龍爪槐角與槐角對照藥材中蘆丁和槐角苷的比較研究

劉景東， 王志玲， 勾凌燕， 王 憬， 劉惠敏， 王秀卿

(第四軍醫(yī)大學(xué)白求恩軍醫(yī)學(xué)院，河北石家莊050081)

槐角Sophorae Fructus，冬季采摘自槐Sophorae L.的成熟果實，《神家本草經(jīng)》列為上品，是我國傳統(tǒng)的中藥材，也是《中華人民共和國藥典》歷版收載品種［1］?；苯侵鳟a(chǎn)于我國北部，華南及西南地區(qū)亦產(chǎn)，以河南豫西山區(qū)品質(zhì)最佳?；睒渖L緩慢，木材經(jīng)濟價值低，農(nóng)民從不把槐樹作為藥用經(jīng)濟樹種，廣大農(nóng)村地區(qū)槐資源接近枯竭。目前有限的槐資源主要集中在城鄉(xiāng)道路兩旁。2010年元月后槐角價格節(jié)節(jié)攀升，從年初至8月價格上漲70%以上且供不應(yīng)求［2］。龍爪槐Sophora japonica var.pendula Loud.是槐在自然界中受到雷擊、動物的啃食、病蟲傷害等外部因素刺激突然變異而形成的新品種［3］，北京已有幾百年的種植歷史。文獻［4］對龍爪槐角與槐角對照藥材中主要的黃酮苷元槲皮素、山柰酚與染料木素進行的比較研究，初步探索了龍爪槐角替代槐角使用的可行性。本實驗參照王志玲等的方法［5］，考察了未水解的龍爪槐角主要黃酮苷和異黃酮苷成分，繪制了龍爪槐角與槐角對照藥材在260nm HPLC色譜圖，測定了龍爪槐角中的蘆丁與槐角苷，進一步為龍爪槐角替代槐角使用提供理論依據(jù)，也為開發(fā)新的槐資源提供參考。

1 儀器與藥品

高效液相色譜儀(美國 Waters，1525高壓雙泵系統(tǒng)，2487雙波長紫外檢測器，Breeze色譜數(shù)據(jù)工作站);AG135電子分析天平(d=0.01 mg/0.1 mg，瑞士);索氏提取器(天津玻璃儀器廠)。

龍爪槐角采自石家莊市不同地點(每處選10棵槐樹，每樹向陽面采摘一枝，去除枝葉后，混勻，常水洗凈，80℃烘干備用。采摘日期:2008-12-15)。經(jīng)本院藥學(xué)教研室張書峰博士鑒定為龍爪槐的果實。蘆丁、槐角苷對照品及槐角對照藥材(中國藥品生物制品檢定所，批號:100080-200606、11695-200501、121214-0101);甲醇和乙腈為色譜純級，高純水由Millipore純水器制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Diamonsil C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇 -1%冰醋酸-乙腈(57 ∶38 ∶5，v/v);體積流量1.0 mL/min;檢測波長260 nm;柱溫為室溫。

2.2 對照品溶液的制備 準確稱取減壓干燥至恒質(zhì)量的蘆丁和槐角苷對照品各10 mg，分別置于50 mL量瓶中，甲醇溶解后定容即為標準貯備液。取上述溶液，配成蘆丁和槐角苷質(zhì)量濃度均為2 μg/mL的混合溶液，作為對照品溶液。

2.3 樣品溶液的制備 分別精密稱取0.5 g干燥恒質(zhì)量的龍爪槐角及槐角對照藥材細粉，濾紙包成小包，置150 mL索氏提取器中，加甲醇90 mL，100℃水浴連續(xù)提取10 h，冷卻后用甲醇定容至100 mL，0.45 μm濾膜過濾，作為樣品溶液。

2.4 蘆丁和槐角苷保留時間的確定 取蘆丁和槐角苷對照品溶液，按2.1項條件，進樣10 μL，進行色譜分析，計算蘆丁與槐角苷的保留時間分別為12.540、14.881(n=3)。

