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    高效液相色譜法測定注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉主藥及雜質(zhì)的含量

    2011-06-18 03:46:10祝紅杰
    實用藥物與臨床 2011年6期

    田 力,祝紅杰

    哌拉西林鈉和他唑巴坦鈉組成的復(fù)方制劑具有很好的協(xié)同抗菌作用,臨床用于治療各種感染性疾病。目前,醫(yī)藥市場中存在多個生產(chǎn)哌拉西林鈉他唑巴坦鈉的廠家,其產(chǎn)品在癥狀緩解時間、治愈率等方面均存在一定的差別。本文考察了3個企業(yè)生產(chǎn)的注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉的主藥和雜質(zhì)含量。

    1 材料

    1.1 儀器 島津LC-2010CHT系列高效液相色譜儀(日本島津公司);色譜工作站465-06043LC solution single verl.22(中文工作站,日本島津公司);色譜柱Hypersil BDS-C18(250mm×4.6mm,5μm,大連依利特有限公司);十萬分之一分析天平(中德合資SARTORIOUS公司);DelTA320PH計(梅特勒-托利上海有限公司)。

    1.2 試藥 哌拉西林鈉標(biāo)準(zhǔn)品(93.5%,中國藥品生物制品檢定所,批號:130419);他唑巴坦鈉標(biāo)準(zhǔn)品(99.1%,中國藥品生物制品檢定所,批號:130511);注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4.5 g/支,美國惠氏制藥有限公司,批號:0907094、0908048、0908013);注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(1.125 g/支,華北制藥集團(tuán),批號:20100202、20091006、20100204);注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(2.25 g/支,珠海聯(lián)邦制藥有限公司,批號:00108301、00108305、00108309);甲醇(色譜純,美國TEDIA公司,批號:1010910);蒸餾水(自制去離子重蒸餾水,經(jīng)0.22μm微孔濾膜濾過);磷酸(天津市化學(xué)試劑六廠,批號:840404);四丁基氫氧化銨水溶液(10%,國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司,批號:20101111)。

    2 方法與結(jié)果

    2.1 色譜條件 色譜柱:Hypersil BDS-C18(250mm ×4.6mm,5μm);流動相為甲醇∶B 相溶液(50/50,V/V);流速:0.8mL/min;柱溫:30 ℃;檢測波長:220 nm;進(jìn)樣量:1μL。

    2.2 溶液的配制

    2.2.1 流動相中B相溶液的配制[1]取10%四丁基氫氧化銨水溶液14mL,加入800mL水,用磷酸調(diào)節(jié)pH值至3.5,即得。

    2.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品儲備液的配制 分別精密稱定哌拉西林標(biāo)準(zhǔn)品171 mg及他唑巴坦標(biāo)準(zhǔn)品20.2 mg于10mL容量瓶中,以50%(V/V)甲醇的水溶液稀釋至刻度,得含16 mg/mL的哌拉西林及2 mg/mL的他唑巴坦標(biāo)準(zhǔn)品儲備溶液。

    2.3 專屬性考察 分別取哌拉西林鈉和他唑巴坦鈉的標(biāo)準(zhǔn)品儲備溶液及兩種標(biāo)準(zhǔn)品的混合溶液 進(jìn)樣,進(jìn)樣量1μL,色譜圖見圖1~圖3。

    圖1 他唑巴坦鈉色譜圖

    圖2 哌拉西林鈉色譜圖

    圖3 標(biāo)準(zhǔn)品混合溶液色譜圖

    哌拉西林鈉和他唑巴坦鈉保留時間分別為9.566min和4.561min,兩峰均與雜質(zhì)峰分離良好,無干擾。

    2.4 線性關(guān)系考察 分別精密量取標(biāo)準(zhǔn)品儲備溶液適量,以50%(V/V)甲醇的水溶液稀釋至哌拉西林濃度為 2、4、8、10、12、16 mg/mL 及他唑巴坦?jié)舛葹?0.25、0.5、1、1.25、1.5、2 mg/mL 的溶液。分別精密吸取各濃度標(biāo)準(zhǔn)液1μL注入色譜儀,記錄峰面積,以峰面積(A)對濃度(C)進(jìn)行線性回歸,得哌拉西林鈉及他唑巴坦鈉的線性回歸方程分別為:A=2062830.8C+19400(r=1.0000);A=1272907.1C-9644.8(r=1.0000)。哌拉西林鈉在2~16 mg/mL、他唑巴坦鈉在0.25~2 mg/mL范圍內(nèi)濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

    2.5 精密度考察 精密量取8 mg/mL的哌拉西林及1 mg/mL的他唑巴坦標(biāo)準(zhǔn)品溶液,連續(xù)進(jìn)樣5次,記錄峰面積,計算RSD值。結(jié)果,哌拉西林及他唑巴坦的RSD分別為1.4%、0.2%。

    2.6 樣品的主藥和雜質(zhì)含量測定 分別取不同廠家各批號的樣品,用50%(V/V)甲醇的水溶液稀釋成含哌拉西林鈉10 mg/mL、他唑巴坦鈉1.25 mg/mL的樣品溶液。分別精密量取樣品溶液1μL注入色譜儀,記錄峰面積,計算哌拉西林、他唑巴坦及雜質(zhì)的含量。哌拉西林和他唑巴坦的含量數(shù)據(jù)結(jié)果見表1,雜質(zhì)含量數(shù)據(jù)結(jié)果見表2。

    表1 樣品中主藥含量測定結(jié)果(mg/mL,n=6)

    表2 樣品中雜質(zhì)含量測定結(jié)果(mg/mL,n=6)

    3 討論

    本實驗結(jié)果表明,3個廠家(各3批)樣品的哌拉西林平均含量分別為標(biāo)示量的102.8%、96.4%、103.1%,他唑巴坦含量分別為標(biāo)示量的99.8%、93.3%、98.1%,均符合藥典[2]規(guī) 定(90%~110%);雜質(zhì)含量分別為1.72%、2.74%、1.85%,符合藥典[2]規(guī)定(<4%)。

    實驗中為了便于計算,只統(tǒng)計了峰面積在10000以上的雜質(zhì)峰,保留時間分別為 3.65、4.218、5.414、6.415、7.532min,聯(lián)邦制藥的樣品比其他廠家多1個雜質(zhì)峰,保留時間為3.874min,推測是該廠家制劑的特殊輔料。影響藥物療效的常見因素有主藥的多晶型或手性、主藥的化學(xué)純度及其穩(wěn)定性與輔料等。輔料可以通過直接影響藥物性質(zhì)而增加或降低藥物的活性,也可以間接地通過輔料自身的性質(zhì)而影響藥效的發(fā)揮。本實驗僅對主藥的化學(xué)純度和雜質(zhì)的含量進(jìn)行了考察,3個廠家之間未見明顯差別,推測其不是影響臨床療效的因素。其他影響因素尚需進(jìn)一步研究考察。

    [1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010.

    [2]周為民,李健和,彭六保,等.高效液相色譜法測定注射用哌拉西林鈉他唑巴坦鈉(4∶1)含量及有關(guān)物質(zhì)[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥,2009,16(9):7-10.

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