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    異槲皮苷抗抑郁作用實(shí)驗(yàn)研究

    2011-08-05 04:50:18張利斌張曉慶李玉平同濟(jì)大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院藥劑科上海200433上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院藥劑科上海200080
    藥學(xué)實(shí)踐雜志 2011年4期
    關(guān)鍵詞:小鼠實(shí)驗(yàn)

    張利斌,張曉慶,2,李玉平(.同濟(jì)大學(xué)附屬上海市肺科醫(yī)院藥劑科,上海 200433;2.上海交通大學(xué)附屬第一人民醫(yī)院藥劑科,上海 200080)

    抑郁癥是一種以顯著而持久的心境低落為主要特征的綜合癥,已經(jīng)成為危害現(xiàn)代人類(lèi)健康的重要疾病之一,據(jù)世界衛(wèi)生組織預(yù)測(cè),到2020年抑郁癥將成為僅次于心臟病的第二大疾?。?]。目前抑郁癥的治療主要采用化學(xué)藥物,存在療效較低,毒副作用大的弊端。國(guó)內(nèi)外在抗抑郁藥物的研制與開(kāi)發(fā)方面逐漸重視傳統(tǒng)藥物和天然藥物[2,3]。已有研究發(fā)現(xiàn)異槲皮苷具有一定的抗氧化,抗腫瘤和抗血小板凝集作用[4]。本實(shí)驗(yàn)利用經(jīng)典抗抑郁模型——小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)和小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)這兩個(gè)模型對(duì)異槲皮苷及10%含量的異槲皮苷、蘆丁混合物的抗抑郁活性作了初步的研究。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 ICR雄性小鼠,(24±2)g,由第二軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供,飼養(yǎng)在25℃條件下,實(shí)驗(yàn)前穩(wěn)定3 d,自由進(jìn)食水。

    1.2 藥物 鹽酸氟西汀(fluoxetine hydrochloride,美國(guó)Lilly公司;純度>98%),異槲皮苷、10%異槲皮苷與蘆丁混合物(第二軍醫(yī)大學(xué)天然藥物化學(xué)教研室),經(jīng)1H NMR,13C NMR確證結(jié)構(gòu),經(jīng)高效液相檢測(cè),前者純度大于95%,后者異槲皮苷含量為10%。

    2 實(shí)驗(yàn)方法

    2.1 藥液配制和給藥方法 所有藥物均用去離子水溶解,鹽酸氟西汀給藥劑量為20 mg/kg,異槲皮苷給藥劑量為 0.3、0.6、0.9、1.5 mg/kg 4 個(gè)劑量,10%異槲皮苷蘆丁混合物劑量分別為3、6、9、18、36 mg/kg 5個(gè)劑量。所有藥物均為灌胃給藥。

    2.2 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)[5]①實(shí)驗(yàn)裝置:直徑10 cm,高20 cm的大燒杯,內(nèi)裝高10 cm的水,水溫控制在(25±1)℃左右,每次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)后換水。②分組方法:每組10只小鼠,5組,共50只小鼠。灌胃給藥,給藥量0.1 ml/10 g。③實(shí)驗(yàn)方法:實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前30 min給藥,然后將小鼠放入玻璃缸中游泳6 min,記錄后4 min的不動(dòng)時(shí)間。整個(gè)過(guò)程用數(shù)碼攝像記錄,結(jié)果評(píng)判由非本實(shí)驗(yàn)人員完成,以保證結(jié)果客觀。

    2.3 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)[5]①實(shí)驗(yàn)裝置:帶有橫杠的實(shí)驗(yàn)架,橫杠距平面25 cm,小鼠懸掛在橫杠下約10 cm處,距平面15 cm。②分組方法:每組10只小鼠,5組,共50只小鼠,灌胃給藥,給藥量0.1 ml/10 g。③實(shí)驗(yàn)方法:實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前30 min給藥,然后將小鼠懸掛在橫杠上6 min。用數(shù)碼攝像記錄實(shí)驗(yàn)過(guò)程,由非本實(shí)驗(yàn)人員計(jì)算絕對(duì)不動(dòng)時(shí)間,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn),比較給藥組與空白組是否有顯著差異。

    2.4 小鼠自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)[5]使用小鼠自由活動(dòng)計(jì)時(shí)器,儀器分為4個(gè)直徑15 cm的圓柱形暗室,小鼠給藥30 min后,每個(gè)暗室放一只,儀器自動(dòng)記錄5 min內(nèi)小鼠自主運(yùn)動(dòng)情況。動(dòng)物給藥方法與劑量均與活性實(shí)驗(yàn)一致。

