全自動生化分析儀試劑間攜帶污染及解決方法

杜立水

(山東省肥城礦業(yè)中心醫(yī)院檢驗科，山東 肥城 271608)

全自動生化分析儀是臨床實驗室必備的檢驗儀器，具有快速、準確、重復性好及多樣本處理能力等優(yōu)點，隨著檢測方法學的改進和校準品質量的提高，使得臨床生化分析的準確度和精密度得到了進一步的提高。但在分析過程中由于生化分析儀共用試劑針、攪拌棒以及比色杯，經過長期使用或保養(yǎng)不當致其清洗能力下降時，則達不到應有的清洗效果，從而引起試劑間的攜帶污染[1]。我們在日常工作中，使用日立7170S型全自動生化分析儀觀察到同時測定含有肌酐和脂蛋白a、前白蛋白的項目組合以及總蛋白和銅離子的組合項目時，發(fā)現(xiàn)脂蛋白a、前白蛋白和銅離子結果明顯增高，而單獨復查時結果正常。用去離子水增加沖洗量和專用清潔劑清洗不能完全消除攜帶污染。通過改變以上項目的位置和分析順序，則可以有效地避免試劑間的相互污染?，F(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 日立7170S型全自動生化分析儀。肌酐試劑(堿性苦味酸法，批號60055970/4)為上海申能－德賽診斷技術有限公司產品。脂蛋白(a)試劑(免疫比濁法，批號100505)為北京利德曼生化技術有限公司生產。前白蛋白試劑(免疫比濁法，批號100303)為浙江伊利康生物技術有限公司產品?？偟鞍自噭?雙縮脲終點法，批號012301L)為北京利德曼生化股份有限公司產品。銅離子試劑(終點法，批號006081E)為北京利德曼生化股份有限公司產品。

1.2 實驗方法

1.2.1 測定參數 嚴格按試劑說明書提供的參數進行設定。

1.2.2 交叉干擾實驗方法 50份健康體檢人員的血清標本，單獨測定脂蛋白a和前白蛋白，其脂蛋白a測定值范圍為38.20～300mg/L，前白蛋白測定值范圍為208～391mg/L。然后再按照如下順序分別進行混合血清測定，肌酐→脂蛋白(a)、肌酐→前白蛋白；測肌酐后用蒸餾水加強沖洗一次，再次測定脂蛋白(a)和前白蛋白。

1.2.3 用同樣方法先單獨測定銅離子，測定值范圍為6.5～38.2μmol/L。再測總蛋白，然后再測銅離子。

1.3 攜帶污染率的計算 單獨測定的項目結果用A表示，測定施污染項目后再次測定的受污染項目的結果用B表示。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 10.0統(tǒng)計分析軟件作配對資料的t檢驗處理，以P＜0.05具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 按照實驗方法，對50份標本進行分析，結果對比見表1。從表中可看出，在日立7170S全自動生化分析儀上設置清除試劑間攜帶交叉干擾的清洗程序，再從肌酐項目轉向脂蛋白a項目時再對試劑針用蒸餾水加強沖洗一次。仍不能消除試劑攜帶交叉干擾。同樣將上述清洗程序中使用的蒸餾水分別換為酸性、堿性清洗液加強清洗，將清洗后的測定結果與單獨測定脂蛋白a和前白蛋白所得結果分別進行t檢驗，統(tǒng)計學分析結果顯示除用堿性清洗液清洗后結果與單獨測定結果差異無統(tǒng)計學意義外，其余結果差異仍有統(tǒng)計學意義 (P＜0.05)，具體結果見表1。

2.2 改變儀器檢測順序 在肌酐與脂蛋白a之間穿插一個項目或增加水沖洗量時，結果仍然存在試劑交叉污染。將脂蛋白a排在血脂組合項目中間，進行盲法測定，測定結果為146±38mg/L，分別與單獨測定脂蛋白a所得結果進行顯著性檢驗，P＞0.05。用同樣方法，在測定銅離子時，將該項目排在組合中間，就可以避免雙縮脲試劑對銅試劑的試劑針攜帶污染。

