大黃酚固體分散體的制備及體外溶出研究

韓 剛， 劉 莉， 康 欣， 王彥雪， 趙 媛， 肖 倩， 郭肖菲

(華北煤炭醫(yī)學院藥學系，河北省煤礦衛(wèi)生與安全重點實驗室，河北唐山063000)

大黃酚(chrysophanol)是中藥大黃的主要活性成分之一，具有抗菌、止咳、止血、抗脂質(zhì)過氧化、抗衰老等多種藥理作用［1-2］。但大黃酚不溶于水，微溶于乙醇等有機溶劑，體內(nèi)吸收差，生物利用度低［3］。改進難溶性藥物溶出度的方法較多，其中利用固體分散技術較為常用［4-5］。本實驗以聚乙二醇6000為載體，制備了大黃酚固體分散體，考察了大黃酚固體分散體在體外的溶出性質(zhì)。

1 儀器與材料

D/max-rc型X-射線分析儀器(日本Rigaku公司);DSC-60差示掃描量熱儀(日本Shimadzu公司);1100高效液相色譜儀(美國 Agilent公司);BT-125D電子天平(Sartorius公司);氣浴恒溫振蕩器(江蘇金壇市榮華儀器公司);RCZ-8A藥物溶出儀(天津大學精密儀器廠)。

大黃酚對照品(中國藥品生物制品檢定所，供定量測定用，批號:110796-200716);大黃酚原料藥(南京澤朗有限公司，純度＞97%);聚乙二醇6000(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)(北京化學試劑廠);甲醇為色譜純(Fisher公司);其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 供試品的制備

2.1.1 大黃酚-PEG固體分散體的制備 將大黃酚溶解于適量四氫呋喃中，再加入適量95%乙醇制成大黃酚溶液，將PEG6000加熱熔融，將大黃酚溶液倒入熔融的PEG6000中攪拌均勻，室溫冷卻。按上述方法制備大黃酚與PEG6000質(zhì)量比為1∶2、1∶4、1∶6的固體分散體備用。

2.1.2 大黃酚-PVP固體分散體的制備 將大黃酚與載體PVP分別按質(zhì)量比1∶2、1∶4、1∶6的比例，加入適量的無水乙醇使其完全溶解，溶液轉(zhuǎn)入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中，60℃將溶劑蒸干，得大黃酚-PVP固體分散體，備用。

2.1.3 物理混合物的制備 將大黃酚與載體PVP、PEG分別按質(zhì)量比1∶2、1∶4、1∶6的比例研細，過60目篩即得不同載體，不同比例的大黃酚與載體的物理混合物。

2.2 大黃酚測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:Agilent extend-C18柱(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水-冰醋酸(77 ∶22 ∶1);體積流量 1.0 mL/min;柱溫:室溫;檢測波長:428 nm［5］;進樣量:20 μL。

2.2.2 標準曲線的繪制 準確稱取干燥后的大黃酚對照品約3 mg于25 mL量瓶中，甲醇定容即為大黃酚對照品溶液。取對照品溶液適量，分別稀釋成 0.1、1.0、2.5、4.0、8.0、10.0、15.0、20μg/mL，20μL 進樣，測定大黃酚的峰面積 A，以大黃酚質(zhì)量濃度C對峰面積A進行回歸，得回歸方程:A=35.76C-6.58，r=0.9994，線性范圍 1 ～20 μg/mL。

2.2.3 精密度實驗 分別準確稱取干燥后的大黃酚-PVP固體分散體、大黃酚-PEG固體分散體各約4 mg，分別置于25 mL量瓶中，甲醇溶解，即為供試品溶液。取供試品溶液于同日內(nèi)連續(xù)進樣6次測定 (時間間隔為2 h)，測得大黃酚-PVP固體分散體的RSD為1.44%，大黃酚-PEG固體分散體RSD為1.78%，表明所建立的大黃酚測定方法重復性良好。

2.2.4 回收率實驗 分別準確稱取大黃酚-PVP固體分散體、大黃酚-PEG固體分散體約4 mg，各9份，分別置于25 mL量瓶中，分別精密加入大黃酚對照品溶液適量，制成低、中、高3種質(zhì)量濃度的供試品溶液，20 μL進樣，測定大黃酚的峰面積，計算大黃酚-PVP固體分散體低、中、高3種質(zhì)量濃度的回收率分別為 97.52%、98.60%、98.75%;大黃酚-PEG固體分散體低、中、高3種濃度的回收率分別為99.11%、101.4%、99.73%，表明建立的大黃酚測定方法回收率良好。

