金水寶膠囊治療免疫性不育患者臨床觀察

李廣裕，梁季鴻，梁世坤，韋國強，宋衛(wèi)儒，張 訊，朱春暉

（廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院男性學科，廣西 南寧 530021）

近年來，男性不育發(fā)病率呈增高趨勢，己占到整個不育夫婦比例的20%以上[1]。分析其中的病因，抗精子抗體是免疫性不育的重要原因之一，據(jù)WHO 報道，體內(nèi)存在抗精子抗體而致不育患者占總不育的20%～30%[2]。目前治療男子免疫性不育主要應(yīng)用腎上腺糖皮質(zhì)激素抑制自身免疫反應(yīng)，從而達到治療的目的，由于副作用大，效果并不滿意[3]。冬蟲夏草屬肉座菌目麥角菌科蟲草屬植物，為蟲草菌的子座與其寄主蝙蝠蛾幼蟲尸體的復合物，俗稱蟲草，是我國傳統(tǒng)的滋補性中藥，最早記載于唐代（公元863年）?，F(xiàn)代藥理學研究證明：蟲草不但具有擴張支氣管、調(diào)節(jié)心跳、鎮(zhèn)靜催眠、雄激素樣作用，而且還具有抗炎、抗病毒、抗癌、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等作用[4]。人工培養(yǎng)的蟲草菌粉與天然蟲草所含的成分基本類同，并已有較多的研究與應(yīng)用[5]。金水寶膠囊（江西濟民可信金水寶制藥有限公司，國藥準字Z10890003）主要由發(fā)酵蟲草菌粉組成。主要成分與冬蟲夏草大致相同，在臨床上我們用金水寶膠囊治療免疫性不育癥，取得了良好效果，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2010年8月至2010年11月就診于廣西醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院男性學科，符合納入標準的不育患者共100例，年齡為25～45歲，平均32.5歲。隨機均分對照組（醋酸潑尼松片）、治療組（金水寶膠囊）共2組。

1.1.1 入選標準 （1）病史資料：婚后未采取任何避孕措施1年以上，有規(guī)律、正常性生活，女方未見懷孕或女方曾懷孕而后1年未采取避孕措施而未再懷孕者。（2）實驗室檢查：精漿AsAb陽性（MAR直接法檢測）。（3）知情同意者。

1.1.2 排除標準 （1）既往/目前有明顯系統(tǒng)如心、肝、腎及神經(jīng)系統(tǒng)等原發(fā)性疾病或合并癥者。（2）合并有遺傳性疾病、先天性發(fā)育異常、精神病患者。（3）治療前服用有助生精及提高精子活力的藥物者或正在接受其他類似治療者。（4）有其他免疫性疾患或先天免疫功能低下者。

1.2 測定方法

1.2.1 精液質(zhì)量檢測和分析方法 精液分析根據(jù)2010年《WHO人類精液檢查和處理實驗室手冊》（第五版）及2003年衛(wèi)生部修訂的《人類精子庫基本標準和技術(shù)規(guī)范》進行。

1.2.2 精液基本參數(shù)檢測 采用計算機輔助精子分析（CASA）技術(shù)（清華同方公司 CASAS2QH2Ⅲ2XING系統(tǒng)，配MAKLER精子計數(shù)板，灰度識別誤差用手動系統(tǒng)調(diào)整）檢測受試者精液。檢測指標包括精液量、精子密度、活率、活動力，每份標本隨機采樣至少400個精子以上。

1.2.3 AsAb檢測及判定標準 采用MAR直接法對AsAb進行檢測，試劑盒購自安徽安科生物公司，嚴格按說明書操作步驟進行直接法檢測。陽性率R=（粘附于sRBC的活動精子數(shù)/計數(shù)總活動精子數(shù)）×100%。R≤l0% 判為陰性，R＞l0%判為陽性。

1.3 治療方法

對照組口服醋酸潑尼松片，5 mg，tid，共12周；治療組口服金水寶膠囊，3粒，tid，共12周。治療前后定期查血常規(guī)、尿常規(guī)、肝、腎功能，觀察治療過程中發(fā)生的不良反應(yīng)。

1.4 觀察指標及療效判定標準

治療結(jié)束后不同時間取精液檢測精漿AsAb兩次均轉(zhuǎn)為陰性為有效，AsAb未完全轉(zhuǎn)為陰性為無效，同時比較組內(nèi)組間治療前后精液質(zhì)量各項參數(shù)指標變化。