表1 50份標本測定結果

3 討論

3.1 多通道生化分析儀的試劑加樣針需接觸各種試劑成分，按常規(guī)清洗，一般難以清洗干凈，特別是攪拌棒在反應杯中將血清和試劑混勻時，就容易在兩個樣品間或兩個測試項目之間出現(xiàn)攜帶污染。以去離子水清洗，如果清洗不干凈，前一測試項目的試劑針、樣品針或混勻器的殘留部分將對下一測定項目造成很大影響，導致生化分析儀試劑之間存在交叉污染。如果某一試劑含有下一測試所要測定的底物或含有的某種成分與下一反應所要測定的底物有作用，則直接干擾下一反應的測定結果。在試劑污染情況下，下一反應進程是前后兩種試劑綜合作用的結果，也干擾下一反應的測定結果[2]。因此生化分析儀在吸取不同試劑時，要對試劑針內外壁用蒸餾水進行徹底清洗。常規(guī)清洗有時難以將取樣針清洗干凈，從而造成項目之間的試劑污染而影響測定結果[3]。特別是儀器老化、維護欠缺時的清洗能力低下和儀器內污垢的積聚致黏附增加使得儀器不能有效消除攜帶污染。增加清洗次數，可明顯降低儀器的攜帶污染率；用專用清洗液加強清洗，可提高清洗效果[4]。日立生化分析儀專用的堿性清洗液，能夠比較徹底地對儀器管道及針腔清洗，對于污染性較強的項目，如肌酐、總蛋白等，在設置分析程序時，要增加堿性清洗液沖洗量和沖洗次數，降低攜帶污染。

3.2 實驗表明，僅用蒸餾水、酸性清洗劑加強清洗試劑針仍不能消除部分檢驗項目之間干擾現(xiàn)象。通過改變儀器的檢測順序，將被干擾項目的順序排在干擾項目順序之前或中間增加其它項目，隔絕兩者的直接聯(lián)系，可降低污染。因此建議，在生化分析儀上如果出現(xiàn)交叉污染時，可以用更改檢測順序的方法，同時設置使用蒸餾水加強清洗程序，從而大大減低試劑之間的交叉污染，對于污染嚴重的項目，應在測定該項目后設置使用堿性清洗液、蒸餾水進行清洗，將對下一個項目的干擾降到最低限度。

3.3 要求檢驗人員對儀器的工作狀態(tài)要了如指掌，熟悉各種試劑反應的原理和各種試劑的組成成份，并在一個樣本的項目選擇或一個樣本的最后一項與下一樣本的第一個項目選擇時對于試劑交叉污染的可能性加以考慮，合理安排項目順序或樣本順序，以便得到更為合理的結果。

3.4 加強儀器的日常保養(yǎng)和維護，是保證測定結果準確性的基礎。試劑針和攪拌棒應每天用無水乙醇從上往下輕輕擦拭，在擦拭攪拌棒時勿損傷其表面的疏水物質。有加強清洗程序的儀器應當啟用該程序以減低交叉污染[5]。鑒于試劑成分的復雜性、儀器工作原理的差異，每個臨床實驗室所發(fā)生的攜帶污染也不完全相同，所以要根據實驗室目前情況將攜帶污染項目和程度作一具體評估，并采取相應的對策，才能使檢測結果更加準確可靠[6]。本實驗室根據對各個檢測項目進行合理安排分析順序，對污染項目進行隔開或將被容易污染的項目放到其他分析項目的前面以及用堿性清洗液清洗試劑針等措施，在日常工作中對每天的高、中、低值質量控制運用Westgard多規(guī)則質控方法進行控制[7]，對失控情況盡快查找原因及時處理，對具體檢測過程進行回顧性分析。并認真做好儀器的每日、每周和每月的維護和保養(yǎng)工作，使儀器處于最佳工作狀態(tài)，提高了測定結果的準確性和精密度，取得了非常滿意的效果。

[1]陳繼中,李旭光,唐吉斌.試劑攜帶污染對血清總膽汁酸測定結果的影響及消除措施[J].檢驗醫(yī)學,2006,21:228-230.

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[6]謝小兵,李 萍,夏 歷,等.血脂與谷丙轉換酶試劑對總膽汁酸檢測的攜帶污染觀察[J].實用預防醫(yī)學,2008,15(4):246.

[7]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:897.