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 回歸方程的計算及線性關(guān)系考察 分別精密吸取貯備液適量，用甲醇配制成蘆丁和槐角苷質(zhì)量濃度分為0.08、0.1、0.125、0.25、0.50、1.0、1.5、2.0 μg/mL 的混合溶液，按2.1項下條件進樣10 μL，每個質(zhì)量濃度重復(fù)3次，記錄色譜圖。以峰面積(A)與質(zhì)量濃度(C)進行線性回歸，蘆丁質(zhì)量濃度在0.08 ～1.0 μg/mL 線性關(guān)系良好，A=144 ×102C+195，r=0.9996，槐角苷在 0.125 ～ 2.0 μg/mL 線性關(guān)系良好，A=500 ×102C+105，r=0.9999。

2.5.2 儀器精密度考察 取蘆丁、槐角苷分別為0.5、1.0 μg/mL的混合溶液，按2.1項中色譜條件，在一天內(nèi)不同時間分別測定5次，計算日內(nèi)誤差;連續(xù)5 d每天測定1次，計算日間誤差，蘆丁的日內(nèi)和日間誤差RSD分別為0.74%和1.23%，槐角苷的日內(nèi)和日間誤差 RSD分別為0.75%和1.65%，表明儀器精密度良好。

2.5.3 加樣回收率試驗 取已測定蘆丁與槐角苷的龍爪槐角樣品粉末(龍爪槐角-1)6份，每份0.5 g，精密稱定，分別精密加入不同質(zhì)量的蘆丁與槐角苷對照品，按2.3項方法制備供試品溶液，按2.1項色譜條件進樣測定，測定峰面積代入回歸方程計算加樣平均回收率，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.6 龍爪槐角、槐角對照藥材HPLC色譜圖的繪制及蘆丁、槐角苷的測定 精密量取樣品溶液適量，用甲醇稀釋，使其濃度在線性范圍內(nèi)，按2.1項中所述條件，進樣量為10 μL作HPLC分析，每個樣品重復(fù)3次，HPLC色譜圖結(jié)果見圖1和圖2。將蘆丁和槐角苷峰面積的平均值代入回歸方程分別計算，結(jié)果見表2。

圖1 龍爪槐角樣品色譜圖

圖2 槐角標準藥材樣品色譜圖

3 討論

3.1 研究證實，槐角中的主要活性成分為黃酮與異黃酮類化合物［6］。黃酮類化合物的藥理學(xué)作用涵蓋抗氧化、抗輻射、抗腫瘤、抗炎、抗疲勞和免疫調(diào)節(jié)等諸多方面［7-10］?；苯侵械狞S酮類化合物多達27種［11］，種類及含量多于銀杏葉［12］，異黃酮的量遠遠高于大豆［13］。劉景東等以往的研究結(jié)果顯示龍爪槐角中主要的黃酮苷元，槲皮素、染料木素和山柰酚分別為其干質(zhì)量的 0.3%、3.04% 和 2.74%［4］。本實驗結(jié)果顯示龍爪槐角中主要的黃酮苷，蘆丁與槐角苷的平均質(zhì)量分數(shù)分別為0.45%和4.44%。兩者含有量均高于銀杏葉和大豆。槐角中豐富的黃酮類化合物種類以及多方面的藥理學(xué)活性極大促進了槐資源的研究、開發(fā)和利用，使其具有廣闊的應(yīng)用前景。

表2 龍爪槐角與槐角對照藥材樣品中蘆丁與槐角苷的測定結(jié)果

3.2 以往的研究結(jié)果［4］和本實驗的研究結(jié)果均顯示龍爪槐角與槐角對照藥材總黃酮提取物水解前后的HPLC色譜圖峰型基本一致，主要有效成分的量接近，提示兩者具有極為相似的黃酮類化合物譜型，有一定的可替代性。此外，龍爪槐多種植于機關(guān)大院、大專院校、公園綠地，生態(tài)環(huán)境好，污染少，植物資源品質(zhì)優(yōu)于種植于道路兩旁的國槐，且龍爪槐樹冠低，極易采摘，資源極為豐富，具有開發(fā)利用的價值。本實驗為龍爪槐角替代槐角應(yīng)用提供了實驗依據(jù)。龍爪槐角如能與槐角通用，將會極大豐富現(xiàn)有槐資源，提高槐角的質(zhì)量，從根本上解決槐角資源緊張的問題。龍爪槐角能否完全替代槐角還需進一步藥理學(xué)實驗證實。

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