PCI術(shù)后再狹窄患者的survivin水平及紅花黃色素的干預作用

孫玉芹 韓海玲 宋文剛 朱玉紅 呂冬燕 朱艷彬 何海濤 姜 欣

(吉林大學，吉林 長春 130021)

經(jīng)皮冠狀動脈介入治療(PCI)術(shù)后再狹窄與survivin的關(guān)系，目前臨床上尚無相關(guān)的報道，僅有一些體外細胞培養(yǎng)及動脈內(nèi)膜損傷動物模型發(fā)現(xiàn)增生的血管內(nèi)膜和培養(yǎng)增殖的SMC中可見survivin表達增高。隨著PCI在冠心病治療中的迅速發(fā)展，術(shù)后再狹窄的出現(xiàn)成為目前急待解決的問題。本研究旨在觀察支架置入術(shù)后紅花黃色素對血漿survivin水平的影響，為再狹窄的防治提供臨床依據(jù)。

1 對象與方法

1.1 研究對象 2008年10月至2009年12月收集本院60例PCI術(shù)后6個月內(nèi)復查冠狀動脈造影的患者，根據(jù)冠狀動脈造影結(jié)果分為再狹窄組(治療處血管腔徑狹窄≥50%)〔1〕、無再狹窄組(治療處血管腔徑狹窄＜50%)。以同期行冠狀動脈造影檢查(未行PCI術(shù))完全正常(所有血管內(nèi)膜光滑)的患者30例作為對照組。20例同期在本院內(nèi)科擇期行PCI術(shù)的患者隨機分為未用藥組和用藥組，用藥組平均年齡(59.45±9.34)歲;術(shù)后當天起應用紅花黃色素(輝瑞制藥有限公司產(chǎn)品)40 mg/d，共7 d。未用藥組平均年齡(61.7±10.8)歲，未應用紅花黃色素治療。兩組其余治療方案相同。所有患者簽署知情同意書。

1.2 標本采集 所有初查及復查冠狀動脈造影的患者均空腹8 h，在導管室行冠狀動脈造影前抽取靜脈血。行擇期PCI術(shù)的患者術(shù)前在導管室抽血，術(shù)后 6、24 h和3、7 d在病房按Seldinger法穿刺右股靜脈，回抽1 ml靜脈血棄去，再抽取2 ml靜脈血置于10 ml乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管，3 h內(nèi)以3 000 r/min速度離心 5 min〔2〕，取血漿分裝于 1.5 ml離心管，置－70℃低溫保存待檢。

1.3 血漿survivin水平的檢測 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)測定血漿survivin水平。survivin試劑盒購自R＆D公司(博士德公司代理)。檢測步驟嚴格按試劑盒內(nèi)所附說明書及酶標儀操作指南進行。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件。數(shù)據(jù)以x±s表示，多組間均數(shù)比較首先采用One-Way方差分析，然后采用SNK進行組間的兩兩比較。兩組間比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 各組間一般資料比較 再狹窄組與對照組間年齡、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、載脂蛋白(Apo)A的差異均有統(tǒng)計學意義(P＜0.05，P＜0.01)。見表1。

2.2 各組血漿survivin水平比較 PCI術(shù)后再狹窄組的血漿survivin水平顯著高于無再狹窄組和對照組(均P＜0.01)，無再狹窄組的survivin水平又顯著高于對照組(P＜0.01)。見表1。2.3 PCI術(shù)后短期應用阿托伐他汀對血漿survivin的影響 未用藥組的術(shù)前及術(shù)后6 h、24 h、3 d、7 d的血漿survivin水平分別為(289.4±22.4)、(609.7±69.6)、(1 157.8 ±222.6)、(1 263.1±179.8)和(1 142.7±179.1)pg/L;用藥組分別為(299.9±24.7)、(684.4 ±72.3)、(1 050.4 ±139.5)、(903.6 ±120.7)和(498.3±100.6)pg/L。PCI術(shù)后患者血漿survivin水平于術(shù)后6 h急劇增高，未用藥組在術(shù)后3 d達最高峰，術(shù)后7 d仍處于高水平;用藥組于術(shù)后24 h達最高峰。兩組術(shù)后各時間點的血漿survivin水平均顯著高于術(shù)前(均P＜0.01)。用藥組在術(shù)后3、7 d的血漿survivin水平均顯著低于未用藥組，差異有統(tǒng)計學意義(均P＜0.01)。

表1 各組間一般資料及survivin水平比較(x±s)

