MK和MMP-26在人乳腺組織中的表達(dá)及臨床意義

王玉欣 馬英智 孫 梅

(武警吉林省總隊醫(yī)院病理科，吉林 長春 130052)

中期生長因子(Midkine，MK)能調(diào)節(jié)細(xì)胞生長、存活和分化，在人類多種惡性腫瘤中表達(dá)增強(qiáng)〔1，2〕。MK在乳腺癌腫瘤組織中的表達(dá)無論是表達(dá)頻率還是表達(dá)程度均明顯高于癌旁正常組織〔3，4〕。MK的高表達(dá)程度與預(yù)后不良密切相關(guān)。基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-26在腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用〔5〕。本文旨在研究這兩種基因在乳腺癌發(fā)生、發(fā)展中的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 所有乳腺癌組織及正常乳腺組織均取自2005年12月至2008年6月吉林大學(xué)第二醫(yī)院住院患者，共計92例。其中浸潤性乳腺導(dǎo)管癌63例，乳腺原位癌7例，乳腺增生14例，正常乳腺組織8例，取自因良性疾病行乳腺切除，及因乳腺良性腫瘤活檢病理回報為正常乳腺組織。所有標(biāo)本均經(jīng)嚴(yán)格篩選及2名以上病理醫(yī)生進(jìn)行病理診斷。標(biāo)本固定于10%甲醛固定液中，經(jīng)取材、脫水、透明、浸蠟、包埋后切片，切片厚為4μm?？靖珊髠溆谩?/p>

1.2 方法 免疫組織化學(xué)染色步驟:(1)組織石蠟切片經(jīng)二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水;(2)0.01 mol/L磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，每次5 min;(3)枸櫞酸鹽修復(fù)重復(fù)步驟(2);(4)過氧化物酶阻斷15 min(A液)，重復(fù)步驟(2);(5)非免疫動物血清(B液)30 min;(6)以0.01 mol/L PBS稀釋一抗(1∶100)，直接滴加于切片上，30μl/片，4℃過夜后，重復(fù)步驟(2)，陰性對照以PBS替代一抗;已知的陽性片作對照。(7)加生物素標(biāo)記物的二抗(C液)30 min，重復(fù)步驟(2);(8)滴加鏈霉親和素-過氧化物酶溶液(D液)30 min后，重復(fù)步驟(2);(9)二氨基聯(lián)苯胺(DAB)發(fā)色，水洗終止;(10)蘇木精復(fù)染細(xì)胞核，常規(guī)脫水透明，中性樹脂封片。

結(jié)果判定:以胞質(zhì)和胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。根據(jù)染色范圍和強(qiáng)度界定蛋白的表達(dá)，陽性范圍記分:＜5%為0分，5% ～25%為1分，26% ～50%為2分，51% ～75%為3分，＞75%為4分;染色強(qiáng)度計分:不染色為0分，弱染色1分，中度染色2分，強(qiáng)染色3分。表達(dá)最終得分=染色范圍×染色強(qiáng)度，最終得分≥4分為免疫反應(yīng)陽性(+)，＜4分為免疫反應(yīng)陰性(-)。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 應(yīng)用SPSS14.0統(tǒng)計軟件，根據(jù)實驗數(shù)據(jù)資料類型進(jìn)行χ2檢驗和Spearman等級相關(guān)分析等檢驗。

2 結(jié)果

2.1 MK在乳腺組織中的表達(dá) MK蛋白陽性表達(dá)在正常乳腺組織〔1(12.5%)〕與乳腺增生〔2(14.3%)〕沒有明顯差別(P＞0.05)，而與原位癌〔3(42.5%)〕和浸潤性導(dǎo)管癌〔36(57.1%)〕中的表達(dá)有顯著性差異(P＜0.05)。乳腺增生中MK陽性表達(dá)與原位癌和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌差異顯著(P＜0.05)。原位癌和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中MK陽性表達(dá)沒有顯著性差異(P＞0.05)。

