食管鱗狀細胞癌組織中PTEN、E-cadherin和CD44v6蛋白的表達

張思森，張謝夫，張云漢

1)鄭州大學第一附屬醫(yī)院普通外科鄭州450052 2)鄭州人民醫(yī)院普通外科 鄭州450003 3)鄭州大學第一附屬醫(yī)院病理科;河南省腫瘤病理重點實驗室鄭州450052

食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一。食管癌浸潤及轉(zhuǎn)移是致死的主要原因，因此，對食管癌浸潤轉(zhuǎn)移機制的探討已成為研究熱點之一。目前的研究主要集中于細胞與細胞間黏附功能的喪失和惡性腫瘤細胞突破基底膜向遠處游走的過程等相關(guān)因素。PTEN是繼p53、pRb、p16后又一重要抑癌基因，最早由Li等［1］從原發(fā)性乳癌、前列腺癌以及膠質(zhì)母細胞瘤細胞株克隆得到，是迄今為止惟一具有酪氨酸、磷酸絲氨酸/蘇氨酸雙特異性磷酸酶活性的新型抑癌基因。E-cadherin是上皮細胞中的黏附分子，對維持正常上皮細胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)完整性起著重要作用，有抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的功能［2］。CD44v6是一種變異型CD44分子，主要介導細胞與細胞及細胞外基質(zhì)間的黏附作用，其過度表達可使腫瘤細胞獲得轉(zhuǎn)移潛能［3］。作者探討了PTEN、E-cadherin和CD44v6的表達與食管癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系，旨在尋求早期食管癌浸潤轉(zhuǎn)移指標及抑制食管癌浸潤轉(zhuǎn)移的有效方法。

1 材料與方法

1.1 標本來源 食管癌標本52例，取自食管癌高發(fā)區(qū)安陽市腫瘤醫(yī)院2002年8月至10月的手術(shù)切除標本，標本離體0.5～1.0 h內(nèi)，冰上分離切取癌組織，常規(guī)石蠟包埋，3 μm厚切片。52例中男32例，女20例，年齡 38 ～77(58.6 ±16.3)歲;伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移20例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移32例;高分化9例，中分化13例，低分化30例;浸潤達淺肌層11例，深肌層11例和纖維膜30例;經(jīng)病理證實均為食管鱗狀細胞癌。另取該院同期23例癌旁中重度不典型增生標本和39例正常食管黏膜標本?；颊咝g(shù)前均未接受化療、放療及其他治療。

1.2 PTEN、E-cadherin、CD44v6檢測 采用免疫組化 SP法檢測。兔抗人 PTEN、E-cadherin及CD44v6多克隆抗體購于北京中杉金橋生物技術(shù)工程有限公司，SP免疫組化試劑盒為武漢博士德生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品，PTEN、E-cadherin、CD44v6一抗均按1∶100稀釋。實驗步驟按試劑盒說明書進行。用已知的食管鱗狀細胞癌陽性切片作陽性對照，用PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 判定標準 PTEN蛋白陽性細胞表現(xiàn)為胞核淡黃色或棕黃色顆粒狀著色，胞質(zhì)內(nèi)少量著色。E-cadherin蛋白陽性細胞表現(xiàn)為胞膜和胞質(zhì)棕褐色著色。CD44v6蛋白陽性細胞表現(xiàn)為胞膜上粗細一致的棕黃色顆粒樣著色，可出現(xiàn)少量胞質(zhì)著色。在高倍鏡下(400×)選取切片平展、細胞形態(tài)和組織結(jié)構(gòu)清晰的5個視野，共計數(shù)100個細胞，計算陽性細胞百分比，陽性細胞百分比＞10%為陽性。

1.4 統(tǒng)計學處理 應用SPSS 10.0進行統(tǒng)計學處理。不同組織間3種蛋白陽性表達率的比較采用χ2檢驗或精確概率法，癌組織中3種蛋白表達的關(guān)系采用列聯(lián)系數(shù)評價，檢驗水準α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 PTEN、E-cadherin和CD44v6蛋白在正常食管黏膜、癌旁不典型增生和食管鱗狀細胞癌組織的表達 見表1。

2.2 PTEN、E-cadherin、CD44v6 蛋白表達與食管鱗狀細胞癌臨床病理特征的關(guān)系 見表2。

2.3 PTEN、E-cadherin與CD44v6蛋白在食管鱗狀細胞癌組織中表達的關(guān)聯(lián)性 見表3～5。

表1 食管正常黏膜、癌旁不典型增生和食管鱗狀細胞癌中PTEN、E-cadherin、CD44v6蛋白的表達例(%)