1.5 統(tǒng)計學分析

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件完成，樣本率比較采用χ2檢驗，樣本均數(shù)用“±s”表示，比較采用t檢驗。

2 結(jié)果

2.1 完成情況

對照組治療后因出現(xiàn)不同程度的痤瘡，皮膚感染、惡心、嘔吐燒心等不適，體重明顯增加，消化道潰瘍等共5例自行停藥，未完成治療；治療組未見明顯不良反應(yīng)，全部完成治療。治療前后定期查血常規(guī)、尿常規(guī)、肝、腎功能未見明顯異常。

2.2 AsAb轉(zhuǎn)陰情況

對照組50例，45例完成了治療，有30例AsAb轉(zhuǎn)陰，有效率為66.7%，治療組50例全部完成了治療，有43例AsAb轉(zhuǎn)陰，有效率為88%，治療組與對照組有效率比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=6.26，P＜0.05）。結(jié)果見表1。

表1 對照組與治療組AsAb轉(zhuǎn)陰有效率比較（n）

2.3 精液質(zhì)量各項參數(shù)指標變化

治療前精液量、精子密度、精子活率和A級精子活力，治療組對照組比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。治療后，對照組精子活率和A級精子活力，較治療前有所提高（P＜0.05），但精液量、精子密度差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。治療組精液量、精子密度、精子活率和A級精子活力較治療前均明顯提高，且明顯優(yōu)于對照組治療后（精子活率P＜0.05、余P＜0.01）。結(jié)果見表2。

3 討論

引起男性不育的原因非常復雜，其中免疫性因素已受到普遍重視，免疫性因素是WHO（世界衛(wèi)生組織）男性不育標準化病因分類診斷之一。MAR法是美國生育學會（AFS）和WHO推薦用于精子抗體檢測的首選方法。MAR法[6]能夠直觀觀察到活動精子表面粘附的AsAb的部位及比例，從而反映抗體對生育的影響；另外還可以觀察計數(shù)活動精子附著的抗體比率是否下降，了解治療效果，對臨床診斷和治療具有重要指導意義[6，7]。

表2 治療組和對照組治療前后精液質(zhì)量各項參數(shù)指標變化（±s）

表2 治療組和對照組治療前后精液質(zhì)量各項參數(shù)指標變化（±s）

注：*P＜0.01，△P＜0.05。

組別 n 精液量 精子密度 精子活率 A級精子治療組 治療前 50 2.77±1.23 52.58±46.68 44.31±22.25 18.79±12.55治療后 50 4.96±1.19* 69.83±35.50* 59.32±11.72△ 36.58±10.35*對照組 治療前 50 2.67±1.13 52.97±46.67 43.34±20.05 18.41±12.85治療后 45 2.69±1.25 54.97±48.67 53.00±11.89 27.18±10.87

男性免疫性不育是一種自身免疫性疾病[8]。當生殖道出現(xiàn)炎癥、損傷、輸精管阻塞、睪丸活檢及嚴重睪丸損傷等情況下，血-睪屏障破壞，因成人對精子表面的新生抗原沒有耐受性，故免疫系統(tǒng)被激活，從而產(chǎn)生AsAb[9]。我國林寶英等[10]研究結(jié)果顯示，男性不育患者血清和精漿AsAb陽性組的TNF-а水平明顯高于AsAb陰性組的TNF-а水平，AsAb與TNF-а水平呈正相關(guān)關(guān)系。高正洪[11]研究結(jié)果顯示在AsAb陽性的不育者中，C3d /C3 的比值顯著高于生育組。耿琳琳等[12]研究顯示不孕患者體內(nèi)異常高水平的IFN- ?與AsAb 的產(chǎn)生有著密切的關(guān)系。故AsAb產(chǎn)生是機體免疫系統(tǒng)被激活，發(fā)生免疫反應(yīng)的結(jié)果。而AsAb 是導致男子免疫性不育的主要因素。對于AsAb 陽性免疫性不育患者的治療，現(xiàn)代醫(yī)學在口服藥上常用腎上腺皮質(zhì)激素免疫制劑持續(xù)療法，然而腎上腺皮質(zhì)激素的免疫抑制效應(yīng)無特異性，既抑制異常的免疫反應(yīng)，也能抑制正常的免疫反應(yīng)，因而其雖能明顯降低血清和精漿中的AsAb，但對于免疫性不育的總體療效不高[13]，且療程長。大劑量的腎上腺皮質(zhì)激素長期服用，容易產(chǎn)生嚴重的副反應(yīng)，如可引起患者免疫力下降，內(nèi)分泌失調(diào)，易感染，引起腎上腺皮質(zhì)功能亢進癥等，誘發(fā)胃潰瘍和股骨頭無菌性壞死等嚴重并發(fā)癥，這就限制了腎上腺皮質(zhì)激素在治療免疫性不育中的應(yīng)用。本組研究采用醋酸潑尼松片為對照組，結(jié)果因副作用退出治療，占對照組人數(shù)的10%，但轉(zhuǎn)陰有效率僅為66.7%，遠低于金水寶膠囊治療組的88%，而金水寶膠囊無副作用，依從性好，50例患者全部完成治療。

