消乳散結(jié)膠囊提取工藝中芍藥苷轉(zhuǎn)移率探究

史亞軍，唐志書(shū)，宋忠興，楊明

消乳散結(jié)膠囊為國(guó)家藥品監(jiān)督管理局藥品標(biāo)準(zhǔn)[WS-11331（ZD-1331）-2002]收載品種，處方由香附、全蝎、牡丹皮、柴胡、當(dāng)歸、玄參、白芍等 16 味藥材組成，具有疏肝解郁，化痰散結(jié)，活血止痛之功效，臨床用于肝郁氣滯，痰瘀凝聚所致的乳腺增生，乳房脹痛等。原生產(chǎn)工藝是將香附、全蝎、牡丹皮 3 味粉碎成細(xì)粉；柴胡、當(dāng)歸、玄參、丹參、土貝母 5 味以 60%乙醇提取，其余白芍等加水提取后與前述兩部分提取物混合制粒后制成膠囊。在生產(chǎn)過(guò)程中發(fā)現(xiàn)其芍藥苷轉(zhuǎn)移率較低，且質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中芍藥苷的含量限度也很低，而芍藥苷作為該制劑中明確的有效成分，其含量對(duì)療效的發(fā)揮有著重要的作用。本文擬對(duì)其制備過(guò)程中各工序產(chǎn)物的芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定，從而尋找影響轉(zhuǎn)移率的因素，為本品的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)研究和提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)做出有益探索，也為其他中成藥的二次開(kāi)發(fā)提供借鑒。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

Waters 600E 高效液相色譜儀、Waters 600 泵、Waters 2487 紫外檢測(cè)器及 Millennium32 色譜工作站為美國(guó)Waters 公司產(chǎn)品；供試藥材均由咸陽(yáng)市藥材公司提供，經(jīng)陜西中醫(yī)學(xué)院中藥鑒定教研室胡本祥教授鑒定，均符合藥典相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；乙腈為色譜純；其他試劑均為分析純；水為雙蒸水；芍藥苷對(duì)照品由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供，批號(hào)為110736-200423。

1.2 方法

1.2.1 根據(jù)制備工藝獲得各工序產(chǎn)物 處方中共有 16 味藥材，按制備工藝，香附、全蝎、牡丹皮 3 味，粉碎成細(xì)粉，備用；柴胡、當(dāng)歸、玄參、丹參、土貝母 5 味，加 60%乙醇回流提取 2 次，每次 1.5 h，濾過(guò)，濾液減壓回收乙醇，得清膏①備用；將白芍等 8 味藥材加水煎煮 2 次，第1 次1.5 h，第2 次 1 h，濾過(guò)，合并為濾液②，減壓濃縮至相對(duì)密度為1.08～1.10（60℃）的清膏③，加乙醇使含醇量達(dá) 50%，冷藏 24 h，濾過(guò)，得濾液④；濾液④減壓回收乙醇，加入清膏①，并繼續(xù)濃縮為相對(duì)密度 1.32～1.35（60℃）的稠膏⑤；減壓干燥，粉碎，與牡丹皮等 3 味中藥的細(xì)粉混勻，得干浸膏⑥；加入淀粉，混勻，裝入膠囊，即得成品。

1.2.2 含量測(cè)定 高效液相法對(duì)白芍和牡丹皮藥材中芍藥苷含量進(jìn)行測(cè)定，再分別測(cè)定水提取液②、清膏③、水提醇沉液④、醇提清膏①、水提醇沉清膏濃縮后所得稠膏⑤、與藥材細(xì)粉混合后的干浸膏⑥和成品中芍藥苷的含量。

1.2.2.1 色譜條件 色譜柱 Kromosil ODSC18（5 μm，4.6mm×200mm），乙腈：0.1%磷酸（11∶89）為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為230 nm，柱溫：室溫。

1.2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取芍藥苷對(duì)照品適量，加甲醇制成 0.062 mg/ml 的溶液，作為對(duì)照品。

1.2.2.3 供試品溶液的制備

⑴藥材供試品溶液制備：取白芍和牡丹皮藥材粉 0.1 g，精密稱(chēng)定，置 50 ml 容量瓶中，加稀乙醇35 ml，超聲處理30min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

⑵煎煮液（濾液②）、濃縮液（清膏③）、醇沉液（濾液④）、稠膏（⑤）供試品溶液的制備：精密吸取煎煮液 20 ml、清膏 2 ml、醇沉液 2 ml，精密稱(chēng)取稠膏 0.8 g，分別置 50 ml容量瓶中，各加稀乙醇 35 ml，超聲處理 15min，放冷，加稀乙醇至刻度，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

⑶干浸膏（⑥）、成品供試品溶液的制備：精密稱(chēng)取干浸膏 0.5 g、膠囊內(nèi)容物 0.9 g，分別置具塞錐形瓶中，各精密加甲醇 20 ml，密塞，稱(chēng)定重量，超聲處理 30min，取出，放冷，再稱(chēng)定重量，用甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

1.2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)及線(xiàn)性范圍 分別精密吸取對(duì)照品溶液（濃度 0.062 mg/ml）4、8、12、16、20 μl，按上述色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積對(duì)芍藥苷含量進(jìn)行回歸，計(jì)算的回歸方程為：A = 1894198C + 2975，相關(guān)系數(shù) r = 0.9999，表明芍藥苷在 0.248～1.240 μg 范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好。

