正交試驗優(yōu)選八角蓮中鬼臼類化合物的提取工藝研究

石磊嶺魏鴻雁*夏提古麗?阿不利孜賈曉光許晶晶徐曉琴

（1 新疆中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；2 新疆醫(yī)科大學(xué)，新疆 烏魯木齊 830002）

正交試驗優(yōu)選八角蓮中鬼臼類化合物的提取工藝研究

石磊嶺1魏鴻雁1*夏提古麗?阿不利孜1賈曉光1許晶晶2徐曉琴1

（1 新疆中藥民族藥研究所，新疆 烏魯木齊 830002；2 新疆醫(yī)科大學(xué)，新疆 烏魯木齊 830002）

目的研究回流提取法中各因素對八角蓮中鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素提取效果的影響。方法采用L9(34)正交試驗，以鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素含量為指標(biāo)，確定回流提取法各因素對八角蓮中有效物質(zhì)提取效果的影響，結(jié)果八角蓮最佳回流提取工藝為：料液比為1∶5，溫度80℃，90%乙醇提取3次每次1h。

鬼臼毒素；4’-去甲鬼臼毒素；正交試驗

八角蓮為小檗科植物八角蓮Dysosma versipellis（Hance.） M.Cheng的干燥根莖，是鬼臼類化合物常用的一種具有顯著生物活性的中藥，據(jù)《本草綱目》等記載，八角蓮為根莖入藥，藥用價值很高，具清熱解毒，抗毒蛇咬傷，祛風(fēng)除濕、活血止痛、鎮(zhèn)咳平喘等功效。鬼臼類化合物為其主要活性成分，屬芳基四氫萘木脂素類化合物，具有抗腫瘤、抗病毒活性[1,2]。

八角蓮中4’-去甲鬼臼毒素的提取工藝及含量測定罕見報道。本試驗應(yīng)用HPLC對八角蓮中鬼臼毒素與4’-去甲鬼臼毒素的提取工藝進(jìn)行優(yōu)化，為八角蓮合理利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 儀器與試藥

WATERS ALLIANCE E2695-2998-2424高效液相色譜儀（沃特世科技有限公司）。FA2004型電子天平（杭州大銘儀器有限公司）。甲醇為色譜純，水為重蒸餾水，其他試劑為分析純。對照品鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素自制，經(jīng)HPLC檢測均為單峰，面積歸一化法測定其含量，分別為99.35%，99.55%%。經(jīng)1H-NMR、13C-NMR測定，鑒定為鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素。

八角蓮藥材采自廣西，經(jīng)廣西民族醫(yī)藥研究所戴斌研究員鑒定為八角蓮[Dysosma versipellis（Hance）M.cheng]。

2 實驗方法

2.1 色譜條件

C18柱（250mm×4.6mm，5μm），25℃，流動相為甲醇∶水=50∶50，流速1.0mL/min，檢測波長207nm。

2.2 試驗步驟

準(zhǔn)確稱取八角蓮粗粉10g，加入一定量乙醇，在一定溫度下，在水浴鍋內(nèi)提取一定時間，提取液減壓濃縮至干。用甲醇溶解并稀釋至一定刻度，然后用微孔膜過濾制成樣品溶液。樣品溶液用HPLC法分析。樣品中鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒素的含量（質(zhì)量分?jǐn)?shù)，下同）計算公式為：

x=（x1/ x2）×100%

公式中：x為鬼臼毒素或4’-去甲鬼臼毒素含量，%；

x1 為樣品溶液中鬼臼毒素或4’-去甲鬼臼毒素質(zhì)量，g；

x2 為八角蓮粗粉質(zhì)量，g。

3 提取工藝

3.1 固液比

分別取八角蓮粉末4份，每份10g，分別加入30mL，50mL，70mL，100mL 80%的乙醇，70℃加熱回流提取1h，過濾，測定鬼臼毒素、4’-去甲鬼臼毒素的含量，結(jié)果見表1。

表1 固液比試驗選擇結(jié)果

3.2 乙醇體積分?jǐn)?shù)

分別取八角蓮粉末4份，每份10g，分別加入 60%，70%，80%，95%的乙醇100mL，70℃加熱回流提取1h，同前法，結(jié)果見表2。

表2 乙醇體積分?jǐn)?shù)試驗結(jié)果

3.3 提取時間

分別取八角蓮粉末4份，每份10g，加入80%的乙醇100mL，同前法，加熱回流提取lh，2h，3h，4h，同前法，結(jié)果見表3。

表3 提取時間試驗結(jié)果

3.4 提取次數(shù)

