鴨免疫重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5+Re-4)后抗體水平分析

陳桂英

(青海省西寧市城中區(qū)總寨獸醫(yī)站,青海 西寧 810003)

禽流感(AI)是由A型流感病毒引起的一種禽類傳染病。根據(jù)致病性的不同將禽流感分為高致病性禽流感(HPAI)和低致病性禽流感(IPAI),HPAI被世界動(dòng)物衛(wèi)生組織(OIE)列為A類傳染病,我國(guó)將其列為一類動(dòng)物疫病[1]。近幾年來(lái),禽流感在世界各地反復(fù)出現(xiàn),我國(guó)養(yǎng)禽業(yè)也一直受到禽流感的威脅。疫苗免疫仍是預(yù)防禽流感的有效手段之一,有關(guān)禽流感疫苗的免疫效果及抗體消長(zhǎng)規(guī)律國(guó)內(nèi)學(xué)者做了一些研究工作[2-5],但作為我國(guó)現(xiàn)階段使用的主要疫苗,重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)免疫鴨的抗體動(dòng)態(tài)變化尚未見(jiàn)報(bào)道。本試驗(yàn)分析了禽流感二價(jià)苗免疫鴨后抗體消長(zhǎng)規(guī)律,以期為該疫苗的推廣使用提供科學(xué)的試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 疫苗 重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)3批,批號(hào)分別為200807、200808、200809,哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司生產(chǎn)。

1.2 血凝抑制(HI)試驗(yàn)用抗原 禽流感病毒H5亞型HI試驗(yàn)Re-4株和Re-5株抗原由哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn),批號(hào)分別為 200702和200801。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清 哈爾濱維科生物技術(shù)開(kāi)發(fā)公司生產(chǎn)。

1.4 試驗(yàn)動(dòng)物 購(gòu)自北京平谷種鴨場(chǎng)的1周齡北京麻鴨。

1.5 分組和接種 將新購(gòu)進(jìn)的1周齡北京麻鴨分別隨機(jī)分成4組,每組10只。待鴨禽流感母源抗體衰減到4log2以下時(shí),將重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)按推薦劑量免疫接種(0.5 mL/只),每批次1組,頸部皮下注射,首免3周后加強(qiáng)免疫1次。免疫后每隔2周翅靜脈采血(1 m L/只)并分離血清。

1.6 HI抗體效價(jià)測(cè)定 按照“重組禽流感病毒H5亞型雙價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)制造及檢驗(yàn)試行規(guī)程”中血凝抑制(HI)試驗(yàn)操作術(shù)式進(jìn)行。

2 結(jié)果

疫苗免疫鴨后HI抗體消長(zhǎng)情況 不同批次的重組禽流感病毒H5亞型二價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)均能有效地刺激鴨產(chǎn)生HI抗體,而且HI抗體效價(jià)的消長(zhǎng)規(guī)律一致。免疫后第2周HI抗體效價(jià)達(dá)到2.7 log2～4.0 log2,第 4周達(dá)到4.0 log2～5.6 log2,加強(qiáng)免疫(首次免疫后第3周)后,各免疫組鴨HI抗體效價(jià)迅速升高,在加強(qiáng)免疫后第3周(首次免疫后第6周)達(dá)到最高值9.9 log2～11.0 log2。HI抗體效價(jià)在8周以后開(kāi)始下降。首次免疫后16周抗體水平5.2 log2～5.9 log2之間,首次免疫后20周以后抗體水平均在4log2以下。不同批次的疫苗免疫組各個(gè)采樣點(diǎn)的抗體效價(jià)t檢驗(yàn)差異不顯著(P＞0.05)。

圖1 禽流感二價(jià)苗免疫鴨后的抗體變化水平

3 分析和討論

鴨首次免疫后第 2周 HI抗體效價(jià)達(dá)到2.7log2～4.0log2,第4周達(dá)到4.0log2～5.6 log2。加強(qiáng)免疫后,免疫組鴨HI抗體效價(jià)迅速升高,首次免疫后第6周(加強(qiáng)免疫后3周)達(dá)到最高值9.9 log2～11.0log2。HI抗體效價(jià)在首次免疫后8周開(kāi)始下降,20周后抗體水平均降至4log2以下,此時(shí)不足以抵御外界病毒侵襲[3]。所以,鴨加強(qiáng)免疫后才能達(dá)到較高的抗體水平,而且下次免疫時(shí)間不能超過(guò)4個(gè)月。

同時(shí)期內(nèi)相應(yīng)免疫組的 HI抗體效價(jià)Re-4株均稍高于Re-5株,這可能與疫苗在制備過(guò)程中的抗原量配比有關(guān)。

本次試驗(yàn)表明,鴨免疫禽流感疫苗時(shí),要在首免20 d后加強(qiáng)免疫1次,方可抵御禽流感病毒侵襲。許多人認(rèn)為禽流感病毒不易引起水禽發(fā)病,有一些水禽養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)禽流感的預(yù)防不太重視,只是免疫1次甚至不免疫。劉超男等[6]的研究表明,禽流感病毒不僅對(duì)雞具有高致病性,而且對(duì)鴨也具有高致病性。因此,水禽養(yǎng)殖場(chǎng)不能忽視對(duì)禽流感的防控,加強(qiáng)疫苗免疫注射。本試驗(yàn)表明,鴨1次免疫禽流感二價(jià)苗后,抗體水平難以達(dá)到有效保護(hù)范圍,只有加強(qiáng)免疫后,抗體能夠保持較高水平,對(duì)禽流感具有較強(qiáng)的抵抗力。

由于受國(guó)家有關(guān)涉及HPAI研究要求的限制,本試驗(yàn)未進(jìn)一步做攻毒保護(hù)試驗(yàn),有關(guān)重組禽流感病毒H5亞型雙價(jià)滅活疫苗(H5N1,Re-5株+Re-4株)對(duì)鴨HPAI的攻毒保護(hù)情況沒(méi)有繼續(xù)進(jìn)行。關(guān)于這種疫苗對(duì)鴨的攻毒保護(hù)情況還有待進(jìn)一步試驗(yàn)研究。

[1] 世界動(dòng)物衛(wèi)生組織.服乳動(dòng)物、禽、蜜蜂 A和B類病診斷試驗(yàn)和疫苗標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)[M].農(nóng)業(yè)部畜牧獸醫(yī)局,譯.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社,2002:197-206.

[2] 靳月生,姚學(xué)軍,見(jiàn)滿振,等.蛋雞重組告知并行禽流感H 5N1(Re-1+Re-4)二價(jià)滅活疫苗免疫效果的評(píng)價(jià)[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2008,35(7):92-93.

[3] NY/T769-2004.高致病性禽流感免疫技術(shù)規(guī)范[S].

[4] 陳坤永,翁良樹(shù),張祥解,等.種鴿免疫禽流感疫苗HI抗體水平消長(zhǎng)規(guī)律的研究[J].養(yǎng)禽與禽病防治,2004(7):12-13.

[5] 何長(zhǎng)生,朱良強(qiáng),鄭舉,等.對(duì)重組禽流感滅活疫苗(H5N1亞型,Re-1)在家禽免疫效果方面的調(diào)研[J].中國(guó)獸藥雜志,2008,42(7):30-32.

[6] 劉超男,劉明,張?jiān)?等.H5N1亞型禽流感病毒的亞致病性研究[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué),2006(2):412-417.