1.2.2.5 方法學(xué)研究 按上述方法進(jìn)行測(cè)定，精密度實(shí)驗(yàn)RSD 為1.56%，重復(fù)性實(shí)驗(yàn) RSD 為1.10%，穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)在 8 h 內(nèi)其 RSD 為0.86%，芍藥苷的平均回收率為98.36%、RSD 為1.07%，表明本方法精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性和回收率均符合要求。

1.2.2.6 樣品測(cè)定 分別精密吸取芍藥苷對(duì)照品溶液10 μl、白芍、牡丹皮藥材供試液 10 μl、煎煮液、濃縮液、醇沉液、稠膏供試品溶液 5 μl，干浸膏、成品供試品溶液10 μl，按 1.2.2.1色譜條件測(cè)定芍藥苷含量。

2 結(jié)果

測(cè)定原料及各階段產(chǎn)物中芍藥苷含量，計(jì)算芍藥苷在各工序的轉(zhuǎn)移率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 樣品中芍藥苷含量測(cè)定及轉(zhuǎn)移率結(jié)果（n = 3）

3 討論

芍藥苷在固體狀態(tài)下受溫度、時(shí)間的影響較小，但在溶液中穩(wěn)定性較差，有研究表明其水溶液在 95℃保存3.5 d，結(jié)果含量較保溫前下降了 60%[1]，說(shuō)明芍藥苷對(duì)熱的穩(wěn)定性與含水率有關(guān)。在制劑生產(chǎn)過(guò)程中，芍藥苷始終處于含水的狀態(tài)下，而芍藥苷本身結(jié)構(gòu)中含有苯甲酸酯鍵，在有水的條件下受熱易分解或受其他成分的干擾，從而含量降低。在本品制備工藝中白芍采用水煎煮提取，芍藥苷的提取率為35.3%；濃縮至清膏時(shí)芍藥苷僅保留原藥材的 29.3%；醇沉并回收乙醇后芍藥苷僅保留原藥材的 24.9%；繼續(xù)濃縮至稠膏時(shí)芍藥苷僅保留原藥材的 24.1%，加入牡丹皮細(xì)粉后，芍藥苷含量增加了 87.2%，使得成品轉(zhuǎn)移率為36.7%。數(shù)據(jù)分析結(jié)果提示，本品在制備過(guò)程中應(yīng)盡可能采取減壓低溫提取濃縮干燥，并盡量縮短受熱時(shí)間。

盡管成品中白芍提取轉(zhuǎn)移率偏低（24%），但由于牡丹皮細(xì)粉的加入，使 3 批成品中芍藥苷平均含量在0.5217 mg/粒。牡丹皮藥材在 2005 版藥典中并未規(guī)定芍藥苷的含量，根據(jù)文獻(xiàn)[2-3]，牡丹皮來(lái)源廣泛，其中芍藥苷的含量差異較大，含量范圍為0.2%～2.0%。牡丹皮由于粉碎后直接加入，轉(zhuǎn)移率按照 90%計(jì)算，結(jié)合藥典中白芍的最低含量和本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)論，建議適當(dāng)提高本品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的含量限度至 0.4 mg/粒（原標(biāo)準(zhǔn)為0.2 mg/粒）。

提取液、清膏、稠膏等液體物料在供試品制備時(shí)采用稀乙醇作為提取溶劑，是因?yàn)樵谶M(jìn)行工藝含量測(cè)定方法學(xué)研究時(shí)進(jìn)行了回收率實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，用甲醇稀釋溶解時(shí)回收率無(wú)法達(dá)到要求（90%～110%），而用稀乙醇回收率較高，原因可能是甲醇的加入使提取液產(chǎn)生了較為嚴(yán)重的醇沉現(xiàn)象，沉淀過(guò)程中包裹部分芍藥苷，通過(guò)超聲也不能完全提取，因此采用稀乙醇作為提取溶劑，提取率符合要求。而在干浸膏和成品等固體進(jìn)行含量測(cè)定時(shí)，采用了質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的供試品制備方法，其回收率是符合要求的，且以甲醇為溶劑制備的供試品溶液的雜質(zhì)峰較稀乙醇少，因此在固體樣品供試品制備中采用了甲醇作為提取溶劑。

現(xiàn)代研究表明，芍藥苷有一定降血糖、免疫調(diào)節(jié)和抗腫瘤作用[4]，對(duì)消乳散結(jié)膠囊的功能主治有一定的支持作用，應(yīng)該為本制劑的主要有效成分，因此應(yīng)該盡可能提高其轉(zhuǎn)移率以保證制劑療效。目前在進(jìn)行中成藥二次開(kāi)發(fā)的過(guò)程中，許多制劑的前處理對(duì)有效成分的轉(zhuǎn)移率都有一定影響?，F(xiàn)代中藥制劑是在傳統(tǒng)湯劑基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的，傳統(tǒng)湯劑煎煮后即可服用，且煎煮時(shí)間較短，并無(wú)純化、濃縮、干燥等工序。而現(xiàn)代中藥制劑提取時(shí)間較長(zhǎng)，還要經(jīng)歷濃縮干燥等過(guò)程，對(duì)有效成分可能產(chǎn)生影響，使得多數(shù)中成藥作用弱于湯劑。因此，在進(jìn)行中藥新藥和現(xiàn)有中成藥二次開(kāi)發(fā)的過(guò)程中，應(yīng)在尊重中藥傳統(tǒng)提取方法的基礎(chǔ)上，充分考慮有效成分的轉(zhuǎn)移率來(lái)進(jìn)行工藝革新和改進(jìn)。

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