尼可胺對(duì)H22肝癌荷瘤小鼠的放射增敏作用*

王桂亮 劉曉秋 沈 秀 韓 英

尼可胺是以煙酰胺為母體化合物合成的煙酰氨基酸類化合物，體外實(shí)驗(yàn)已顯示尼可胺較其母體化合物煙酰胺放射增敏效果更好，且毒性更低[1]，有望成為新的腫瘤放療的放射增敏劑。本研究通過(guò)檢測(cè)尼可胺對(duì)小鼠腫瘤生長(zhǎng)時(shí)間的延遲及抑制作用，以進(jìn)一步探討尼可胺的體內(nèi)放射增敏作用。

1 材料與方法

1.1 材料 普通級(jí)昆明種小鼠60只，雌雄各半，體質(zhì)量18~22 g，6~8周齡，小鼠H22肝癌瘤株，分別由中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心和生物室提供。尼可胺由本所藥物室合成，白色粉狀晶體，純度>99%，熔點(diǎn)182~191℃，相對(duì)分子質(zhì)量133.11[2]。用生理鹽水和少量NaOH溶解后配成pH 7.0的100 g/L原液，超濾除菌后取一部分分別用生理鹽水稀釋為50 g/L和25 g/L備用。煙酰胺（中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所）、甘氨雙唑鈉（生產(chǎn)批號(hào)：200811162，山東綠葉制藥有限公司）分別用生理鹽水溶解后配成pH 7.0的100 g/L和57.45 g/L溶液，超濾除菌后備用。150 mm鍍鉻游標(biāo)卡尺（北京量具刀具廠），照射設(shè)備為加拿大GammaⅡ40，以137Cs為照射源，照射劑量率0.78 Gy/min。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法 無(wú)菌條件下抽取接種6~8 d的一代H22肝癌小鼠腹水，用生理鹽水稀釋細(xì)胞懸液。用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞，漿細(xì)胞濃度調(diào)整為1×107/mL，接種于小鼠右后腳掌皮下，每只接種0.2 mL。1周后,小鼠右后掌部腫瘤長(zhǎng)成黃豆粒大小，將小鼠按照腫瘤大小和性別隨機(jī)分為7組，每組8只，雌雄各半，分籠飼養(yǎng)。（1）空白對(duì)照組腹腔注射生理鹽水0.25 mL/只，不進(jìn)行照射。（2）單純照射組腹腔注射生理鹽水0.25 mL/只，進(jìn)行照射。（3）陽(yáng)性對(duì)照甘氨雙唑鈉組（573.45 mg/kg），腹腔注射57.45 g/L甘氨雙唑鈉生理鹽水溶液0.25 mL/只，進(jìn)行照射；煙酰胺組（1 000 mg/kg），腹腔注射100 g/L煙酰胺生理鹽水溶液0.25 mL/只，進(jìn)行照射。（4）尼可胺高（1 000 mg/kg）、中（500 mg/kg）、低（250 mg/kg）劑量組分別腹腔注射100、50及25 g/L煙酰胺生理鹽水溶液0.25 mL/只。照射方法：給藥后30 min于清醒狀態(tài)下每次4只小鼠進(jìn)行照射，照射時(shí)將小鼠固定，將接種腫瘤的后腳掌暴露于照射野中，非照射部位用鉛塊遮擋。照射劑量為5 Gy[3]。

1.3 觀察指標(biāo) 照 射后觀察實(shí)驗(yàn)小鼠的進(jìn)食、活動(dòng)、體質(zhì)量增長(zhǎng)情況；每隔1 d測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)、寬、高，計(jì)算小鼠腫瘤體積，繪制各組腫瘤生長(zhǎng)曲線；照射28 d后處死小鼠，剝?nèi)×龇Q質(zhì)量。計(jì)算抑瘤率、腫瘤生長(zhǎng)延緩時(shí)間、增敏系數(shù)（EF）。抑瘤率=（1-給藥組平均瘤質(zhì)量/空白對(duì)照組平均瘤質(zhì)量）×100%：腫瘤體積生長(zhǎng)至放射治療前3倍所需時(shí)間為3倍倍增時(shí)間（TGT3）：不同實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組的TGT3之差為腫瘤生長(zhǎng)延遲時(shí)間（TGD）。增敏系數(shù)（EF）=給藥照射組TGD/單純照射組TGD，EF>1表示有放射增敏效應(yīng)[4]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采 用SPSS 15.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量數(shù)據(jù)以±s表示，多組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步組間比較用SNK-q檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 尼可胺對(duì)H22肝癌小鼠腫瘤的增敏作用 各實(shí)驗(yàn)組荷瘤小鼠的腫瘤生長(zhǎng)均隨照射天數(shù)呈增長(zhǎng)趨勢(shì)，見(jiàn)圖1；尼可胺高、中、低劑量組均能延緩腫瘤生長(zhǎng)，高劑量組的增敏效果高于其母體化合物煙酰胺組和甘氨雙唑鈉組，尼可胺低劑量組增敏效果低于煙酰胺組和甘氨雙唑鈉組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），中劑量組較甘氨雙唑鈉組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），而與煙酰胺組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見(jiàn)表1、2。

