可以抑制這一過程)。

綜上所述，以反義核苷酸抑制劑為代表的端粒酶抑制劑，能通過各自不同的作用機(jī)制抑制端粒酶的活性，從而最終導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞的凋亡。這對(duì)于癌癥的治療有著顯著的臨床意義，但例如AZT所存在的耐藥性，以及順鉑對(duì)于ZNF217的依賴，都影響了它們的作用效果。其工作機(jī)制還需進(jìn)一步闡明。

［1］丁金麗，劉芳芳，于成國(guó).端粒酶抑制劑的研究進(jìn)展.日本醫(yī)學(xué)介紹，2006，27(10)：473-475.

［2］Meta JE，Jashi ss，Palen B，et al.A hexamerie phosphorothloate obligonucleotide telomerase inhibitor arreals growth of Burkitt's lymphoma cells in vitro and vivo.Toxicol Appl Plamacol，1997，144(1)：189-197.

［3］夏雪梅，陳余清，蔡應(yīng)云，等.調(diào)亡抑制基因SURBIBIN反義寡核苷酸聯(lián)合Bcl-2反義核苷酸誘導(dǎo)肺癌細(xì)胞株凋亡的實(shí)驗(yàn)觀察.中國(guó)臨床康復(fù)，2005，47：140-149.

［4］呂繼博.端粒酶抑制劑AZT對(duì)C6交直流干細(xì)胞作用的體外實(shí)驗(yàn)研究.碩士畢業(yè)論文，2010.

［5］殷菲，碰孝軍.三乙烯四胺與G四鏈體DNA相互作用、抑制端粒酶活性及抗腫瘤作用研究.大連：大連理工大學(xué)，2005.

［6］Ku Wu，Cheng AJ，Wang TC，et al.Inhibition of telomerase activity bu PKC inhibitor in human nusopharygeal cnacer cells in culture.Biochem Biophys Rea Commun，1997，241(3)：730-736.

［7］張海泉，卿鳳翎，趙圣印.3-吲哚馬來酰亞胺類蛋白激酶C抑制劑的合成及其抗腫瘤活性的研究.上海：中國(guó)科學(xué)院上海冶金研究所，材料物理與化學(xué)(專業(yè))博士論文，2000.

［8］何春容，鐘梅，孫愛民，等.鋅指蛋白217表達(dá)與卵巢癌組織順鉑化療敏感性的關(guān)系.廣東醫(yī)學(xué)，2010，31(21)：2793-2794.