    3 結(jié)果

    3.1 自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果 如表1所示,各給藥組小鼠的自主運(yùn)動(dòng)情況與空白組之間無(wú)顯著差異,包括陽(yáng)性對(duì)照藥鹽酸氟西汀,說(shuō)明實(shí)驗(yàn)結(jié)果并非所試藥物的神經(jīng)興奮性所致。

    表1 各組小鼠自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=10, )

    表1 各組小鼠自主運(yùn)動(dòng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=10, )

    3.2 小鼠強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果 異槲皮苷和10%異槲皮苷分別進(jìn)行強(qiáng)迫游泳實(shí)驗(yàn),結(jié)果見(jiàn)表2,表3。

    表2 異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    表2 異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    1)P <0.05,2)P <0.001;與空白組相比較。

    表3 10%異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    表3 10%異槲皮苷對(duì)小鼠強(qiáng)迫游泳不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    1)P <0.05,2)P <0.001;與空白組相比較。

    3.3 小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)結(jié)果 異槲皮苷和10%異槲皮苷分別進(jìn)行小鼠懸尾實(shí)驗(yàn),根據(jù)實(shí)驗(yàn)統(tǒng)計(jì)結(jié)果,異槲皮苷和10%異槲皮苷與空白相比能夠顯著降低小鼠的懸尾不動(dòng)時(shí)間,結(jié)果見(jiàn)表4,表5。

    表4 異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    表4 異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    1)P <0.05,2)P <0.001;與空白組相比較。

    表5 10%異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    表5 10%異槲皮苷對(duì)小鼠懸尾不動(dòng)時(shí)間的影響(n=10, )

    1)P<0.001;與空白組相比較。

    4 討論

    小鼠強(qiáng)迫游泳和懸尾模型,都提供了一個(gè)無(wú)可回避的壓迫環(huán)境,實(shí)驗(yàn)中小鼠所體現(xiàn)出來(lái)的不動(dòng)狀態(tài),反映了一種被稱(chēng)之為“行為絕望和扭曲(behavioral despair and variant)”或“對(duì)強(qiáng)壓環(huán)境適應(yīng)的失敗(failure to adapt to stress)”狀態(tài)[6]。這兩種行為絕望模型對(duì)絕大多數(shù)抗抑郁藥敏感,操作簡(jiǎn)單快捷,被廣泛用于該類(lèi)藥物的初篩[7]。本實(shí)驗(yàn)使用這個(gè)經(jīng)典模型對(duì)異槲皮苷及10%異槲皮苷蘆丁混合物進(jìn)行了初步的抗抑郁活性篩選,發(fā)現(xiàn)了0.3、0.6 mg/kg異槲皮苷和3 mg/kg的10%異槲皮苷蘆丁混合物能夠顯著減少小鼠游泳和懸尾的不動(dòng)時(shí)間,表現(xiàn)出一定的抗抑郁作用,其活性強(qiáng)度與臨床上常使用的抗抑郁藥鹽酸氟西汀相當(dāng)。其中異槲皮苷的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致[8],而10%異槲皮苷蘆丁混合物的抗抑郁作用則是本文首次發(fā)現(xiàn)。

    大多數(shù)抑郁癥患者生物學(xué)改變是由于下丘腦-垂體-腎上腺軸激活,已證實(shí)是促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)和皮質(zhì)醇分泌過(guò)多所致。Butterweck等[9]的研究發(fā)現(xiàn)灌胃給予異槲皮苷0.6 mg/kg 2周后其循環(huán)血漿中ACTH和皮質(zhì)醇的水平下調(diào)40%~70%。有研究認(rèn)為異槲皮苷消除體內(nèi)自由基是中藥抗抑郁的部分作用機(jī)制[10]。通過(guò)以上研究結(jié)合國(guó)內(nèi)外文獻(xiàn)報(bào)道,筆者推測(cè)異槲皮苷和10%異槲皮苷蘆丁混合物的抗抑郁作用機(jī)制可能如下:①抑制下丘腦-垂體-腎上腺軸多度激活,下調(diào)外周血中的ACTH和皮質(zhì)醇的水平,影響抑郁大鼠腦組織中前額葉5-羥色胺和多巴胺含量而發(fā)揮抗抑郁作用。②異槲皮苷具有一定的抗氧化、抗腫瘤和抗血小板凝集作用,從而具有一定大腦保護(hù)作用,這些作用可能與其抗抑郁作用機(jī)制有關(guān)。因此,異槲皮苷和10%異槲皮苷蘆丁混合物在抗抑郁方面具有良好的開(kāi)發(fā)前景,其抗抑郁作用機(jī)制方面有待更深入的探討。

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