RP-HPLC測定鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸的含量及有關(guān)物質(zhì)

張 賀 羅永煌 田翠翠 戈振凱 張玉潔 羅玲艷

（西南大學藥學院，重慶 400715）

鹽酸卡替洛爾（Carteolol Hydrochloride）最早由日本大冢制藥株式會社于1972年研制成功，1991年收載于日本第十二版藥局方[1]，劑型有片劑、顆粒劑、滴眼劑和緩釋膠囊劑等。中國藥典從2000年版開始收載鹽酸卡替洛爾，目前僅有滴眼劑上市。在日本、美國等，鹽酸卡替洛爾已廣泛用于高血壓、心律失常、心絞痛、心肌梗死以及心臟神經(jīng)癥（Cardiac Neurosis）和小兒法洛四聯(lián)癥（Congenital Fetralogy of Fallot）等的治療[2,3]，是國外目前唯一一個上市的用于治療心臟神經(jīng)癥的β受體阻斷劑，有效率可達73%以上[4]。本課題組與重慶市北碚現(xiàn)代應用藥物研究所合作，研發(fā)了鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸，該緩釋微丸能夠?qū)崿F(xiàn)藥物12h內(nèi)緩慢釋放，提供平穩(wěn)的血藥濃度，減少服藥次數(shù)，提高患者的依從性。迄今為止，國內(nèi)外未見鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸的研究報道，僅有本課題組申請的鹽酸卡替洛爾緩釋微丸專利[5]。

2010年版中國藥典采用電位滴定法測定鹽酸卡替洛爾原料藥的含量，采用紫外-可見分光光度法測定鹽酸卡替洛爾滴眼液含量[6]，本文參照美國藥典對鹽酸卡替洛爾普通片的含量測定方法[7]，建立了RPHPLC測定鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸含量及有關(guān)物質(zhì)的方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高效液相色譜儀（SPD-M20A檢測器，LC-20AD泵，日本島津公司）；PHS-3C型酸度計（上海虹益儀器儀表有限公司）；藥品強光照射實驗箱（重慶市永興實驗儀器廠）；HitachiU-1800型紫外分光光度計（日本Hitachi公司）。

1.2 試藥

鹽酸卡替洛爾工作對照品（重慶北碚現(xiàn)代應用藥物研究所，含量99.86%，批號：100801）；鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸（自制，批號為110701、110702和110703）；乙腈為色譜純（天津四友精細化學品有限公司）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：VP-ODSC18柱（4.6mm×150mm，4.6μm）；流動相：0.067%的Na2HPO4溶液（H3PO4調(diào)節(jié)pH至3.0）-乙腈（87∶13）；流速：1mL/min；檢測波長：251nm；柱溫30℃。進樣量：20μL；進樣前過0.22μm的微孔濾膜。理論板數(shù)按鹽酸卡替洛爾峰計算不低于3000，分離度＞1.5，鹽酸卡替洛爾色譜圖，見圖1。

圖1 鹽酸卡替洛爾色譜圖

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液

精密稱取鹽酸卡替洛爾工作對照品適量，加流動相溶解并定容制成0.1mg/mL溶液，精密量取5mL置50mL容量瓶中，用流動相定容，搖勻，即為對照品溶液（10μg/mL）。

2.2.2 供試品溶液

取鹽酸卡替洛爾緩釋微丸，研細，精密稱定約相當于10mg鹽酸卡替洛爾的粉末，置100mL容量瓶中，加流動相適量，機械振搖1h，再以流動相定容至刻度，搖勻，過濾，從續(xù)濾液中精密量取10mL置于100mL容量瓶中，用流動相定容至刻度，搖勻，即為供試品溶液。

2.2.3 空白輔料溶液

按處方比例稱取輔料制成空白微丸，照“2.2.2”項下方法制備空白輔料溶液。

2.3 專屬性試驗

稱取鹽酸卡替洛爾緩釋微丸粉末適量，配制濃度為500μg/mL樣品溶液，量取樣品溶液5mL，分別經(jīng)2mL的30%過氧化氫溶液（室溫放置3h），4500Lx±500Lx光照12h，2mL的1mol/L氫氧化鈉溶液100℃水浴加熱3h，2mL的1mol/L鹽酸溶液100℃水浴加熱3h，100℃水浴加熱3h處理，作為氧化破壞、光破壞、堿破壞、酸破壞和高溫破壞溶液。照“2.1”項下色譜條件測定其含量，記錄色譜圖。結(jié)果，鹽酸卡替洛爾在高溫、強光照射、酸性條件下較穩(wěn)定；在氧化、堿性條件下有降解產(chǎn)物出現(xiàn)，其色譜圖，見圖2。

圖2 鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸破壞性試驗色譜圖

2.4 線性關(guān)系考察

按“2.2.1”項下方法配制2、4、10、20、40μg/mL 5個不同濃度的對照品溶液，以濃度（μg/mL）為X軸，以峰面積為Y軸，繪制標準曲線。結(jié)果，鹽酸卡替洛爾濃度在2～40μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。線性回歸方程為：Y=33419X+4040.5，r=0.9998。

2.5 日內(nèi)精密度

精密吸取對照品溶液20μL，注入液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，按鹽酸卡替洛爾峰面積計算RSD為0.09%。