3 討論

survivin是一個新近克隆的凋亡抑制基因，屬于IAP家族中的最新成員，是迄今發(fā)現(xiàn)的最強的凋亡抑制因子。人類survivin基因位于染色體17q25上，全長14.7 kb，是家族中一個結(jié)構(gòu)獨特的新成員，于1997年由耶魯大學的Altieri等用效應細胞蛋白酶受體在人類基因組庫的雜交篩選中首先分離出來，具有強大的抗細胞凋亡功能〔3〕。

survivin的表達具有細胞周期依賴性，只在細胞周期的G2/M期表達，在有絲分裂開始時，survivin與紡錘體的微管蛋白特異性結(jié)合，維持有絲分裂正常進行。干擾survivin與微管蛋白的結(jié)合反應可致survivin抗凋亡活性的喪失。還有研究發(fā)現(xiàn)survivin過度表達會導致細胞加快向S期轉(zhuǎn)換，抑制G1期靜止，從而促進細胞增殖〔4〕。資料表明survivin在人類很多細胞中表達，并與細胞的增殖、凋亡、血管生成、預后和耐藥性的產(chǎn)生密切相關(guān)，在其他增生性疾病如動脈粥樣硬化、PCI術(shù)后再狹窄等，survivin也可能具有潛在價值。Shin〔4〕、Simosa〔5〕、Wang〔6〕等發(fā)現(xiàn):①兔動脈球囊損傷模型中，survivin在內(nèi)膜增殖的VSMC中表達增高;②在用血清或血小板衍生生長因子(PDGF)AB亞型干預培養(yǎng)的VSMC中，有survivin的表達;③腺病毒攜帶的survivin基因變異體(AdT34A)轉(zhuǎn)染可抵抗PDGF對VSMC的保護作用，但不影響有絲分裂，同時抑制股動脈損傷模型的新生內(nèi)膜形成和誘導VSMC凋亡。提示survivin是急性血管損傷后VSMC增殖和凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)劑，抑制survivin的表達可以誘導VSMC凋亡，抑制血管損傷后內(nèi)膜的增殖。

本研究顯示，PCI術(shù)后再狹窄組的血漿survivin水平顯著高于無再狹窄組和對照組，無再狹窄組的survivin水平又顯著高于對照組。表明survivin因子表達增高與患者體內(nèi)存在細胞過度增殖及凋亡不足相關(guān)。因此，survivin可能成為PCI術(shù)后再狹窄的預測指標。

本研究還顯示，PCI術(shù)后6 h的血漿survivin水平即明顯增高，未用藥組在術(shù)后3 d達最高峰，7 d仍在高水平;用藥組在術(shù)后24 h達最高峰，術(shù)后3 d、7 d的survivin水平顯著低于未用藥組。提示紅花黃色素可顯著降低PCI術(shù)后患者的血漿survivin水平，與體外VSMC培養(yǎng)的結(jié)果一致〔7〕。PCI術(shù)后短期內(nèi)血漿survivin水平顯著增高，其原因可能為PCI引起血管內(nèi)膜撕裂導致內(nèi)皮功能損傷和紊亂、血小板激活、血栓形成和急性炎性反應等。PCI是一種血管內(nèi)膜損傷過程。因此，紅花黃色素明顯降低血漿survivin水平，這可能是紅花黃色素類藥物防治血管損傷后內(nèi)膜增殖的機制之一。

綜上所述，PCI術(shù)后再狹窄患者的血漿survivin水平顯著增高，可能提示再狹窄患者體內(nèi)存在細胞增殖過度、凋亡不足。血漿survivin水平持續(xù)增高可能成為預測PCI術(shù)后再狹窄的有用指標。紅花黃色素治療可使血漿survivin水平顯著降低，可能是紅花黃色素類藥物防治血管損傷后內(nèi)膜增殖的機制之一，值得進一步研究。

1 胡春燕，何 奔，孫寶貴，等.冠狀動脈支架內(nèi)再狹窄的危險因素分析〔J〕. 上海醫(yī)學，2006;29:123.

2 韓雅玲，劉海偉，張振剛，等.冠狀動脈支架內(nèi)再狹窄臨床相關(guān)因素分析〔J〕.中國實用內(nèi)科雜志，2002;22:209-11.

3 Temme A，Rieger M，Reber F，et al.Localization，dynamics，and function of survivin revealed by expression of functional survivin fusion proteins in the living cell〔J〕.Mol Biol Cell，2003;14(1):78-92.

4 Shin S，Sung BJ，Cho YS，et al.Anti-apoptotic protein human survivin is a direct inhibitor of caspase-3 and 7〔J〕.Biochemistry，2001;40:1117-23.

5 Simosa HF，Wang G，Sui X，et al.Survivin expression is up-regulated in vascular injury and identifies a distinct cellularphenotype〔J〕.JVasc Surg，2005;41:682-90.

6 Wang GJ，Sui XX，Simosa HF，et al.Regulation of veingraft hyperplasia by survivin，an inhibitor of apoptosisprotein〔J〕.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2005;25:2081-7.

7 Blanco-Colio LM，Villa A，Ortego M，et al.3-Hydroxy-3-met-hylglutaryl coenzyme A reductase inhibitors，atorvastatin and simvastatin，induce apoptosis of vascular smooth muscle cells by downregulation of Bcl-2 expression and Rho A prenylation〔J〕.Atherosclerosis，2002;161:17-26.