2.2 MMP-26蛋白在乳腺組織中的表達(dá) MMP-26陽性蛋白在正常乳腺組織〔1(12.5%)〕與乳腺增生〔3(21.4%)〕中表達(dá)沒有明顯差別(P＞0.05)，而與原位癌〔4(57.1%)〕和浸潤性導(dǎo)管癌〔34(54%)〕有顯著性差異(P＜0.05)。乳腺增生中MMP-26陽性表達(dá)與原位癌和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌差異顯著(P＜0.05)。原位癌和乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中的MMP-26表達(dá)沒有顯著性差異(P＞0.05)。

2.3 MK、MMP-26在人浸潤性乳腺組織中的表達(dá)與部分臨床指標(biāo)的關(guān)系 MK、MMP-26陽性表達(dá)與腫瘤大小、組織學(xué)分級無關(guān)(P＞0.05)，但與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，MK、MMP-26表達(dá)陽性患者淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率明顯高于陰性表達(dá)的患者(P＜0.05)。見表1。

2.4 MK蛋白表達(dá)與MMP-26表達(dá)的相關(guān)性分析 MK與MMP-26蛋白在乳腺癌組織中表達(dá)呈正相關(guān)。見表2。

表1 MK、MMP-26在乳腺癌組織中表達(dá)與臨床參數(shù)間的關(guān)系

表2 MK、MMP-26在乳腺癌組織中表達(dá)的相關(guān)性(n)

3 討論

MK在多種惡性腫瘤組織和癌前病變中高表達(dá)，而在正常組織和良性腫瘤中低表達(dá)或不表達(dá)〔1〕，并與腫瘤患者的預(yù)后密切相關(guān)。本文通過對人乳腺癌組織的免疫化學(xué)染色檢測MK蛋白在不同乳腺組織中的表達(dá)，結(jié)果顯示MK在乳腺原位癌組織和浸潤性導(dǎo)管癌中呈高表達(dá)，而在乳腺良性增生性病變和正常組織低表達(dá)。與以往的研究報道相一致〔6〕，無論是表達(dá)頻率還是表達(dá)程度，乳腺癌腫瘤組織均明顯高于正常癌旁組織。Trojan等〔7〕采用DNA微陣列技術(shù)研究發(fā)現(xiàn)MK基因與前列腺癌的轉(zhuǎn)移有關(guān)。在宮頸癌中，Moon等〔8〕用競爭PCR和免疫組化方法發(fā)現(xiàn)宮頸癌組織中MK mRNA和蛋白的表達(dá)均高于正常對照組，而且其程度與腫瘤大小和臨床分期有關(guān)。過高的MK表達(dá)在神經(jīng)母細(xì)胞瘤中也提示預(yù)后不良〔9〕。Huang等〔10〕研究發(fā)現(xiàn)胃癌組織中的MK表達(dá)高，并與腫瘤TNM分期及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，進(jìn)一步提示MK在腫瘤轉(zhuǎn)移過程中的作用。已有報道MK在乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤大小和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)〔4，6〕。本實驗結(jié)果表明MK的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈正相關(guān)，但與腫瘤大小和組織學(xué)分級無關(guān)。

MMP-26與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本文同時檢測了MMP-26蛋白在不同乳腺組織中的表達(dá)，結(jié)果表明MMP-26在乳腺原位癌和浸潤性導(dǎo)管癌中呈高表達(dá)，并與腫瘤的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。已有報道MMP-26在前列腺癌、肺癌、乳腺癌組織中高表達(dá)〔11，12〕。Konishi等〔1〕等檢測了 MMP-26 蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)，并分析了其與部分臨床指標(biāo)的關(guān)系，結(jié)果顯示MMP-26的表達(dá)與腫瘤的浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和TNM分期密切相關(guān)，因此推測MMP-26可能在腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。

本文還發(fā)現(xiàn)在乳腺癌組織中MK蛋白表達(dá)與MMP-26表達(dá)呈正相關(guān)，推斷這兩種基因在乳腺癌發(fā)展中相互促進(jìn)。因此聯(lián)合檢測MK和MMP-26蛋白在乳腺癌組織中的表達(dá)可以作為判斷腫瘤惡性程度、侵襲能力的指標(biāo)，并進(jìn)而判斷預(yù)后。

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