芹菜根提取物對D-氨基半乳糖所致急性肝損傷的保護作用研究Δ

陳妍，劉軍，林伊梅，馬亮英，烏莉婭·沙依提（.新疆醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院藥劑科，烏魯木齊市830063；.新疆醫(yī)科大學中醫(yī)學院中藥系，烏魯木齊市 830054）

新疆地產(chǎn)維藥芹菜根系傘形科植物歐芹Petroselinum crispum（Mill）Hill的干燥根，主要分布在和田、阿克蘇一帶。與其他芹菜相比，其根部粗壯，色深，有著獨特的地域特色，是維吾爾醫(yī)藥中常用的植物藥。

芹菜根作為一種常用的維藥以飲片形式在臨床廣泛用于高血壓、高血脂、病毒性肝炎、關節(jié)炎等的治療，但對其活性成分和藥理學研究卻未見系統(tǒng)報道。目前，其臨床應用尚缺乏科學的實驗依據(jù)。本研究采用D-氨基半乳糖（D-GaIN）復制大鼠急性肝損傷模型，觀察維藥芹菜根提取物對急性肝損傷的保護作用，為維醫(yī)臨床肝病用藥及進一步研發(fā)該藥提供理論依據(jù)。

1 儀器與材料

1.1 儀器

75型紫外分光光度計（上海精密儀器儀表有限公司）。

1.2 試藥

芹菜根原材料（購于新疆維吾爾民族醫(yī)院，經(jīng)筆者鑒定為真品）；聯(lián)苯雙酯滴丸（浙江醫(yī)藥股份有限公司新昌制藥廠，批號：33020232）；D-GaIN（重慶醫(yī)科大學生物工程研究室，批號：070312），臨用時將其配成10%的生理鹽水溶液，用0.01 mol·L-1NaOH調(diào)pH值至7.0；超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）測試盒（南京建成生物工程研究所提供）。

1.3 動物

普通級Wister大鼠50只，♀♂兼用，體重（200±20）g，由新疆醫(yī)科大學動物中心提供（動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（新）2003-0001）。

2 方法

2.1 藥物的提取

取芹菜根原藥材粗粉適量，加入6倍量70%的乙醇，回流提取2次，每次1 h，過濾，濾液濃縮、干燥，即得芹菜根提取物。其得率為10.14%，1 g提取物相當于9.86 g生藥。

2.2 分組與給藥[1]

將50只大鼠隨機分為正常對照（等容生理鹽水）、模型對照（等容生理鹽水）、聯(lián)苯雙酯（0.2 mg·kg-1）和芹菜根提取物高、低劑量（3、1.5 g·kg-1）組。ig給藥，連續(xù)7 d。末次給藥1 h后，除正常對照組外，各組均按0.5 mg·kg-1ip D-GaIN溶液。

2.3 指標的測定

大鼠禁食不禁水20 h后，腹主動脈取血，分取血清，測定天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）。取肝右葉同一部位肝組織，用黃嘌呤氧化酶法測定SOD活性，用硫代巴比妥酸比色法測定MDA含量。

2.4 統(tǒng)計學方法

實驗數(shù)據(jù)均以±s表示。假設檢驗水準定為0.05，用統(tǒng)計學軟件對計量資料進行正態(tài)性、方差齊性檢驗，5組間各檢測指標的比較用單因素方差分析，兩兩比較用q檢驗法。所有數(shù)據(jù)均用SPASS11.0統(tǒng)計軟件包處理。

3 結果

3.1 芹菜根提取物對D-GaIN誘導的急性肝損傷模型大鼠血清ALT和AST活性的影響

大鼠注射D-GaIN溶液后，血清ALT、AST活性顯著增強（P＜0.01），表明D-GaIN引起了大鼠急性肝損傷，復制模型成功。與模型對照組比較，高劑量芹菜根提取物能顯著降低模型大鼠ALT與AST活性（P＜0.01），低劑量芹菜提取物能降低模型大鼠AST（P＜0.05），但對ALT的影響無顯著意義，提示芹菜根提取物高劑量組對大鼠急性肝損傷有明顯的保護作用。芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷血清ALT、AST活性的影響見表1。

3.2 芹菜根提取物對D-GaIN誘導的急性肝損傷模型大鼠肝組織MDA含量與SOD活性的影響

與正常對照組比較，模型對照組大鼠MDA含量顯著升高，SOD活性顯著下降（P＜0.01），表明復制模型成功。芹菜根高、低劑量組與模型對照組比較MDA含量顯著降低，SOD活性顯著升高（P＜0.01）。提示高、低劑量芹菜根提取物對D-GaIN誘導的大鼠急性肝損傷肝組織的MDA含量升高和SOD活性減弱有抑制作用。芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷肝組織MDA含量與SOD活性的影響見表2。

表1 芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷血清ALT、AST活性的影響（±s）Tab1 Effects of P.crispum root on the activities of ALT and AST in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

表1 芹菜根提取物對D-GaIN所致大鼠急性肝損傷血清ALT、AST活性的影響（±s）Tab1 Effects of P.crispum root on the activities of ALT and AST in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

與正常對照組比較：＊P＜0.01；與模型對照組比較：#P＜0.05，##P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model control group：#P＜0.05，##P＜0.01

組別正常對照組模型對照組聯(lián)苯雙酯組芹菜根提取物高劑量組芹菜根提取物低劑量組ALT/U·L-1 35.2±2.82 4 028.3±1 949.17＊941.6±1 131.33##1 205±456.84##5 106.8±3 297.11 n 10 10 10 10 10 AST/U·L-1 104.8±12.49 7 435.7±3 447.13＊936.2±930.28##1 178.5±592.44##5 149.5±2 736.22#

