鼻咽癌中nm23 與PCNA的表達(dá)與其轉(zhuǎn)移的關(guān)系

方偉達(dá) 梁文勇 余其昌

鼻咽癌是我國(guó)腫瘤疾病中的常見病，且占頭頸部腫瘤發(fā)病率的首位。nm23蛋白屬于腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因，其表達(dá)的減少可以導(dǎo)致腫瘤的轉(zhuǎn)移；增殖細(xì)胞核抗原( proliferating cell nuclear antigen,PCNA)可以反映細(xì)胞的增殖狀況。我們通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)nm23蛋白和PCNA在鼻咽癌組織中的表達(dá),初步分析其表達(dá)結(jié)果與鼻咽癌浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移、惡性程度及預(yù)后的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 材料來源

收集我院2006年9月～2007年11月經(jīng)病理檢查確診的66例鼻咽癌患者的資料。所有患者均未經(jīng)放射及化學(xué)藥物治療，并有完整臨床及隨訪資料,其中男性48例,女性18例,年齡18～73歲,中位年齡為48歲。同時(shí)選擇該期間病理診斷為慢性鼻咽炎患者32例作為對(duì)照組。

1.2 免疫組化染色

免疫組化染色采用SP法,第一抗體nm23蛋白和PCNA以及SP試劑盒均購(gòu)自福州邁新公司,抗體均為即用型。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林溶液固定,石蠟包埋,切片,行HE染色和免疫組化染色。用已知陽性片做陽性對(duì)照,用PBS液代替一抗做陰性對(duì)照。按照說明書進(jìn)行操作。

1.3 結(jié)果判定

nm23蛋白表達(dá)主要位于胞質(zhì)內(nèi),胞膜及胞核內(nèi)可見少量弱陽性表達(dá)；PCNA以細(xì)胞核中出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性細(xì)胞;在400倍顯微鏡下計(jì)數(shù)5個(gè)隨機(jī)視野,取平均值,分別記為:陽性細(xì)胞數(shù)≤5%為“-”；5%<陽性細(xì)胞數(shù)≤25%為“+”； 25%<陽性細(xì)胞數(shù)≤50%為“++”；陽性細(xì)胞數(shù)> 50%為“+++”。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析。標(biāo)本均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)，率的比較采用 χ2檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎中nm23蛋白和PCNA的表達(dá)

nm23蛋白在鼻咽癌組織和鼻咽慢性炎中的陽性率分別為66.7%(44/66)、21.9%(7/32)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。PCNA在鼻咽癌組織和慢性鼻咽炎組織中的陽性表達(dá)率分別為60.6%(40/66)、12.5%(4/32)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 鼻咽部不同病變組織nm23蛋白和PCNA的表達(dá)情況(例)

2.2 鼻咽癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中nm23蛋白和PCNA的表達(dá)

nm23蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中的陽性率為21.4%，83.3%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；PCNA在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組和非轉(zhuǎn)移組中的陽性率為78.6%，25.0%，兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見表2。

表2 鼻咽癌轉(zhuǎn)移和非轉(zhuǎn)移組PCNA和nm23蛋白的表達(dá)情況(例)

2.3 鼻咽癌組織中nm23蛋白和PCNA的表達(dá)相關(guān)性

在 66例鼻咽癌中，nm23蛋白和PCNA相互間無明顯的關(guān)聯(lián)性，見表3。

表3 nm23蛋白和PCNA在鼻咽癌的表達(dá)關(guān)系 (例)

