NF-κB基因多態(tài)性與中國漢族2型糖尿病及其血管并發(fā)癥的關(guān)系研究

鄒伏英 王友蓮 何 丹 張 娜

（江西省人民醫(yī)院，江西 南昌 330006）

潛在的慢性亞臨床炎性反應(yīng)是胰島素抵抗（IR）和T2DM的發(fā)病機(jī)制。核因子-κB（NF-κB）是一種能與免疫球蛋白κ輕鏈基因增強(qiáng)子κB系列（GGGACTTTCC）特異性結(jié)合的核蛋白因子[1]，是炎癥信號通路的關(guān)鍵因子。NF-κB激活介導(dǎo)了許多炎性因子水平升高，從而引起IR和胰島β細(xì)胞功能損傷，最后導(dǎo)致T2DM發(fā)生。Apiradee等[2]研究表明，IκB/NF-κB炎癥通路活化是骨骼肌IR的機(jī)制。通常情況下，IκB通過自身的重復(fù)錨蛋白結(jié)構(gòu)域與NF-κB結(jié)合，導(dǎo)致NF-κB不能入核。但NF-κB能為眾多因素激活而游離出來，成為活性狀態(tài)進(jìn)入細(xì)胞核，調(diào)控炎性反應(yīng)和免疫應(yīng)答相關(guān)基因的表達(dá)[3]。本研究是探討NF-κB的（CA）基因多態(tài)性與2型糖尿?。═2DM）及其血管病變的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 病例選擇

對照組：我院健康體檢者中隨機(jī)選取，無糖尿病，年齡 40～80歲；T2DM組：我院住院患者中選取，符合1999年WHO糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)，年齡40～80 歲。漢族，無血緣關(guān)系。

1.2 材料

①熒光標(biāo)志物為 5’-FAM；②按穩(wěn)態(tài)模式評估法計(jì)算IR及β細(xì)胞功能；③DNA的抽提、 PCR 擴(kuò)增；④凝膠電泳分析；⑤基因型分析；⑥測序。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，正態(tài)資料兩組間比較采用t檢驗(yàn)，非正態(tài)資料應(yīng)用 Wilcoxon 檢驗(yàn)；計(jì)量資料組間采用χ2檢驗(yàn)以及 Fisher精確檢驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS13 .0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。P＜0.01 有顯著差異。

2 結(jié) 果

2.1 兩組間一般資料的比較

兩組年齡、性別構(gòu)成無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，T2DM組體重指數(shù)、腰臀圍比例、低密度脂蛋白、空腹血糖及胰島素均顯著高于對照組，而高密度脂蛋白低于對照組，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.2 兩組間基因頻率比較

①共發(fā)現(xiàn)了14個(gè)等位基因，將116bp上的等位基因稱為“A1”型，以此類推118bp（A2）、120 bp（A3）等；②A4 、A5、A7、A8、A9 、A10為常見等位基因。見圖1。

圖1 兩組間基因頻率比較

2.3 兩組間等位基因比較

①等位基因A5在對照組中明顯高于T2DM組；等位基因A9在對照組中明顯低于T2DM組，且均有顯著差異；②常見等位基因A4、A7、A8、A10在兩組中無顯著差異。

2.4 共發(fā)現(xiàn)40種基因型

A4 / A5及A5 / A5在 CON 組中均明顯高于T2DM 組；A4 / A9 在CON 組中明顯低于DM 組，且均有顯著差異。

2.5 單純T2DM組（72例）、T2DM并冠心病組（39例）、T2DM并腎病組（49例）三組比較發(fā)現(xiàn)，常見等位基因A4 、A5、A7、A8、A9、A10無顯著差異。

3 結(jié) 論

①A4 、A5、A7、A8、A9 、A10為中國漢族人常見等位基因；A9可能為參與T2DM發(fā)病的基因，而A5可能為T2DM保護(hù)基因。②正常人群以基因型A4/A5（16%）及A5/A5（12 %）為主；而T2DM患者以A4/A9基因型為主（22.9 %）。③ 糖尿病組間（不管有無并發(fā)癥）其等位基因分布無顯著差異。