表2 芹菜根提取物對D-GaIN所致的急性肝損傷肝組織MDA含量與SOD活性的影響（±s）Tab2 Effects of P.crispum root on MDA content and SOD activity in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

表2 芹菜根提取物對D-GaIN所致的急性肝損傷肝組織MDA含量與SOD活性的影響（±s）Tab2 Effects of P.crispum root on MDA content and SOD activity in rats with D-galactosami induced acute liver injury（±s）

與正常對照組比較：＊P＜0.01；與模型對照組比較：#P＜0.01vs.normal control group：＊P＜0.01；vs.model control group：#P＜0.01

組別正常對照組模型對照組聯(lián)苯雙酯組芹菜根提取物高劑量組芹菜根提取物低劑量組SOD/U·L-1 178.52±5.05 80.35±10.00＊122.6±2.86#117.45±6.36#108.65±6.05#n 10 10 10 10 10 MDA/nmol·L-1 2.11±1.7 7.05±2.89＊2.71±0.92#2.86±1.04#4.93±1.23#

4 討論

肝臟損傷的原因大致可分為化學性損傷和免疫性損傷兩大類。D-GalN主要損傷胞質(zhì)內(nèi)細胞器，耗竭體內(nèi)磷酸尿苷，使依賴其生物合成的核糖蛋白、脂糖等物質(zhì)減少，限制細胞器及酶的生成和補充，使細胞器受損。由D-GalN引起的急性肝損傷模型常用作篩選抗肝炎藥物；D-GalN還可以產(chǎn)生氧化應激反應產(chǎn)生氧自由基，攻擊脂質(zhì)細胞膜，造成肝細胞脂質(zhì)過氧化性損傷[2]。

血清ALT水平的高低可靈敏反映肝細胞變性、壞死的程度，其大部分存在于細胞漿中[3]。AST主要位于線粒體，少部分位于細胞漿。當肝臟輕度受損、細胞膜通透性開始增加時，胞漿內(nèi)ALT、AST釋放入血，而線粒體內(nèi)AST則不釋放，只有肝細胞嚴重受損時才釋放入血。當肝實質(zhì)細胞結構受損，特別是實膜性結構受損時，胞漿內(nèi)ALT和線粒體內(nèi)AST釋放，從而引起血清ALT和AST升高[4]。

聯(lián)苯雙酯在臨床上已經(jīng)很少使用，但在很多動物藥理學實驗上依然廣泛應用，其原因是聯(lián)苯雙酯是專屬的降酶藥，而其降酶作用也比較明顯，其他作用的干擾程度較小，而本研究選用的檢測指標正是氨基轉(zhuǎn)移酶，因此筆者選用該藥作為陽性對照藥，主要是觀察對比芹菜根對肝損傷大鼠氨基轉(zhuǎn)移酶升高的抑制作用。

據(jù)筆者對維醫(yī)院醫(yī)師臨床使用該藥的調(diào)查結果來看，芹菜根是一種低毒性的藥物，且目前也沒有發(fā)現(xiàn)由于使用該藥而出現(xiàn)任何不良反應的情況。筆者對該藥做過半數(shù)致死量的實驗，發(fā)現(xiàn)無法測出半數(shù)致死量。因此，筆者又對該藥進行了限量實驗，大鼠禁食一夜后ig 5 g·kg-1（大鼠的胃所能容納的3 mL體積中藥物溶解的最大量）藥物浸膏，觀察14 d，沒有發(fā)現(xiàn)動物死亡。證實該藥物為低毒的受試物，劑量以＞5 g·kg-1表達。在選取劑量時，筆者選用了最大溶解量[5 g·kg-1，相當于臨床上人正常用藥（0.15 g·kg-1）的20倍]的60%，即3 g·kg-1為高劑量，50%的高劑量為低劑量作為實驗所用劑量。

實驗中選取7 d作為實驗天數(shù)是參考《藥理實驗方法學》第3版上規(guī)定的急性肝損傷的實驗天數(shù)。同時，在進行正式實驗之前，筆者以最常用的5、7、10、15 d做過預試，發(fā)現(xiàn)以上4個時間段所測結果沒有顯著區(qū)別，與《藥理實驗方法學》中規(guī)定的一致。

大鼠ip D-GalN后，血清ALT、AST活性與肝組織中MDA含量升高，SOD活性下降，顯著高于正常對照組。筆者以聯(lián)苯雙酯作為陽性對照，研究結果表明，聯(lián)苯雙酯組血清AST、ALT活性與肝組織中MDA含量顯著低于模型對照組，SOD活性高于模型對照組。給予芹菜根提取物后，各給藥組的血清ALT、AST活性與肝組織中MDA含量均低于模型對照組，SOD活性均高于模型對照組。說明維藥芹菜根對急性肝損傷有一定的保護作用。其中高劑量的作用更為顯著，顯示出一定的劑量依賴性。對于芹菜根護肝作用的機制，目前尚不清楚，還有待進一步的研究。

[1]徐叔云，陳 修.藥理實驗方法學[M].第3版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005：200.

[2]王迪生，高繼君.赤芍甘草沖劑對D-半乳糖誘導肝損傷的保護作用[J].中國臨床藥理學與治療學，2006，11（9）：1 026.

[3]李 萍，謝金鮮，林啟云.民族藥余甘子對D-半乳糖胺致小鼠肝損傷的影響[J].中國民族民間醫(yī)藥雜志，2003，6（2）：61.

[4]姜 潔，竇昌貴，張玉彬.注射用鯊魚肝再生因子對小鼠急性化學性肝損傷的影響[J].藥物生物技術，2004，11（5）：324.