分別取八角蓮粉末4份，每份10g，加入80%的乙醇100mL，加熱回流提取lh，分別提取1次、2次、3次、4次，同前法，結(jié)果見表4。

表4 提取次數(shù)的實驗結(jié)果

3.5 溫度

分別取八角蓮粉末5份，每份10g，加入80%的乙醇100mL，加熱回流提取lh，提取溫度依次為50℃、60℃、70℃、80℃、90℃，同前法，結(jié)果見表5。

表5 提取溫度的實驗結(jié)果

3.6 正交實驗

根據(jù)上述試驗結(jié)果，以溫度、料液比、乙醇濃度，提取次數(shù)為考察因素，用L9（34）正交表進(jìn)行正交試驗（表6）。

表6 正交設(shè)計方案

3.7 正交試驗結(jié)果

對正交試驗數(shù)據(jù)作極差分析，結(jié)果見表7。

表7 鬼臼毒素，4’-去甲鬼臼毒素浸出率實驗方案表

3.8 鬼臼毒素、4’-去甲鬼臼毒素浸出率方差分析

由表7的R值分析，以鬼臼毒素為考察指標(biāo)，各因素對實驗結(jié)果的影響順序依次為A＞D＞B＞C，方差分析結(jié)果表明（表8），溫度、料液比、乙醇濃度、提取次數(shù)四因素均具有極顯著影響，最適宜的提取工藝為：A2B2C1D3。

由表8的R值分析，以4’-去甲鬼臼毒素為考察指標(biāo)，各因素對實驗結(jié)果的影響順序依次為A＞B＞D＞C，方差分析結(jié)果表明（表9），溫度、料液比、提取次數(shù)三因素具有極顯著影響，乙醇濃度具有顯著影響，最適宜的提取工藝為：A2B2C3D3。

結(jié) 論

實驗首次對八角蓮根莖中4’-去甲鬼臼毒素進(jìn)行了提取工藝研究，提取鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒素的最佳工藝應(yīng)為：溫度為80℃，料液比為1∶5，70%的乙醇提取3次，每次1h。

5 討 論

表8 鬼臼毒素含量方差分析

表4 -去甲鬼臼毒素含量方差分析

5.1 本實驗用回流法對八角蓮中鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒素進(jìn)行提取工藝優(yōu)化，考察了時間、乙醇體積分?jǐn)?shù)、固液比、提取次數(shù)4個重要影響因素進(jìn)行研究。以往文獻(xiàn)很少見對八角蓮Dysosma versipellis（Hance.） M.Cheng提取工藝的報道，僅對本屬其他植物有鬼臼毒素提取工藝報道[3]，與其相比，該方法更為合理。根據(jù)分析結(jié)果，八角蓮中有效物質(zhì)的最佳提取工藝為：溫度為80℃，料液比為1∶5，70%的乙醇提取3次，每次1h。

5.2 八角蓮是我國特有的瀕危三級保護(hù)多年生草本植物，鬼臼毒素和4’-去甲鬼臼毒為其主要成分，能溶于甲醇、丙酮、乙醇和三氯甲烷等，但是考慮到以后的后續(xù)藥用價值，以乙醇為溶媒，環(huán)保，可重復(fù)利用、提取效率高、成本低、操作簡單、適合大量生產(chǎn)。

[1]尚明英,鄭國鈞,徐珞珊,等.HPLC測定鬼臼類生藥中鬼臼木脂素的含量[J].中國藥科大學(xué)學(xué)報,1996,27(4):219-222.

[2]肖昌錢,楊淑貞,單文,等.HPLC比較不同產(chǎn)地生藥八角蓮中鬼臼類成分含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志,2009,26(8):659-661.

[3]張杰,周春山,劉韶,等.小八角蓮中鬼臼毒素的提取工藝研究[J].中藥材,2007,30(1):103-104.

R282.703

B

1671-8194（2011）33-0045-03

新疆維吾爾自治區(qū)科技支疆項目計劃項目(200991128)；烏魯木齊市科學(xué)技術(shù)計劃項目（P101310005）

*通訊作者：E-mail：whywlmq@sina.com