4 討 論

胰島素抵抗和B細(xì)胞分泌缺陷是2型糖尿?。═2DM）發(fā)病機(jī)制的兩個(gè)主要環(huán)節(jié)。涉及胰島素抵抗的機(jī)制有很多，近10年來，針對大量人群的研究將胰島素抵抗與全身炎癥聯(lián)系起來。而NF-κB是一類能與多種基因啟動(dòng)子部位的κB點(diǎn)發(fā)生特異性結(jié)合促進(jìn)轉(zhuǎn)錄的DNA結(jié)合蛋白總稱，它幾乎存在所有細(xì)胞中，并能夠和許多基因啟動(dòng)子區(qū)域的固定核苷酸序列結(jié)合而啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄，在免疫應(yīng)答、炎性反應(yīng)、細(xì)胞凋亡和增殖等多種細(xì)胞活動(dòng)中起關(guān)鍵的作用。

隨著對T2DM的深入研究，部分已知致病基因的糖尿病從T2DM中獨(dú)立出去，但T2DM是一個(gè)多基因疾病，且大多數(shù)T2DM致病基因不明。 Horikawa等[4]應(yīng)用SNP 作為遺傳標(biāo)記通過基于連鎖不平衡的相關(guān)分析，在墨西哥裔美國人群和北歐人群中發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)DM易感基因，且與北歐人群的 T2DM 的遺傳易感性相關(guān)。近年來，國外大量研究發(fā)現(xiàn)炎癥因子NF-κB的基因多態(tài)性與T2DM的發(fā)病有關(guān)。1999 年，Ota[5]等確定了在NF-κB 1靠近編碼區(qū)存在這種短串聯(lián)重復(fù)序列，并且發(fā)現(xiàn)了13個(gè)等位基因。2001年，Hegaz[6]等通過對 321名英國人的研究發(fā)現(xiàn)18個(gè)等位基因并且認(rèn)為等位基因138bp在1型糖尿病的易感性中起到了重要作用。

本研究的結(jié)果共發(fā)現(xiàn)了14種等位基因，中國漢族人群以A4（122 bp）、A5（124 bp）、A7（128 bp）、A8（130bp）、A9（132 bp）、A10（134bp）等位基因?yàn)橹?；A5等位基因頻率在 CON 組中明顯高于 T2DM組，A9等位基因頻率在T2DM組中明顯高于CON 組。糖尿病組間，不管有無并發(fā)癥，其等位基因分布無顯著差異。由于病例資料少，故本研究并不能說明NF-κB的基因多態(tài)性在糖尿病血管并發(fā)癥中就無意義。期待更多的病例資料來證實(shí)。

[1] Singh H,Sen R,Baltimore D,et al.A nuclear factor binds to a conserved sequence motif in transcriptional control elements of immunoglobulin genes[J].Nature,1986,319 ( 6049 ) : 154 -158.

[2] Apiradee S,Roberts CC,Berria R,et al.Reduced skeletal muscle inhibitor of κB β content is associated with insulin resistance in subjects with type 2 diabetes reversal by exercise training[J].Diabetes,2006,55(3):760-767.

[3] Cardozo A K,Heimberg H,Heremans Y,et al.A comprehensive analysis of cytokine-induced and nuclear factor- B-dependent genes in primary rat pancreaticβ-cells[J].J Biol Chem,2001,276(52): 48879- 48886.

[4] Horikawa YOda N,Cox NJ,et al.Genetic variation in the gene encoding calpain-10 is assiociated with type 2 diabetes mellitus [J] .Nat Genet,2000,26 (2): 163 -175.

[5] Ota N.,Nakajima T,Shirai Y,et al.Isolation and radiation hybrid mapping of a highly polymorphic CA repeat sequence at the nuclear factor kappa - beta subunit (NF -κB 1) locus[J].J Hum Genet,1999,144(1):129.

[6] Hegazy DM,O' Reilly DA,Yang BM,et al.NF-κB polymorphisms and susceptibility to type 1 diabetes[J].Genes Immun,2001,2(3):304.