瘀腫消溫度敏感型原位凝膠的基質(zhì)配比優(yōu)選

歐陽(yáng)榮 廖建萍 徐曉霞

（1 湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410007；2 湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410007）

瘀腫消溫度敏感型原位凝膠由生梔仁、大黃、金銀花、當(dāng)歸等11味中藥組成，具有活血止痛、清熱消腫、散瘀通絡(luò)的作用，臨床上用于治療急性軟組織損傷，具有消腫止痛快、療程短、療效好的優(yōu)點(diǎn)。原位凝膠（in situ gel）系指一類能以溶液狀態(tài)給藥后，立即在用藥部位發(fā)生相轉(zhuǎn)變，由液態(tài)轉(zhuǎn)化形成非化學(xué)交聯(lián)半固體凝膠的一類制劑[1]，獨(dú)特的溶液-凝膠轉(zhuǎn)變性質(zhì)使其兼有制備簡(jiǎn)單、使用方便、滯留時(shí)間長(zhǎng)等優(yōu)點(diǎn)[2]。本試驗(yàn)在瘀腫消溫度敏感型原位凝膠優(yōu)化的提取工藝和預(yù)試驗(yàn)的基礎(chǔ)上，進(jìn)行基質(zhì)配比的優(yōu)選，為其進(jìn)一步研究提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilent1100高效液相色譜儀（安捷倫科技有限公司）；分析天平DT-100（北京光學(xué)儀器廠）；不銹鋼電熱恒溫水浴鍋（北京市醫(yī)療設(shè)備廠）；NDJ-1旋轉(zhuǎn)式黏度計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）。

Poloxamer407（Pluronic F127，BASF，德國(guó)），Poloxamer188（Pluronic F68，BASF，德國(guó)），卡波姆934（BF Goodrich）；其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，選取Poloxamer188、Poloxamer407及卡波姆934的用量為考察因素，每個(gè)因素選取3個(gè)水平，以膠凝溫度為評(píng)價(jià)指標(biāo)，采用L9（34）正交表進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平見(jiàn)表1。根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果選取合格膠凝溫度試驗(yàn)號(hào)，再依次進(jìn)行膠凝強(qiáng)度和生物黏附力的測(cè)定。

2.2 供試品溶液制備

稱取規(guī)定量的卡波姆，加入適量的水，邊加邊攪拌，放置過(guò)夜使其充分溶脹；再分別稱取規(guī)定量的Poloxamer407、Poloxamer188，分別加入適量的水并進(jìn)行攪拌；將Poloxamer407溶液和Poloxamer188溶液先后加入到溶脹后的卡波姆中，邊加邊攪拌，將混合溶液置于4～10℃冰箱中10～12h，使其充分水化[3]，除去氣泡，再加入適量水使成100mL，即得原位凝膠溶液。按藥膏∶基質(zhì)（包括原位凝膠溶液和氮酮）以1∶9混合攪拌均勻即得供試品溶液。

2.3 膠凝溫度測(cè)定

取供試品溶液20mL置于30mL的燒杯中，燒杯置于以1℃/min速度升溫的水浴鍋中加熱，使用旋轉(zhuǎn)黏度計(jì)來(lái)測(cè)定不同溫度下原位凝膠的黏度，黏度變化產(chǎn)生突躍時(shí)的溫度就是我們所需要測(cè)定的凝膠溫度[1]，反復(fù)測(cè)定3次，取其平均值。結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 因素水平表

表2 L9（34）正交試驗(yàn)結(jié)果表

過(guò)低的膠凝溫度（低于25℃）給溫敏型凝膠的制備、存儲(chǔ)和使用都帶來(lái)問(wèn)題和困難，過(guò)高的膠凝溫度（高于30℃） 給溫敏型凝膠的相變帶來(lái)困難。故最佳膠凝溫度范圍為25～30℃。

表2說(shuō)明2、3、4、5、7號(hào)試驗(yàn)的基質(zhì)配比，膠凝溫度在合格范圍內(nèi)。

2.4 膠凝強(qiáng)度的測(cè)定

按以上L9（34）正交試驗(yàn)表中2、3、4、5、7號(hào)試驗(yàn) 基質(zhì)配比制備供試品，供試品依次編號(hào)為1、2、3、4、5。分別取以上供試品50g，置100mL具刻度的圓筒內(nèi)，再放入36.5℃恒溫水浴槽中使供試品膠凝。實(shí)驗(yàn)裝置參照文獻(xiàn)資料[4]，如圖1所示，圓筒C的內(nèi)直徑為2.2 cm，圓盤B中6個(gè)小圓的直徑均為5.0mm，砝碼固定質(zhì)量為180g，以圓盤B受壓下降5cm所需的時(shí)間（s）表示凝膠強(qiáng)度的大小。依次測(cè)定各供試品的膠凝強(qiáng)度，每份供試品重復(fù)測(cè)定3次，取平均值。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 膠凝強(qiáng)度與生物黏附力結(jié)果

