參精護(hù)心湯對心肌缺血大鼠的保護(hù)作用研究

祝 浩，龍子江，劉金林，孫 立，司文文，王舒舒

（安徽中醫(yī)學(xué)院，安徽 合肥 230038）

冠心病指冠狀動脈粥樣硬化使血管腔狹窄或阻塞，或（和）因冠狀動脈功能性改變（痙攣）導(dǎo)致心肌缺血缺氧或壞死而引起的心臟病，統(tǒng)稱冠狀動脈性心臟病，亦稱缺血性心臟病，因而用活血化瘀藥治療冠心病已成為冠心病綜合治療的有效方法之一。

參精護(hù)心湯（主要組份：人參，三七，川芎等），其功效主要是理氣開竅，活血化瘀止痛，用于氣滯血瘀證候。本實驗采用結(jié)扎冠脈左前降支的方法復(fù)制大鼠心肌缺血模型，觀察參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠ECG－ST段動態(tài)變化及血清中NO、ET、LDH、CK含量的影響，探究參精護(hù)心湯對心肌缺血方面的防治作用及機(jī)制。

1 材料

1.1 藥物與試劑

參精護(hù)心湯浸膏（比重為1g：1.087g）；復(fù)方丹參滴丸（由天津天士力制藥股份有限公司生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號：國藥準(zhǔn)字Z10950111，批號：100205，人用量810mg／d）；2－3－5－三苯基氯化四氮唑（TTC，國藥集團(tuán)化學(xué) 試劑有限公司，批號F201006）；內(nèi)皮素（ET）試劑盒（上海森雄科技實業(yè)有限公司，批號：201012168）、一氧化氮（NO）試劑盒、乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒、肌酸磷酸激酶（CK）試劑盒（南京建成生物工程研究所，批號：20101005）。

1.2 實驗動物

Wistar大鼠70只，雌雄各半，體重200～240g。由南京醫(yī)科大學(xué)動物中心提供，許可證號SCXK（蘇）2009－0001。

1.3 儀器

XD－7100型心電圖機(jī)（上海醫(yī)用電子儀器廠）；Anke TDL－5臺式離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠）；Multiskan MK2酶標(biāo)儀（Labsystem）。

2 方法

2.1 模型復(fù)制及分組

取健康Wistar大鼠70只，體重在200～240g之間。用乙醚麻醉且固定后，接XD－7100型心電圖機(jī)。測量各大鼠手術(shù)前ECG－ST段是否正常。左胸去毛并常規(guī)消毒后，于左側(cè)第4肋間開胸暴露心臟，在左心耳和肺動脈圓錐的交界和心尖連線上，穿5－0手術(shù)線結(jié)扎，迅速將心臟恢復(fù)到胸腔，閉胸；假手術(shù)組只開胸，暴露心臟僅穿線不結(jié)扎。大鼠插肢體電極監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)Ⅱ?qū)碾妶D，測結(jié)扎后心電圖。以ECG－ST段出現(xiàn)明顯抬高為模型復(fù)制成功標(biāo)志。術(shù)后連續(xù)3天ip青霉素鈉8萬U·d－1防治手術(shù)感染［1］。將造模后大鼠以術(shù)后ECG－ST抬高值為基準(zhǔn)隨機(jī)分成6組：動物分為假手術(shù)組、模型組（等容積蒸餾水）、陽性藥物組（復(fù)方丹參滴丸 0.1458g·kg－1）、參精護(hù)心湯高、中、低劑量組（4.6836，2.3418，1.1709g·kg－1）。每組10只，雌雄各半。各組分別按劑量連續(xù)ig給藥28d。

