HPLC法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖顆粒中鹽酸氨基葡萄糖的含量*

楊華良，雷勇勝

(1.天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院，天津 300052； 2.天津藥物研究院，天津 300193)

氨基葡萄糖是一種從天然甲殼質(zhì)中提取的氨基己糖，是人體及動(dòng)物體內(nèi)關(guān)節(jié)組織中糖蛋白的天然成分。本品為白色結(jié)晶性粉末，分子式為C6H13NO5。氨基葡萄糖具有修復(fù)和維持軟骨及關(guān)節(jié)功能的作用，可延緩骨性關(guān)節(jié)炎的病理過程和疾病進(jìn)展。近年來國(guó)內(nèi)外已成功的將其引入到全身骨關(guān)節(jié)炎的治療和預(yù)防。冉蘭等[1]采用比色法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片中鹽酸氨基葡萄糖的含量，顯色后在527nm處有最大吸收；莊旭琴[2]采用旋光度法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片中鹽酸氨基葡萄糖的含量，但該方法專屬性差，輔料也有可能產(chǎn)生影響；任連杰等[3]采用積分脈沖安培檢測(cè)-高效陰離子交換色譜法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖，優(yōu)化了淋洗條件和積分脈沖安培檢測(cè)條件；吳虹等[4]采用HPLC -ELSD測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖的含量；本方法參考最新的美國(guó)藥典USP32 -NF27版[5]，采用HPLC-UV測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖顆粒的含量。本方法具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)的特點(diǎn)。

1 儀器與試藥

Agilent 1200高效液相色譜儀；鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品(中國(guó)生物制品檢定所，批號(hào)649-200001)；鹽酸氨基葡萄糖顆粒(由湖北益康藥業(yè)有限公司提供，批號(hào)091001、091002、091003，規(guī)格37.5 mg/片)；乙腈為色譜純；水為純凈水，其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性 Venusil XBP NH2色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為乙腈-磷酸鹽緩沖溶液67∶33(磷酸鹽緩沖溶液的配制：稱取7.0 g磷酸氫二鉀溶解在適量水中，加0.5 ml的氫氧化銨，加水稀釋到2 000 ml。用磷酸調(diào)節(jié)pH值至7.0)，檢測(cè)波長(zhǎng)：195 nm，流速為1.5 ml/min，進(jìn)樣量為10 μl ，柱溫：35 ℃。拖尾因子不大于2.0，理論塔板數(shù)不低于1 500。

2.2溶液制備

2.2.1稀釋溶液 乙腈-水(1∶1)。

2.2.2對(duì)照品溶液 取鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品適量，精密稱定，置于10 ml量瓶中，用稀釋溶液溶解，并稀釋成含鹽酸氨基葡萄糖3.75 mg/ml的溶液，混勻。

2.2.3供試品溶液 取鹽酸氨基葡萄糖顆粒適量(約相當(dāng)于含鹽酸氨基葡萄糖37.5 mg)，研細(xì)，精密稱定，置于10 ml量瓶中，用稀釋溶液溶解，并稀釋成含鹽酸氨基葡萄糖3.75 mg/ml的溶液，混勻。

2.2.4陰性溶液 取空白輔料顆粒約118.75 mg，用稀釋溶液溶解并定容至10 ml。

分別取稀釋溶液、空白溶液、對(duì)照品溶液、0.01 mol/L的鹽酸溶液與氯化鈉溶液各10 μl注入液相色譜儀。結(jié)論：在此色譜條件下，氯離子和氨基葡萄糖主峰能夠得到很好的分離。空白輔料對(duì)鹽酸氨基葡萄糖的測(cè)定無干擾，見圖1。