2.5 生物黏附力的測(cè)定

按以上L9（34）正交試驗(yàn)表中2、3、4、5、7號(hào)試驗(yàn) 基質(zhì)配比制備供試品，供試品依次編號(hào)為1、2、3、4、5。實(shí)驗(yàn)裝置參照文獻(xiàn)資料[4]，如圖2所示。取家兔新鮮表皮兩段，分別將它們緊固于玻璃安瓿兩端E位置（黏膜面向外），將玻璃安瓿在37℃下保持10min后，取供試品0.15g涂在兩段新鮮表皮上再保持10min，然后立即將一個(gè)安瓿固定連接在平衡架上，另一個(gè)固定在可調(diào)支架上，調(diào)節(jié)支架F的高度，使左右保持平衡。在B處放入已稱重的燒杯并勻速緩慢往燒杯內(nèi)滴加自來(lái)水，直至使通過(guò)凝膠黏附的兩段組織恰好分開(kāi)，稱量燒杯及水的總質(zhì)量，每份供試品重復(fù)測(cè)定3次，取其平均值。生物黏附力以單位面積的剝離力（dyne/cm2）表示，公式采用Mikos[5]報(bào)道的生物黏附力計(jì)算公式f=0.98m/πr2。其中m為水及燒杯的總質(zhì)量，r為玻璃管的半徑。依次測(cè)定各供試品的生物黏附力，每份供試品重復(fù)測(cè)定3 次，取平均值。結(jié)果見(jiàn)表3。

編號(hào)為1的試驗(yàn)下降5cm所需的時(shí)間最短，膠凝強(qiáng)度最小，生物黏附力最??；編號(hào)為5的試驗(yàn)下降5cm所需的時(shí)間最長(zhǎng)，膠凝強(qiáng)度最大，生物黏附力最大。在膠凝溫度都合格的情況下，膠凝強(qiáng)度越大，生物黏附力越大膠凝效果越好，故最佳基質(zhì)配比為Poloxamer407、Poloxamer188、卡波姆分別為22%、3%、0.7%。

3 討 論

3.1 卡波姆934為白色疏松粉末，具有較強(qiáng)的吸濕性，投入水中溶脹時(shí)若操作不當(dāng)，易成團(tuán)或不完全潤(rùn)濕，影響成品的均勻性和細(xì)膩性。將適量水緩慢加入到卡波姆中，邊加邊攪拌，至分散均勻，靜置過(guò)夜，可使卡波姆完全溶脹。

3.2 在配置原位凝膠基質(zhì)時(shí)會(huì)產(chǎn)生很多小氣泡，將配置好的凝膠溶液置于4～10℃冰箱中約10～l2h，使其充分水化[3]，氣泡即可除去。

3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，所制瘀腫消溫度敏感型原位凝膠在冷藏條件下性狀、含量等均未發(fā)生明顯變化，表明優(yōu)選出的工藝比較穩(wěn)定。為進(jìn)一步檢驗(yàn)原位凝膠的穩(wěn)定性，筆者還將對(duì)其進(jìn)行加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期試驗(yàn)的考察。

[1]杜廣增,趙浩如.Poloxamer 407溫敏性即型凝膠的制備和應(yīng)用進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展,2008,32(4):163-167.

[2]魏培,鄧樹(shù)海,李凌冰,等.原位凝膠緩釋給藥系統(tǒng)的研究進(jìn)展[J].中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志,2007,38(12):890-894.

[3]Dumortier G,Grossiord JL,Agnely F,et a1.A review of poloxamer 407 pharmaceutical and pharmacological characteristics[J].Pharm Res,2006,23(12):2709-2728.

[4]徐玉紅,李東,王蔓琳,等.聚糖對(duì)溫敏性原位凝膠基質(zhì)體外流變學(xué)特性的影響[J].藥物研究,2007,16(13):55.

[5]Mikos AG,Peppas NA.Bioadhesive analysis of controlled releasesystem.Ⅳ.An experimental method for testing the adhesion of microparticles with mucosa[J].J Controlled Release,1990,12(1):31-37.