2.6 重復性

按“2.2.2”方法配制6份10μg/mL樣品溶液，濾過，進樣，記錄色譜圖，鹽酸卡替洛爾峰面積的RSD為0.68%。

2.7 回收率試驗

稱取處方量鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸空白輔料3份，分別加入鹽酸卡替洛爾對照品40mg、50mg、60mg，混合均勻后，研細，分別稱取細粉適量至100mL量瓶中，加流動相適量，機械振搖1h，再定容至刻度，使其濃度分別為0.4mg/mL、0.5mg/mL和0.6mg/mL，過濾，取續(xù)濾液作為待測溶液，在上述色譜條件下，進樣測定，測得鹽酸卡替洛爾3種濃度的回收率（n=3）分別為101.2%（RSD=0.35%）、101.1%（RSD=0.41%）、101.4%（RSD=0.32%），平均回收率（n=9）為101.2%（RSD=0.36%）。

2.8 樣品溶液穩(wěn)定性

取同一批供試品溶液，分別于0、4、8、12、18、24h進樣20μL測定峰面積，RSD為0.16%，結(jié)果表明樣品溶液在室溫條件下，24h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 最低檢測限和最低定量限

取“2.2.1”項下對照品溶液，加流動相不斷稀釋，記錄峰面積，在信噪比S/N為3∶1測得最低檢出限為0.4ng，在信噪比S/N為10∶1測得最小定量限為1.6ng。

2.10 樣品含量測定

取3批樣品，每批三份，照“2.2”項下方法制備供試品溶液及對照品溶液，分別進樣20μL，記錄色譜圖。按外標法以峰面積計算鹽酸卡替洛爾的含量。結(jié)果，見表1。

表1 鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸含量及有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果（%，n=3）

2.11 有關(guān)物質(zhì)檢查

精密稱取鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸細粉適量（約相當于鹽酸卡替洛爾50mg），照“2.2.2”項下方法制成0.5mg/mL的溶液作為供試品溶液，將供試品溶液用流動相稀釋100倍，作為1%的自身對照液。分別吸取上述兩種溶液各20μL注入液相色譜儀，計算除鹽酸卡替洛爾以外的各雜質(zhì)峰面積總和，并與對照液主成分峰面積比較，以不加校正因子的自身對照法計算總雜質(zhì)含量，3批樣品的有關(guān)物質(zhì)含量均低于0.2%，符合藥典相關(guān)要求，結(jié)果見表1，色譜圖，見圖3。

圖3 鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸有關(guān)物質(zhì)色譜圖

3 討 論

3.1 檢測波長的選擇

照2.2.1項下配置鹽酸卡替洛爾10μg/mL的溶液，以溶劑為空白，在400～200nm波長范圍內(nèi)測定紫外吸收光譜。根據(jù)測定結(jié)果可知鹽酸卡替洛爾在215nm和251nm 波長處均有最大吸收，分別以215nm和251nm作為檢測波長，發(fā)現(xiàn)在251nm波長處雜質(zhì)峰與主峰分離良好，且能避免溶劑的末端吸收，故選用251nm作為檢測波長。

3.2 穩(wěn)定性

鹽酸卡替洛爾在強氧化條件下不穩(wěn)定，在堿性條件下會產(chǎn)生少量雜質(zhì)；在酸性、高溫和強光照射條件下比較穩(wěn)定。因此，鹽酸卡替洛爾原料藥及其制劑在使用和儲存過程中，應避免強氧化和強堿性環(huán)境。

3.3 有關(guān)物質(zhì)

2010年版中國藥典采用薄層色譜法，對鹽酸卡替洛爾原料藥進行有關(guān)物質(zhì)檢查，規(guī)定有關(guān)物質(zhì)不得超過0.2%；英國藥典[8]采用高效液相色譜法對鹽酸卡替洛爾原料藥和滴眼劑進行了有關(guān)物質(zhì)檢查。本文對3批鹽酸卡替洛爾骨架緩釋微丸進行了總有關(guān)物質(zhì)考察，結(jié)果顯示，3批樣品有關(guān)物質(zhì)總量均小于0.2%，符合2010年版中國藥典對鹽酸卡替洛爾原料藥有關(guān)物質(zhì)的控制要求。

[1]Kikuchi T,Uwahodo Y,Tottori K,et al.The attenuating effect of carteolol hydrochloride,a β-adrenoceptor antagonist,on neurolepticinduced catalepsy in rats[J].Psychopharm,1997,131(2):108-114.

[2]黃賢勝,宮春明,趙紅蓮,等.心血管神經(jīng)癥診治進展[J].中西醫(yī)結(jié)合心腦血管病雜志,2001,8(1):93-95.

[3]劉永欣.了解心臟神經(jīng)癥[J].中國臨床醫(yī)生雜志,2008,36(3):40.

[4]Ohtsuka pharmaceutical CO.Specif i cations of carteolol hydrochloride tablets[Z].2008,10.

[5]羅永煌,喬彥茹,聶延君,等.鹽酸卡替洛爾微丸及其制備方法與制劑[P].中國:101690718,2010-04-07.

[6]國家藥典委員會.中國人民共和國藥典2010版第二部[S].北京:化學工業(yè)出版社,2010:661.

[7]The United States Pharmacopeial Conventio.USA Pharmacopoeia(USP32–NF27).Carteolol Hydrochloride Tablets[S].USP32-NF27:1810.

[8]British Pharmacopoeia2009 (英國藥典2009).Carteolol Hydrochlo ride[S].2009:1080.