2.3 樣品溶解度測定 在具塞三角燒瓶中分別加入10 mL人工腸液，分別加入過量的大黃酚、大黃酚固體分散體、大黃酚與不同載體的物理混合物，置于氣浴振蕩器中，37℃振蕩72 h，0.45μm微孔濾膜過濾，進樣測定大黃酚的峰面積，根據(jù)標準曲線計算溶解度。見表1。

表1 樣品的溶解度(37℃)

2.4 樣品溶出度測定 照2010年版《中國藥典》二部附錄XC第一法測定溶出度［7］，以900 mL含0.2%十二烷基硫酸鈉人工腸液為溶出介質(zhì)，溫度(37±0.5)℃，轉(zhuǎn)速100 r/min。取各處方固體分散體適量，取大黃酚、大黃酚與載體的物理混合物適量(相當于含大黃酚 3.5 mg)，分別于 3、6、10、15、20、30、40、60 min 取樣 2 mL，立即用 0.45μm 微孔濾膜過濾，同時補充等溫度等體積溶出介質(zhì)。20μL進樣測定，將測定換算成累積溶出百分率。

2.5 載體的選擇 以聚乙二醇6000為載體制備的大黃酚固體分散體其溶出速率較大黃酚原料藥均提高，其中以PEG 6000為載體制得的固體分散體效果最好，40 min內(nèi)累積溶出百分率達70%，明顯高于PVP固體分散體，故選用聚乙二醇6000為載體。見圖1。

圖1 不同載體制備固體分散體溶出度曲線

2.6 載體比例的選擇 分別取1∶2、1∶4、1∶6大黃酚-PEG固體分散體，測定大黃酚固體分散體的體外溶出度，如圖2所示，大黃酚與載體質(zhì)量比為1∶4時，40 min內(nèi)大黃酚累積溶出百分率達70%。從溶出度曲線可知，大黃酚與PEG載體以1∶4比例形成的固體分散體最好，故選用大黃酚-PEG固體分散體(1∶4)的樣品進行X射線衍射和差熱分析。

圖2 不同比例大黃酚-PEG固體分散體的溶出曲線

2.7 樣品差示掃描量熱(DSC)分析［8］取 PEG6000、大黃酚、大黃酚-PEG固體分散體(1∶4)、大黃酚與PEG物理混合物(1∶4)分別進行差示掃描量熱(DSC)分析。測定條件:空鋁坩堝為參比，氣氛為N2，升溫范圍20℃ ～250℃，升溫速率10℃/min。結(jié)果見圖3。

圖3 大黃酚(a)，大黃酚-PEG固體分散體(b)，大黃酚與PEG物理混合物(c)，PEG(d)的DSC圖

2.8 樣品的X射線衍射分析 取大黃酚PEG固體分散體進行X射線衍射分析，測試條件為CuKa石墨單色器衍射，管流:20 mA，高壓:30 kV，掠角 θ為5 ～35°。見圖4、5。

圖4 大黃酚

圖5 大黃酚固體分散體

3 討論

差示掃描量熱(DSC)分析結(jié)果顯示，大黃酚在196℃有一吸熱峰，為大黃酚的熔點峰，與文獻報道一致［9］。PEG6000在75℃有一吸熱峰［10］。在大黃酚與PEG 6000的物理混合物中大黃酚的吸熱峰仍存在，說明載體與大黃酚的機械混合雖然可以使藥物的結(jié)晶有所減少但是藥物依然以原來的晶型存在，在大黃酚與PEG 6000形成的固體分散體中大黃酚196℃處的吸熱峰完全消失，說明大黃酚與載體發(fā)生相互作用，使藥物結(jié)晶結(jié)構發(fā)生改變，大黃酚在固體分散體中以無定形形式存在，從而增加了大黃酚的分散程度，提高了大黃酚的體外溶出度。由圖4可見，大黃酚的晶體衍射峰清晰可辨。而固體分散體的衍射圖僅為一寬帶，說明在固體分散體中，大黃酚的晶體已完全消失，而以無定形狀態(tài)分散于非晶體的PEG中，從而達到高度分散狀態(tài)(見圖5)。

體外溶出實驗顯示，大黃酚固體分散體的溶出度大于物理混合物，大于大黃酚，并且大黃酚與PEG 6000的比例為1∶4時大黃酚固體分散體溶出度最大。

以聚乙二醇6000為載體將大黃酚制成固體分散體可增加大黃酚的溶解度，改善大黃酚的溶出度。

［1］Lu C C，Yang J S，Huanq A C，et al.Chrysophanol induces necrosis through the production of ROS and alteration of ATP levels in human liver cancer cells［J］.Mol Nutr Food Res，2010，18(12):264-269.

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