表2 PTEN、E-cadherin和CD44v6蛋白的表達與食管鱗狀細胞癌臨床病理因素的關(guān)系 例(%)

表3 PTEN、E-cadherin蛋白在癌組織中表達的關(guān)系 例

表4 PTEN、CD44v6蛋白在癌組織中表達的關(guān)系 例

表5 E-cadherin、CD44v6蛋白在癌組織中表達的關(guān)系 例

3 討論

食管癌的發(fā)生、發(fā)展是個多步驟、多因素的復雜過程，在此過程中，抑癌基因的缺失或表達失調(diào)是其發(fā)生發(fā)展的重要原因之一。惡性腫瘤組織中PTEN主要通過基因的突變、缺失或甲基化而失活，其失活可以發(fā)生在 DNA、mRNA 和蛋白三個水平［4］，而PTEN基因突變在食管癌組織中的發(fā)生頻率較低。研究［5］發(fā)現(xiàn)食管癌組織中PTEN基因在轉(zhuǎn)錄水平表達沒有改變，因此，在蛋白水平研究PTEN與食管癌的關(guān)系可能有重要意義。近年來在一些消化道惡性腫瘤如胃癌、結(jié)腸癌等的研究中發(fā)現(xiàn)PTEN基因突變比較常見［6］，但這些腫瘤的組織學類型均為腺癌，而食管癌多為鱗狀細胞癌，PTEN基因突變在食管癌組織的低頻率發(fā)生是否與此有關(guān)值得探討。該研究結(jié)果顯示食管鱗狀細胞癌組織中PTEN蛋白的陽性表達率明顯低于癌旁不典型增生和正常食管黏膜組織;且PTEN蛋白陽性表達率從高分化癌、中分化癌到低分化癌逐漸降低，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者的陽性表達率高于有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，隨浸潤深度的增加陽性表達率也逐漸降低。以上結(jié)果表明PTEN的表達與食管鱗狀細胞癌的惡性程度、浸潤深度及轉(zhuǎn)移潛能有關(guān)。

近年來在乳癌、甲狀腺乳頭狀癌、膀胱癌、前列腺癌、大腸癌及鼻咽癌等腫瘤的研究［7-9］中證實，E-cadherin表達降低與癌的分化、侵襲和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著的相關(guān)性。該研究結(jié)果顯示，食管鱗狀細胞癌組織中E-cadherin表達水平顯著低于正常食管黏膜和癌旁不典型增生組織;低分化癌組織中E-cadherin的表達低于中、高分化者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者E-cadherin表達水平低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，并且隨著浸潤深度的加深，E-cadherin陽性表達率亦下降。因此推測癌組織中E-cadherin的表達下降與腫瘤分化程度、發(fā)展和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。腫瘤細胞E-cadherin陽性表達不利于其脫離轉(zhuǎn)移，E-cadherin低表達可能與不良預后有關(guān)。但最新研究［10］發(fā)現(xiàn)，血清中可溶性E-cadherin的水平與食管鱗狀細胞癌分化程度、發(fā)展和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移沒有顯著相關(guān)性。因此E-cadherin蛋白能否作為食管鱗狀細胞癌預后的一個獨立預測因子有待進一步研究。

已有一些研究［11-13］報道CD44v6的過表達與肺癌、胃癌、結(jié)腸癌等腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移相關(guān)。該研究結(jié)果顯示，CD44v6在食管鱗狀細胞癌組織中表達明顯上調(diào)，并隨著癌組織分化程度的降低和浸潤深度的增加而逐漸升高，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者陽性表達率高于無轉(zhuǎn)移者。說明CD44v6的陽性表達與食管鱗狀細胞癌的分化、浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，提示CD44v6的高表達是預示食管癌預后不良的標志。

作者還發(fā)現(xiàn)，食管鱗狀細胞癌組織中PTEN與E-cadherin蛋白的表達呈正關(guān)聯(lián)，而CD44v6蛋白的表達分別與PTEN、E-cadherin蛋白呈負關(guān)聯(lián)。再次說明惡性腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移是一個復雜、連續(xù)、多基因協(xié)同的過程，腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的各個階段至少有兩個或兩個以上功能不同的異常激活的癌基因各自發(fā)揮著不同作用，協(xié)同促進了細胞的癌變和轉(zhuǎn)移。聯(lián)合檢測這3項指標對食管癌的預后判斷具有重要的參考價值，對食管癌治療的臨床實踐具有一定的指導意義。

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