3 討論

nm23基因最先是1988年在美國(guó)國(guó)立癌癥研究所從鼠黑色素瘤細(xì)胞系cDNA 基因文庫(kù)中分離鑒定出來的抗轉(zhuǎn)移癌基因,因?yàn)樵诘娃D(zhuǎn)移細(xì)胞株中nm23 基因的表達(dá)強(qiáng)度是高轉(zhuǎn)移細(xì)胞株的10 倍,這就表明nm23 基因可能與腫瘤的轉(zhuǎn)移抑制有關(guān)。nm23 基因的蛋白產(chǎn)物是NDPK,它為正常組織發(fā)育所必需，nm23蛋白的點(diǎn)突變、等位基因丟失均可使nm23蛋白失活或者減少,導(dǎo)致1種有利于畸形分化的紊亂狀態(tài)，進(jìn)而喪失對(duì)腫瘤轉(zhuǎn)移的抑制功能，同時(shí)nm23 基因表達(dá)低調(diào)節(jié)時(shí),提示預(yù)后較差。本組實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,鼻咽癌組織中nm23 蛋白的陽性表達(dá)率與慢性鼻咽炎比較有顯著性差異；nm23蛋白在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組中低表達(dá),說明nm23 低表達(dá)減弱了抑制腫瘤轉(zhuǎn)移的能力，故可將檢測(cè)nm23 的表達(dá)作為預(yù)測(cè)鼻咽癌轉(zhuǎn)移情況的1項(xiàng)較好指標(biāo)。

增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)又稱周期素,作為DNA 聚合酶輔助蛋白，其表達(dá)和合成與細(xì)胞增殖周期相關(guān)。細(xì)胞增殖率可反應(yīng)腫瘤的生物學(xué)活性，細(xì)胞過度增殖可能導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生，因此腫瘤細(xì)胞增殖水平反映了腫瘤的惡性程度。PCNA 的表達(dá)可以反映細(xì)胞的增殖活性，所以檢測(cè)細(xì)胞PCNA已廣泛應(yīng)用于判斷各種腫瘤疾病的惡性程度。王書芹等[1]研究鼻咽癌組織中PCNA 的表達(dá)時(shí)發(fā)現(xiàn),PCNA 高表達(dá)者較易發(fā)生轉(zhuǎn)移,但PCNA 的表達(dá)與患者的生存期無關(guān)。而吳又明等[2]研究認(rèn)為,PCNA 高表達(dá)者較易發(fā)生轉(zhuǎn)移,并且PCNA 高表達(dá)者生存期較長(zhǎng),原因是PCNA 高表達(dá)者細(xì)胞增殖速度快,對(duì)放療敏感性強(qiáng),放療效果好。本研究發(fā)現(xiàn),鼻咽癌組織中PCNA的陽性表達(dá)率與慢性鼻咽炎比較有顯著性差異，這與朱秀梅等[3]的研究結(jié)果相符。PCNA在鼻咽癌轉(zhuǎn)移組中的比例低于非轉(zhuǎn)移組，此觀點(diǎn)與上面學(xué)者的觀點(diǎn)有相同之處。本研究結(jié)果表明PCNA的表達(dá)與鼻咽癌的惡性程度和高轉(zhuǎn)移能力相關(guān),是評(píng)價(jià)鼻咽癌有價(jià)值的指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)表明nm23蛋白和PCNA兩者間并沒有明顯的相關(guān)性，這是否與樣本量較少有關(guān)還有待于進(jìn)一步探討。

總之，我們認(rèn)為,nm23蛋白和PCNA均能各自很好地反映鼻咽癌的惡性程度和轉(zhuǎn)移性，并能作為預(yù)測(cè)鼻咽癌轉(zhuǎn)移情況的1項(xiàng)較好的參考指標(biāo)。

[1] 王書芹,周小軍,禤瑞霞.鼻咽癌組織中PCNA 和P16 的表達(dá)及意義〔J〕.中華臨床醫(yī)學(xué)雜志,2004,5(4) :31.

[2] 吳又明,儲(chǔ) 兵.nm23、P53、PCNA 的表達(dá)與鼻咽癌轉(zhuǎn)移預(yù)后關(guān)系的研究〔J〕.診斷病理學(xué)雜志,2000,7(3) :204.

[3] 朱秀梅，鐘良清.MCM5和PCNA在鼻咽低分化鱗癌中的表達(dá)及意義〔J〕.中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥，2009,9(16)：36.