2.3破壞試驗(yàn) 取批號(hào)為091001的鹽酸氨基葡萄糖顆粒約156.25 mg，加稀釋溶液溶解，分別進(jìn)行酸(滴加1 ml 0.1 mol/L氫氧化鈉溶液，水浴加熱2 h)、堿(滴加1 ml 0.1 mol/L鹽酸溶液，水浴加熱2 h)、光照(日光照射3 d)、加熱(水浴加熱30 min，冷卻)、氧化(加過氧化氫溶液1 ml，搖勻，放置2.5 h)分解破壞。與破壞前相比，顆粒劑在酸、堿、氧化破壞下不穩(wěn)定；在加熱、光照破壞下較穩(wěn)定?？瞻纵o料顆粒在酸、堿、氧化、光照破壞下不穩(wěn)定；在加熱破壞下較穩(wěn)定，分解出來的雜質(zhì)都能與主成分峰分離良好。見圖2。

2.4最小檢測(cè)濃度、定量限及定量限重復(fù)性試驗(yàn) 取供試品溶液加稀釋溶液溶解，逐漸稀釋，當(dāng)信噪比約為3∶1時(shí)，鹽酸氨基葡萄糖的最小檢測(cè)濃度為0.02 mg/ml。當(dāng)信噪比約為10∶1時(shí)，鹽酸氨基葡萄糖的定量限為0.08 mg/ml。定量限重復(fù)性試驗(yàn)，連續(xù)測(cè)定6次， RSD為0.68%。

2.5線性關(guān)系試驗(yàn) 取供試品溶液，分別進(jìn)樣4、6、8、10、15、20和25 μl，記錄色譜圖。結(jié)果表明，進(jìn)樣量在0.015～0.093 75 mg范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好?；貧w方程Y=49.562 9+56 377.198 84X(r=0.999 9)。

2.6穩(wěn)定性試驗(yàn) 取對(duì)照品溶液，分別在放置0、4、6、8、10、12和24 h測(cè)定， RSD為2.27%，表明，溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

1.鹽酸氨基葡萄糖

2.7樣品溶液重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)樣品7份，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件重復(fù)進(jìn)樣，測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖含量的RSD為0.18%(n=7)。

1.鹽酸氨基葡萄糖

2.8回收率試驗(yàn) 精密稱取鹽酸氨基葡萄糖對(duì)照品適量，加入處方量的已研細(xì)空白輔料，配制成含鹽酸氨基葡萄糖3.0、3.75和4.5 mg/ml的測(cè)試溶液。量取對(duì)照品溶液、測(cè)試溶液各10 μl，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法計(jì)算回收率。結(jié)果平均回收率為104.55%,RSD為0.61%,見表1。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.9樣品測(cè)定 取3批樣品(批號(hào)091001、091002、091003)，照“2.2.3”項(xiàng)下方法制備溶液，并取“2.2.2”項(xiàng)下對(duì)照品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算。結(jié)果3批樣品的含量分別為標(biāo)示量的96.88%、97.50%、96.84%。限度暫定為本品含鹽酸氨基葡萄糖(C6H13NO5·HCl)為標(biāo)示量的96.0 %～98.0%。結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

本法采用高效液相色譜法，通過色譜柱篩選，選用了柱效相對(duì)較高的Venusil XBP NH2色譜柱，調(diào)節(jié)流動(dòng)相乙腈-磷酸鹽緩沖溶液的比例，使實(shí)驗(yàn)獲得了很好的結(jié)果。方法簡(jiǎn)便、快捷，有較好的準(zhǔn)確度和精密度。

1 冉蘭,張榕,文霞,等.比色法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片的含量.華西藥學(xué)雜志,2001,16(3):217

2 莊旭琴. 旋光度法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖片的含量.安徽醫(yī)藥, 2006,10(12):930

3 任連杰,山廣志,李 群,等.積分脈沖安培檢測(cè)-高效陰離子交換色譜法測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖口腔崩解片含量.中國(guó)生化藥物雜志,2009,30(5):323

4 吳 虹,顧宏霞,王效山.HPLC-ELSD測(cè)定鹽酸氨基葡萄糖含量.安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2008,27(2):41

5 USP32.NF27 .2010:1029