2.2 指標(biāo)測定

用XD－7100型心電圖機(jī)分別測量各組大鼠手術(shù)前、手術(shù)后即刻及1、3、7、14、21、28d給藥30min后心電圖，并在第28天末次給藥30min后，用3.5%的水合氯醛10mL·kg－1麻醉大鼠，腹主動脈取血后取出各組大鼠心臟。血液以3500r·min－1離心10min，分離血清，按照劑盒操作方法，測定血清中NO、ET、LDH、CK的含量；心臟剖取后，用冰生理鹽水清洗無殘血，濾紙吸干，稱重，去除心房及脂肪組織，將左心室橫切成1～2mm厚的薄片，用1.5%的TTC染色劑于37℃水浴中染色10min左右，至梗死區(qū)出現(xiàn)明顯白色后取出，濾紙吸干，分離白色梗死區(qū)，稱重，計算心肌梗死率（心肌梗死率＝心肌梗死區(qū)重量g／全心重量g×100%）。

2.3 統(tǒng)計方法

使用SPSS 11.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析處理。所有數(shù)據(jù)用（）表示，組間比較采用單因素方差分析。

3 結(jié)果

3.1 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠ECG－ST段的影響

各冠脈結(jié)扎組術(shù)后即刻ECG－T段均呈現(xiàn)異常抬高，與假手術(shù)組比較具有顯著性差異（P＜0.01），證明各模型復(fù)制成功；藥物組與模型組比較ECG－T段均有明顯下降趨勢，用藥7dECG－ST段降低尤為明顯，其中參精護(hù)心湯高劑量組降低效果最為顯著（P＜0.01），見圖1。

圖1 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠ECG－ST段的影響

3.2 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠心肌梗死率的影響

模型組與藥物組大鼠心肌經(jīng)TTC染色后心肌組織呈現(xiàn)為玫紅色與白色（白色部分為梗死區(qū)）。假手術(shù)組因未進(jìn)行冠脈結(jié)扎，梗死率為零；與模型組比較，參精護(hù)心湯低劑量組心肌梗死率顯著降低（P＜0.05）；復(fù)方丹參滴丸組，參精護(hù)心湯高、中劑量組心肌梗死率均有極顯著的降低（P＜0.01）。

表1 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠心肌梗死率的影響（，n＝10）

表1 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠心肌梗死率的影響（，n＝10）

注：與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 劑量（g·kg－1）全心重量（g）梗死區(qū)重量（g）梗死率（%）假手術(shù)組 ／1.11±0.07 0 0模型組 ／ 1.23±0.050.27±0.0826.02±5.5復(fù)方丹參滴丸 0.14581.13±0.060.14±0.05△△ 12.39±4.43△△參精護(hù)心湯 4.68361.12±0.070.13±0.05△△ 11.61±5.58△△2.34181.13±0.080.17±0.07△△ 15.04±4.31△△1.17091.14±0.070.19±0.08△ 16.67±2.95△

3.3 參精護(hù)心湯心肌缺血模型大鼠血清NO、ET、LDH、CK含量的影響

表2顯示，與假手術(shù)組比較，模型組NO含量明顯降低（P＜0.01），ET含量顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，各給藥組NO含量顯著降低（P＜0.05），參精護(hù)心湯高劑量組血清NO含量顯著高于復(fù)方丹參滴丸組（P＜0.01），血清中ET含量均降低（P＜0.05）。

表3顯示，與假手術(shù)組比較，模型組LDH、CK含量顯著升高（P＜0.01）；與模型組比較，參精護(hù)心湯高、中、低劑量組血清LDH降低尤其顯著（P＜0.01）。

表2 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠血清中NO、ET含量的影響（，n＝10）

表2 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠血清中NO、ET含量的影響（，n＝10）

注：與假手術(shù)組比較，##P＜0.01；與模型組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 劑量（g·kg－1） NO（μmol·L－1） ET（ng·L－1）15.38±0.85 18.33±3.77模型組 ／ 6.53±1.57﹟﹟ 30.46±2.68﹟﹟復(fù)方丹參滴丸 0.1458 10.47±1.17△△ 22.31±3.56△△參精護(hù)心湯 4.6836 13.49±1.28△△ 21.02±1.95△△2.3418 9.14±1.14△△ 24.36±2.82△△1.1709 8.97±2.44△ 26.05±3.62假手術(shù)組 ／△

