多發(fā)性硬化患者血清激肽釋放酶1和6水平分析

王夢涵，盧 宏#，焦淑潔，杜 冉，蔣 超，劉 希

1)鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科鄭州450052 2)鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科鄭州450052

多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)是一種以多發(fā)性病灶及緩解復(fù)發(fā)的病程為臨床特點的脫髓鞘疾病，具有特征性病理改變［1］。近年來研究［2］表明自身免疫可能是其主要的致病機(jī)制。激肽釋放酶1(kallikrein 1，klk1)和激肽釋放酶 6(kallikrein 6，klk6)屬于絲氨酸蛋白酶類家族，有研究［3］表明klk與MS患者病灶中的髓鞘脫失及其所致的軸索損傷相關(guān)。作者觀察了血清klk1、klk6水平與MS復(fù)發(fā)之間的關(guān)系，了解它們在MS中潛在的活性作用，進(jìn)一步探討MS的復(fù)發(fā)機(jī)制。

1 對象與方法

1.1 研究對象 MS初發(fā)組:2007年9月至2010年7月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科住院、首次發(fā)作的急性期MS患者50例，男19例，女31例，年齡15～50(35.2±5.4)歲。MS復(fù)發(fā)組:同期住院、反復(fù)發(fā)作的急性期(病程超過1 a，發(fā)作2次或2次以上，有2個或2個以上部位病變的客觀臨床依據(jù)［4］)MS患者50 例，發(fā)作次數(shù)2 ～8(3.9 ±1.4)次，男21例，女29例，年齡16～52(30.4±7.1)歲。以上2組病例符合McDonald診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］，均經(jīng)兩名以上神經(jīng)科醫(yī)師通過病史及相關(guān)檢查而診斷，同時排除其他多發(fā)性中樞神經(jīng)系統(tǒng)病變。其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病組:同期住院確診為其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病的患者50例，男20例，女30例，年齡19～58(36.1 ±6.3)歲。健康對照組:同期于門診體檢中心檢查的健康志愿者50名，男23例，女27例，年齡16～56(34.1±7.3)歲。所有受試者近期均無感染史，無其他自身免疫性疾病史和過敏性疾病史。所有受試者均簽署知情同意書。

1.2 血清klk1、klk6檢測 清晨空腹采集各組患者外周靜脈血3 mL，加入抗凝試管，2 000 r/min離心5 min后，取上層血清置－70℃冰箱冷藏待用。采用ELISA法檢測血清klk1、klk6水平。ELISA試劑盒購于Rapidbio公司，嚴(yán)格按照試劑盒的操作流程進(jìn)行檢測。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0分析數(shù)據(jù)，應(yīng)用單因素方差分析和LSD-t法比較4組受試者血清klk1、klk6水平的差異，應(yīng)用Spearman秩相關(guān)分析分析血清klk1、klk6水平與MS復(fù)發(fā)的關(guān)系，檢驗水準(zhǔn) α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組受試者血清klk1、klk6的水平 見表1。由表1可知，4組受試者血清klk1和klk6水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義，除其他神經(jīng)系統(tǒng)疾病組與健康對照組之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義外，其他各組間兩兩比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 各組受試者血清klk1及klk6的水平 μg/L

2.2 MS患者血清klk1、klk6水平與MS復(fù)發(fā)的關(guān)系 根據(jù)klk1、klk6水平將MS初發(fā)組與復(fù)發(fā)組患者進(jìn)行分類。根據(jù)MS復(fù)發(fā)患者血清klk1水平制作ROC曲線，得出約登指數(shù)最大時klk1水平為1.63 μg/L，同法得到約登指數(shù)最大時的 klk6水平為3.33 μg/L。血清klk1與klk6水平與MS復(fù)發(fā)的關(guān)系見表2。由表2可知，血清klk1、klk6水平與MS的復(fù)發(fā)呈正相關(guān)。