2.2 尼可胺對(duì)H22肝癌小鼠腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用結(jié)果比較 各實(shí)驗(yàn)組給藥照射后，均未見(jiàn)明顯異常的生理反應(yīng)。尼可胺高、中、低各劑量組均能抑制腫瘤生長(zhǎng)，且抑制腫瘤作用隨給藥劑量的增加呈增強(qiáng)趨勢(shì)。高劑量組的抑瘤率高于其母體化合物煙酰胺組和甘氨雙唑鈉組，低劑量組抑瘤率低于煙酰胺組和甘氨雙唑鈉組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P<0.05或P<0.01）,見(jiàn)表3、4。

表1 各組腫瘤生長(zhǎng)的延遲時(shí)間和增敏系數(shù)（n=8，±s）

表1 各組腫瘤生長(zhǎng)的延遲時(shí)間和增敏系數(shù)（n=8，±s）

*P＜0.05，**P＜0.01

空白組單純照射組（1）甘氨雙唑鈉組（2）煙酰胺組（3）尼可胺低劑量組（4）尼可胺中劑量組（5）尼可胺高劑量組（6）F 7.5±0.75 15.4±0.73 23.8±0.44 21.8±0.19 18.4±0.48 22.9±0.36 26.5±0.25--7.9±0.02 16.3±0.31 14.3±0.54 10.9±0.27 15.4±0.39 19.0±0.50 110.83*--1.83 1.61 1.22 1.73 2.13-組別 TGT3（d） TGD（d） EF

表2 各組腫瘤生長(zhǎng)的延遲時(shí)間和增殖系數(shù)組間兩兩比較q值 （n=8）

表3 各實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量及抑瘤率 （n=8±s）

表3 各實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量及抑瘤率 （n=8±s）

*P＜0.05,**P＜0.01

空白組單純照射組（1）甘氨雙唑鈉組（2）煙酰胺組（3）尼可胺低劑量組（4）尼可胺中劑量組（5）尼可胺高劑量組（6）F 1.04±0.21 0.74±0.11 0.45±0.09 0.49±0.14 0.60±0.14 0.51±0.12 0.37±0.15--0.30±0.11 0.59±0.12 0.55±0.07 0.46±0.07 0.53±0.09 0.67±0.06 2.14*-29.1 57.3 53.2 42.6 50.9 64.5-瘤質(zhì)量（g）組別 抑瘤質(zhì)量（g） 抑瘤率（%）

表4 各實(shí)驗(yàn)組腫瘤質(zhì)量及抑瘤率組間兩兩比較q值 （n=8）

3 討論

尼可胺是以煙酰胺為母體化合物合成的煙酰氨基酸類化合物，煙酰胺是一種低毒的放射增敏劑[5]。煙酰胺作用機(jī)制是通過(guò)增加血流灌注，增加乏氧腫瘤細(xì)胞的氧合作用和乏氧腫瘤組織氧分壓而引起腫瘤放療增敏作用[6]。國(guó)外將其作為頭頸部癌和膀胱癌放療增敏劑進(jìn)行了Ⅲ期臨床試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其有很高的腫瘤局部控制率[7]。較為理想的放射增敏劑除了要求有較高的放射增敏系數(shù)和抑瘤率外，其治療劑量下的不良反應(yīng)越低越好[8]。本研究結(jié)果顯示，尼可胺不同劑量給藥照射后，對(duì)腫瘤的生長(zhǎng)均有一定的放射增敏作用，使小鼠腫瘤的生長(zhǎng)明顯放緩，腫瘤質(zhì)量明顯低于單純照射組，且較高劑量的尼可胺對(duì)H22肝癌小鼠的抑制作用較強(qiáng)。尼可胺中、低劑量組都有一定的放射增敏性和抑瘤性，且低劑量組與其母體化合物煙酰胺組和目前已用于臨床的甘氨雙唑鈉組差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而尼可胺高劑量組（1 000 mg/kg）的增敏系數(shù)和抑瘤率均高于煙酰胺組和甘氨雙唑鈉組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。另外，本研究結(jié)果顯示，放射加藥組小鼠在觀察期間未見(jiàn)生活習(xí)性的改變，提示尼可胺可作為一種新的腫瘤放射增敏劑。

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