南昌地區(qū)獻血者血液內(nèi)毒素含量調(diào)查

苗燕平，王 健，韓 玲，何華慶

(江西省血液中心，江西 南昌 330077)

輸血安全、有效是采供血機質(zhì)量目標的重點[1-2]，細菌污染是影響血液質(zhì)量最常見因素之一，而且主要是由于革蘭陰性細菌感染，革蘭陰性細菌可產(chǎn)生內(nèi)毒素，為此，本中心采用動態(tài)濁度法檢測南昌地區(qū)無償獻血人群血液內(nèi)毒素，現(xiàn)將調(diào)查報告如下。

1 材料與方法

1.1 樣本來源 從采集的血液中分離的血漿標本共326人份標本，自愿獻血者符合國家獻血健康要求的年齡l8～55歲，其中男性172人份、女性154人份，血型A、B、O和AB分別為96人份、90人份、109人份和31人份。

1.2 試劑和儀器 EKT-1M動態(tài)內(nèi)毒素檢測試劑盒 (批號：EKT-107, 靈敏度0.05EU/ml，北京金山川)；細菌內(nèi)毒素檢查用水(批號200910)；標準內(nèi)毒素(批號 20090525，4EU/支，北京金山川)； MB-80微生物快速動態(tài)檢測系統(tǒng)、T01智能恒溫儀、冰浴槽均由北京金山川科技發(fā)展有限公司提供。

1.3 實驗方法

1.3.1 血漿制備 血液采集與血液保存液抗凝劑(枸櫞酸鹽)充分混均后,取血袋導管離心，選擇淡黃澄清的正常血漿(去除脂肪、溶血等異常血漿)并熱合使用，血漿樣本直接檢測或-25℃冰凍保存待檢；實驗使用玻璃試管、吸頭均不含有外源性內(nèi)毒素。

1.3.2 待測樣品制備 取上述血漿0.10ml，加入裝有0.90ml樣品處理液中，混勻后置70℃保溫10min，取出后放入冷水浴中冷卻至37℃以下即為待測血漿樣品。

1.3.3 樣本檢測 取待測血漿樣品0.20ml加入反應主劑中，溶解后使用微量加樣器轉(zhuǎn)移至9mm×65mm無熱原平底反應管中，插入MB-80微生物動態(tài)檢測系統(tǒng)中進行反應，反應結(jié)束后由標準曲線自動計算出待測血漿中內(nèi)毒素含量。

2 結(jié)果

326 人份血漿內(nèi)毒素含量測定結(jié)果顯示見表1。

表1 326份樣本內(nèi)毒素測定結(jié)果

3 討論

革蘭陰性細菌為保存血液的主要感染菌群，其產(chǎn)生內(nèi)毒素的成份為細胞壁的脂多糖，具有很強的細胞毒作用，可引起發(fā)熱、微血管擴張、炎癥反應，甚至引起高熱、低血壓休克和DIC[3]。因此對血液內(nèi)毒素監(jiān)測和臨床輔助診斷越來越受到國內(nèi)外的關(guān)注。本實驗室引進MB-80微生物動態(tài)檢測系統(tǒng)進行細菌內(nèi)毒素定量檢測，通過實驗與摸索，建立了血液內(nèi)毒素的檢測方法。

從本次檢測結(jié)果可以看出，南昌地區(qū)正常人群血液內(nèi)毒素含量低，所使用鱟試劑靈敏度達不到人體內(nèi)毒素含量最低水平，從而顯示出血液內(nèi)毒素含量＜0.05183EU/ml。因此，生產(chǎn)廠家能盡快提供靈敏度更高、穩(wěn)定性更好鱟試劑，以便進一步檢測顯得十分必要。值得一提的是，12、32、89、90、241 號樣本實測值均＞0.05183EU/ml。 由于樣本未能重新檢測，但筆者分析認為可能是檢測污染所致。隨著內(nèi)毒素檢測廣泛應用，解決好血液樣本對鱟試劑干擾和試劑靈敏度問題，檢測血液的內(nèi)毒素含量，對于完善血液內(nèi)毒素檢測和建立本地區(qū)正常人群細菌內(nèi)毒素參考范圍意義重大。

MB-80微生物動態(tài)檢測系統(tǒng)進行血液內(nèi)毒素檢測，能直觀地觀察樣品的變化情況，尤其是臨界值的樣本，對于血液及其制品的質(zhì)量控制具有非常重要的意義[2]。由于血液成分十分復雜，對內(nèi)毒素動態(tài)濁度檢測實驗的干擾較大，需要選取無乳糜、無溶血樣本，同時70℃水浴10min，目的是消除血漿蛋白質(zhì)對實驗干擾；優(yōu)化血漿同體系模型法建立標準曲線,有效的解決受檢樣本與標準系統(tǒng)的誤差；最后是嚴謹操作防止內(nèi)毒素污染，是獲得檢測結(jié)果準確的重要保證措施。

[1]曾曉悅,吳欣欣.2009年獻血淘汰人群情況分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2011,29(2):177-178.

[2]王旭安,曾曉悅.2010年血液報廢情況分析[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2011,29(4):433-434.

[3]單路娟,邱 陽,郭 莉,等.內(nèi)毒素的測定與臨床意義[J].大連醫(yī)科大學學報,2004,26(3):231-233.

[4]張 維.MB-80微生物動態(tài)檢測系統(tǒng)應用于血站內(nèi)毒素檢測探討[J].中國當代醫(yī)藥,2010,17(7):130-131.