表3 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠血清中LDH、CK含量的影響（，n＝10）

表3 參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠血清中LDH、CK含量的影響（，n＝10）

注：與假手術(shù)組比較，##P＜0.01；與模型組比較△P＜0.05，△△P＜0.01。

組別 劑量（g·kg－1） LDH （U·L－1） CK（U·mL－1）3835.23±175.66 0.512±0.115模型組 ／ 5236.44±351.85﹟﹟ 1.012±0.120﹟﹟復(fù)方丹參滴丸 0.14584179.04±615.24△△ 0.574±0.457△△參精護(hù)心湯 4.68364292.25±268.39△△ 0.564±0.102△△2.34184660.49±273.03△△ 0.614±0.498△△1.17094869.56±170.89△△ 0.816±0.234假手術(shù)組 ／△

4 討論

由于ECG－ST段異常性升高是心肌出現(xiàn)缺血性損傷在ECG上的最顯著特征，用以作為本次研究試驗中造模是否成功的判定標(biāo)準(zhǔn)。通過對各組大鼠術(shù)前及術(shù)后即刻，1，3，7，14，21，28dECG－ST段動態(tài)變化的觀察，說明參精護(hù)心湯對心肌缺血模型大鼠ECG－ST段的抬高具有顯著的抑制并降低的功效；經(jīng)過TTC染色后計算得出心肌梗死率，從數(shù)據(jù)中可以得出參精護(hù)心湯高、中、低劑量組均能較好地保護(hù)心肌組織減少心肌缺血模型大鼠心肌梗死范圍。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)認(rèn)為，內(nèi)皮損傷、血小板聚集、冠脈痙攣是觸發(fā)心肌缺血、血栓形成的發(fā)病因素。血管內(nèi)皮分泌多種生物活性物質(zhì)，其中最重要的是內(nèi)皮源性舒張因子EDRF，其化學(xué)本質(zhì)即NO，它具有極強(qiáng)的舒張血管作用，對血小板聚集和血栓形成有強(qiáng)烈的抑制作用，還可以穩(wěn)定溶酶體膜、對抗氧自由基損傷和內(nèi)皮源性收縮因子EDCF（其中的ET是目前所知最強(qiáng)的血管收縮劑）。內(nèi)皮損傷后NO和ET間平衡失調(diào)，可直接影響有關(guān)酶的活性，導(dǎo)致血管舒縮功能紊亂，血管內(nèi)皮受損及通透性改變。同時還會引起血液成分、血流變特性的變化，加劇心肌缺血性損傷［2］。心肌缺血缺氧，心肌組織嚴(yán)重?fù)p傷，各種酶被釋放出來，其中血液中LDH、CK含量明顯增加，其升高程度與心肌梗死程度相平行［3］。因此，血清NO、ET、LDH、CK水平是心肌損傷的靈敏性指標(biāo)。本實驗心肌缺血模型組大鼠血清中NO顯著降低，ET、LDH、CK含量顯著升高，說明心肌出現(xiàn)損傷。參精護(hù)心湯高、中、低各劑量組對于心肌缺血模型大鼠血清中NO含量的減少以及ET、LDH、CK含量的增加均具有顯著的抑制作用，說明參精護(hù)心湯能有效糾正NO與ET的失衡，保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，清楚氧自由基加強(qiáng)心肌細(xì)胞的有氧代謝，減少心肌細(xì)胞變性從而降低心肌組織的損傷。

以上研究表明，參精護(hù)心湯對于心肌缺血模型大鼠具有促進(jìn)缺血心肌功能恢復(fù)作用，對于心肌缺血模型大鼠起到很好的保護(hù)作用。

［1］李儀奎.中藥藥理實驗方法學(xué)［M］.第2版.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，2006：320.

［2］張秋雁，蘇劍峰，鄧冰湘，等.超微血府逐瘀湯對急性心肌缺血大鼠心肌梗死面積及血清NO－ET的影響［J］.中醫(yī)藥導(dǎo)報，2010，16（5）：111－112.

［3］吳紅彥，王虎平，車敏，等.參參康心滴丸對實驗性心肌缺血大鼠心電圖ST段抬高動態(tài)變化及血清CK、LDH與血漿TXB2、6－Keto－PGF1α含量的影響［J］.中國中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2010，16（8）：665－667.