表2 血清klk1、klk6水平與MS復(fù)發(fā)的關(guān)系 例

3 討論

MS早期已存在軸索的損傷，其機(jī)制可能與激活的免疫系統(tǒng)和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生的炎性遞質(zhì)相關(guān)，而klk為這種炎性損傷的中介物質(zhì)之一［3］。

klk1主要通過釋放賴氨酸緩激肽與G蛋白耦聯(lián)的B受體(BK)結(jié)合，BK可能通過IL-12依賴途徑促使Th1細(xì)胞分化而誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞的成熟，從而參與炎癥反應(yīng)。Scarisbrick等［5］發(fā)現(xiàn)，klk1與MS進(jìn)展期神經(jīng)退行性改變有關(guān)，但不支持血清klk1水平與MS的復(fù)發(fā)相關(guān)。婁江濤等［6］發(fā)現(xiàn)，MS復(fù)發(fā)患者外周血血漿klk1濃度升高。該研究結(jié)果顯示:MS患者血清klk1水平明顯高于兩對照組，且MS復(fù)發(fā)組患者血清klk1水平高于MS初發(fā)組，提示klk1與MS復(fù)發(fā)有關(guān)。正常情況下，血清中MMP-9的表達(dá)水平極低，但klk1可以活化某些誘導(dǎo)物，從而激活外周初始型T細(xì)胞和內(nèi)皮細(xì)胞等釋放大量的MMP-9［7］，使其表達(dá)水平增高，參與MS中髓鞘脫失，推測klk1可能通過以上途徑參與MS復(fù)發(fā)。

以往研究［8］認(rèn)為，klk6是中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥發(fā)病的始動因素，因為這種蛋白酶的表達(dá)在活化的免疫細(xì)胞中得以上調(diào)，裂解了血腦屏障的主要組分，并容易降解髓鞘蛋白。Hebb等［9］認(rèn)為血清klk6水平在MS的初發(fā)者與復(fù)發(fā)者中不存在差異。Terayama等［8］的研究顯示，位于活動性中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘部位免疫細(xì)胞也可表達(dá)klk6，持續(xù)降解髓鞘蛋白，從而加重中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎性疾病，甚至可能導(dǎo)致MS的復(fù)發(fā)。該研究結(jié)果顯示:MS患者血清klk6水平明顯高于兩對照組，且MS復(fù)發(fā)組又高于初發(fā)組;同時相關(guān)性分析表明血清klk1及klk6水平與MS的復(fù)發(fā)相關(guān)。

綜上所述，血清klk1、klk6水平與MS的復(fù)發(fā)有關(guān)，klk1、klk6可能是MS復(fù)發(fā)期的血清學(xué)標(biāo)志物，但是要確切了解klk1、klk6參與MS復(fù)發(fā)的分子機(jī)制，尚需要進(jìn)一步研究。

［1］盧德宏，湯國才.多發(fā)性硬化的臨床病理學(xué)［J］.實用兒科臨床雜志，2005，20(4):293

［2］Guo MF，Ji N，Ma CG.Immunologic pathogenesis of multiple sclerosis［J］.Neurosci Bull，2008，24(6):381

［3］劉佩峰，趙永波.多發(fā)性硬化軸索和神經(jīng)元變性［J］.中國神經(jīng)免疫學(xué)和神經(jīng)病學(xué)雜志，2004，11(5):286

［4］Polman CH，Reingold SC，Edan G，et al.Diagnostic criteria for multiple sclerosis:2005 revisions to the“McDonald Criteria”［J］.Ann Neurol，2005，58(6):840

［5］Scarisbrick LA，Linbo R，Vandell AG，et al.Kallikreins are associated with secondary progressive multiple sclerosis and promote neurodegeneration［J］.Biol Chem，2008，389(6):739

［6］婁江濤，胡成進(jìn).組織型激肽釋放酶及相關(guān)肽酶在中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的作用［J］.生命的化學(xué)，2010，30(2):307

［7］Hartung HP，Kieseier BC.The role of matrix metalloproteinases in autoimmune damage to the central and peripheral nervous system［J］.J Neuroimmunol，2000，107(2):140

［8］Terayama R，Bando Y，Jiang YP，et al.Differential expression of protease M/neurosin in oligodendrocytes and their progenitors in an animal model of multiple sclerosis［J］.Neurosci Lett，2005，382(1/2):82

［9］Hebb AL，Bhan V，Wishart AD，et al.Human kallikrein 6 cerebrospinal levels are elevated in multiple sclerosis［J］.Curr Drug Discov Technol，2010，7(2):137