人乳頭瘤病毒基因分型檢測在絕經(jīng)后婦女HPV感染中的應(yīng)用價(jià)值

呂 虹 劉志忠 劉競爭 邵春青 康熙雄

(首都醫(yī)科大學(xué)附屬北京天壇醫(yī)院檢驗(yàn)科，北京 100050)

目前篩查是預(yù)防和控制宮頸癌的主要手段。隨著人乳頭瘤病毒(HPV)－DNA檢查的普及，年輕患者已逐步實(shí)現(xiàn)早期發(fā)現(xiàn)，早期治療〔1〕。本研究對絕經(jīng)期婦女進(jìn)行脫落細(xì)胞學(xué)及人乳頭瘤病毒基因型別進(jìn)行分析，探討絕經(jīng)期婦女HPV感染情況及與宮頸病變的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對象 2009年1～12月我院婦科門診就診的絕經(jīng)婦女480人，年齡45～82〔平均(56±6.5)〕歲。采樣使用專用的HPV采樣刷采集宮頸脫落細(xì)胞標(biāo)本，采樣前3 d內(nèi)無陰道用藥史，采樣前1 d起禁性生活。以專用細(xì)胞保存液保存標(biāo)本，4℃冰箱保存，1 w內(nèi)檢測。

1.2 儀器與試劑 用凱普導(dǎo)流雜交技術(shù)及其配套試劑(潮州凱普生物化學(xué)有限公司提供)，對21種常見的HPV基因型進(jìn)行分型檢測，包括 13 種高危型 HPV(16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)，5 種低危型 HPV(6、11、42、43、44)和 3 種中國人常見的基因型HPV(53、66和CP8304)。

1.3 實(shí)驗(yàn)過程 樣本DNA提取;PCR擴(kuò)增;導(dǎo)流雜交;酶標(biāo)顯色;結(jié)果判斷，根據(jù)芯片上HPV基因型分布相應(yīng)位點(diǎn)判斷為何種基因型。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件;計(jì)數(shù)資料以百分比表示，率的顯著性檢驗(yàn)采用χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 檢出陽性率的危險(xiǎn)分型 480名絕經(jīng)婦女HPV總檢出陽性率為19.79%(95/480)，其中高危型檢出率為19.17%(92/480)，低危型檢出率為1.88%(9/480)。(多重感染重復(fù)計(jì)數(shù))21種基因型中共檢出18種，有3種基因型未檢出，分別是高危型HPV-35和低危型HPV-42、HPV-43。HPV型別檢出率由高至低依次為HPV-16占4.79%(23/480)，HPV-52型占3.75%(18/480)，HPV-58型占2.71%(13/480)，HPV-53型占2.08%(10/480)，HPV-68型占 1.88%(9/480)，HPV-33型占 1.88%(9/480)，HPV-11型占 1.46%(7/480)，HPV-18型占 1.46(7/480)，HPV-cp8304型占 1.46%(7/480)，HPV-66 型占 1.25%(6/480)，HPV-31 型占 0.83%(4/480)，HPV-56型占 0.83%(4/480)，HPV-59型占 0.83%(4/480)，HPV-39型占 0.63%(3/480)，HPV-6型占0.42%(2/480)，HPV-51型占0.42%(2/480)，HPV-44型占 0.21%(1/480)，HPV-45型占 0.21%(1/480)。

2.2 陽性樣本與感染樣本的分型關(guān)系 在95例陽性樣本中，多重感染樣本為26例，占27.37%(26/95)，單一低危型感染3例，占陽性樣本比例為3.16%(3/95)，低危和高?；旌细腥?例，占陽性樣本比例為6.32%(6/95)，單一高危型感染66例，占陽性樣本比例為69.47%(66/95)，高危型多重感染20例，占陽性樣本比例為20.05%(20/95)。

2.3 陽性樣本年齡分組狀況 陽性樣本按年齡分為4個(gè)組，分別為≤50歲組、51～60歲組、61～70歲組和＞70歲組。各年齡組陽性例數(shù)及低危型、高危型、單一感染、多重感染的例數(shù)和比例的陽性率差異不顯著(χ2=1.482，P=0.686)。見表1。

表1 各年齡組HPV感染陽性例數(shù)及百分比〔n(%)〕

2.4 不同生殖道疾病(宮頸炎性病變、宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變、宮頸癌)與體檢對照組比較 除宮頸炎性病變組外其余均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。見表2。

表2 不同生殖系統(tǒng)疾病與體檢對照組HPV感染情況

3 討論

有研究表明，宮頸癌發(fā)病高峰年齡為35～39歲和60～64歲〔2〕，而HPV感染能否發(fā)展到宮頸上皮內(nèi)高度病變和癌癥，主要取決于三個(gè)方面因素:病毒因素、宿主因素和環(huán)境協(xié)同因素。考慮到病毒因素，最重要的就是感染的HPV型號。大量流行病學(xué)資料結(jié)合實(shí)驗(yàn)室的證據(jù)已經(jīng)確定了HPV與宮頸癌有明顯的相關(guān)性(r=3.6～61.6)〔3〕，在宮頸低度病變的婦女中，高危型HPV感染陽性的婦女宮頸病變進(jìn)展的危險(xiǎn)性高于低危型HPV感染或HPV陰性的婦女，尤其是與HPV-16型呈強(qiáng)相關(guān)性。在本文檢出的病例中，高危16型的檢出率也是最高的，宮頸上皮內(nèi)瘤樣病變與宮頸癌組同體檢組的HPV檢出率是有顯著性差異的〔4〕。

絕經(jīng)期婦女有較高的HPV檢出率(本研究為19.79%)，除了與其年齡段為宮頸癌高發(fā)期以外，還與自我保健意識與認(rèn)知程度有很大的相關(guān)性。在國家宣傳和兩癌(乳腺癌和宮頸癌)篩查政策的出臺，不少適齡女性均進(jìn)行了宮頸癌的篩查，這對于宮頸癌的早期診斷和治療大有裨益。本研究檢測例數(shù)也相對偏少，但是陽性檢出率卻不低。絕經(jīng)期婦女大部分為50歲以上婦女，這個(gè)年齡段的婦女知識水平有限，身體基礎(chǔ)疾病較多，免疫功能較差，對宮頸癌的篩查和自我保健意識較為薄弱。因此，對于絕經(jīng)期的這部分婦女，有必要多渠道的加強(qiáng)宣傳宮頸癌的防治知識，增強(qiáng)對宮頸癌防治的意識及加強(qiáng)宮頸癌的普查力度。

1 Parkin DM，Bray F，F(xiàn)erlay J，et al.Estimating the world cancer burden:Globocan 2000〔J〕.Int J Cancer，2001;94(2):153-6.

2 Zhang WY，Xue YZ，Chen M，et al.Prevalence of high-risk human papillomavirus infection in different cervical lesion among organized health-examination women in Shanghai，Cnina〔J〕.Chin Med J，2008;121(16):1578-82.

3 Cai HB，Ding XH，Chen CC.Prevalence of single and multiple human Papillomavirus types in cervical cancer and precursor lesions in Hubei，China〔J〕.Oncology，2009;76:157-61.

4 Ho CM，Chien TY，Huang SH，et al.Integrated human papillomavirus types 52 and 58 are infrequently found in cervical cancer，and high viral loads predict risk of cervical cancer〔J〕.Gynecol Oncol，2006;102(1):54-60.