金水寶膠囊[14]是由青海新鮮蟲草中分離出可人工培養(yǎng)的蟲草菌—Cs-4菌株（蝙蝠蛾擬青霉），經(jīng)現(xiàn)代先進的生物技術(shù)工藝制成的，具有比天然蟲草濃度更高的蟲草素、氨基酸、脲嘧啶核苷、腺嘌呤核苷、甘露醇、麥角甾醇，維生素和微量元素等成分。人們已對蟲草進行了大量的現(xiàn)代免疫藥理學研究，結(jié)果表明蟲草多糖能引起T細胞、NK細胞、單核細胞和巨噬細胞的活化、增殖，并分泌各種淋巴因子[15]。通過活化免疫因子和細胞，促進細胞因子生成等途徑對免疫系統(tǒng)發(fā)揮雙向調(diào)節(jié)作用。據(jù)魏瑋[16]研究提示冬蟲夏草可使巨噬細胞免疫活性增強。對外周血淋巴細胞具有雙向免疫調(diào)節(jié)作用，對機體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)及腹腔巨噬細胞的吞噬功能具有明顯的激活作用，能促進淋巴細胞的轉(zhuǎn)化。Zhou等[17]在體外實驗中得出冬蟲夏草和蟲草素均增加培養(yǎng)的外周血單核細胞產(chǎn)生IL-10、IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-а，同時抑制植物血球凝集素（PHA）誘導的IL-2、IL-4、IL-5、IFN-?和IL-12的產(chǎn)生。Kuo等[18]報道冬蟲夏草中的麥角甾醇過氧化物（Cpd 6A ) 可抑制植物血球凝集素（PHA）刺激的人T 細胞的分化與增殖，從而抑制人單核細胞增生。故金水寶膠囊通過對免疫器官、單核巨噬細胞系統(tǒng)、免疫細胞和細胞因子的影響，產(chǎn)生較強的抗炎免疫調(diào)節(jié)作用而使ASAb轉(zhuǎn)陰，故在治療免疫性不育患者上，金水寶膠囊療效確切。本組研究轉(zhuǎn)陰有效率為88%，明顯高于對照組（P＜0.05）。另外冬蟲夏草能顯著刺激雄性荷爾蒙分泌[19]。冬蟲夏草的水提液能使摘除睪丸的幼年大鼠精囊重量明顯增加，但不影響幼年小鼠子宮重量，表明有雄激素樣作用[20]，表明有生精功能。本組研究也得出金水寶膠囊治療組經(jīng)過治療后精液量，精子密度明顯增高，治療前后分別為（2.77±1.23）mL、（52.58±46.68）百萬/mL，（4.96±1.19）mL、（69.83±35.50）百萬/mL，（P＜0.01）；而對照組無提高。精漿AsAb與精子結(jié)合，凝集性AsAb 可導致精子成團凝集，制動性AsAb可使精子尾部“僵硬”，擺動頻率及幅度下降，致使精子前向運動減弱，精子活力下降[21]。故隨AsAb減少而精子活力相應(yīng)的提高，本研究經(jīng)治療后在精子活率、A級精子活力方面對照組、治療組均有所提高（P＜0.05），但治療組明顯好于對照組（精子活率P＜0.05，A級精子活力P＜0.01）。

男性生育力與精子的質(zhì)量和運動能力密切相關(guān)。成功的受精和受精潛能在很大程度上不僅依靠精子數(shù)目、存活率、形態(tài)，更大程度上依靠精子運動能力和質(zhì)量[21]。在治療免疫性不育中，金水寶膠囊治療男性免疫性不育在ASAb轉(zhuǎn)陰率、精子運動能力和質(zhì)量上均優(yōu)于醋酸潑尼松片治療者，且不良反應(yīng)發(fā)生率低，安全可靠，值得臨床推廣。

[1]Schute RT,Ohl DA,sigman M,et al.sperm DNA damage in mal iefertiliy:etiolgies,assays,and outcomes[J].Assist Reprod Genet 2009,2010,27(1):3-12.

[2]Dinitrorna OK,Ka1aidzhiev SK,Biakov LS,et al.Methods for the detection of antisperm antibotlies associated with mimunologicallyreediated human infertility[J].Akush Gineko1(Sofiia),2002,41(3):43.

[3]Schlegelp N. Male infertility:evaluation and sperm retrieval[J].Clin ObstetG'eco,2006,49(l):55-72.

[4]郭宏春,高繼全,習欠云,等.冬蟲夏草研究進展[J].微生物學雜志,2003,3(1):50 55.

[5]蔣式驪,胡旭東,劉 平.冬蟲夏草及其人工制劑免疫抑制作用的研究進展[J].上海中醫(yī)藥大學學報,2010,24(2).

[6]Kalaydjiev S K,Dimitrova D K,Trifonova N L,et al. The age-related changes in the incidence of natural anti-sperm antibodies suggest they are not auto-/isoantibodies[J]. Am J Reprod Immunol,2002,47(2):65-71.

[7]Patriek J.Rowe,Frank H.Comhaire,Timothy B.Hargreave,Ahmed M.A.Mahmoud[B].WHO manual for the standardized investigation,diagnosis and management of the infertile male.2007.

[8]Chhabra S.Immune factor and infertility[J].Int J Fertil,1998,34(4):259.

[9]Howe SE,Grider SL,Lynch DM,et al.Antisperm antibody binding to human acrosin:A study of patients with unexplained in fertility[J].Fertil Steril,1991,55(16):1 179.

[10]林寶英,林寶華,曾凡星,等.抗精子抗體及腫瘤壞死因子-а水平表達與男性免疫性不育的臨床意義[J].中國醫(yī)師雜志, 2006,8(12):1 700.

[11]高正洪.男性不育精漿C3d和C3的測定及與抗精子抗體的關(guān)系[J].臨床檢驗雜志,1999,17(1):38-39.

[12]耿琳琳,任芬若,韓書心,等.不孕癥免疫因素AsAb、IFN- ?的相關(guān)性研究[J].中國免疫學雜志,2000,16(3): 135-138.

[13]陳其華.益氣除濕湯為主治療免疫性不育癥40例[J].中國性科學,2004,13(11):24-27.

[14]李火金,孫連杰,史 明,等.金水寶膠囊治療男性更年期綜合征的療效觀察[J].中國自然醫(yī)學雜志,2006,8(1):23-25.

[15]KUO MC,CHANG CY,CHENG TL,et al.Immunomodulatory effect of exopoly saccharides from submerged cultured Cordyceps sinensis:enhancement of cytokine synthesis,CD11b expression,and phagocytosis[J].Applied Microbiology and Biotechnology,2007,75(4):769-775.

[16]魏 瑋.冬蟲夏草提取物對人全血淋巴細胞轉(zhuǎn)化的影響[J].南京中醫(yī)藥大學學報,2004,20(3):185-186.

[17]Zhou XX,Meyer CU,Schmidtke P,et al.Effect of cordycepin on interleukin10 production of human peripheral blood mononuclear cells[J].European Journal of Pharmacology,2002,453(2-3):309-317.

[18]Kuo YC,Weng SC,Chou C J,et al. Activation and proliferation signals in primary human T lymphocytes inhibited by ergosterol peroxide isolated from Cordyceps cicadae[J].British Journal of Pharm acology,2003,140(5):895-906.

[19]HUANG B M,HSU C C.Effects of Cordyceps sinensis on testosterone production in normal mouse Leydig cells[J].Life Sciences,2001,69:2 593- 2 602.

[20]張傳開,袁盛榕,劉進學.冬蟲夏草和中國擬青霉對細胞免疫功能的影響[J].中藥藥理與臨床,1998,14( 3):21- 23.

[21]郭應(yīng)祿,胡禮泉.男科學[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2004,204-206.