離心積分法制備血小板制品的質(zhì)量觀察

劉云華，王宏碧，王紹蘭，鄧 萍

(1、宜春市中心血站，江西 宜春 336000；2、宜春市人民醫(yī)院，江西 宜春 336000)

目前血小板在臨床的應(yīng)用越來越廣，主要應(yīng)用于治療血小板生成障礙，引起的血小板減少，血小板功能異常、稀釋性血小板減少，預(yù)防性輸注等。而制備高品質(zhì)的濃縮血小板，滿足臨床應(yīng)用的需要，對制備濃縮血小板技術(shù)、設(shè)備等提出了更高要求。目前血小板制備方法分兩種，一種是手工法，另一種是用血細胞分離機采集法[1，2]。我們應(yīng)用具有離心積分功能的Thermo-KR4i大容量冷凍離心機，離心制備濃縮血小板，大大提高了血小板回收率?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

400 ml四聯(lián)袋 (山東威高集團醫(yī)用高分子制品有限公司，CPD方)，血小板保存袋具有良好的透氣性[3]。 大容量冷凍離心機(德國，Thermo-KR4I)、大容量冷凍離心機(德國，Cryofuge-6000i)、熱合機(費森尤斯)。

1.2 原料血

1.2.1 采血過程中要注意影響濃縮血小板制備的因素，采血時需求一針見血，盡量減少組織損傷，采400mL全血在6min內(nèi)完成。采血過程中要不間斷地輕搖血袋，使血液和抗凝劑充分混勻，以防血液凝固，影響血小板回收率[3]。

1.2.2 血液的保存和運輸環(huán)境對濃縮血小板制備的影響，從采血到制備過整個過程均需求在22℃±2℃環(huán)境中。若保存不當，受損血小板可達95%[4]；血小板保存5d后，PF3活性可增加12倍，血小板出現(xiàn)廣泛聚集。

1.3 分組 對照組：隨機抽取2010年2月至2011年 6月采用方案 3（2600×g離心 8min)，以 Cryofuge-6000i普通離心機離心制備血小板制品50份。實驗組：隨機抽取2010年2月至2011年6月采用方案3(2600×g離心8min)，以具有離心積分功能的Thermo-KR4i離心制備血小板50份。對照組和實驗組的全血與血小板制品均采用AC970血球計數(shù)儀檢測血小板含量。

1.4 制備方法

1.4.1 400ml全血的四聯(lián)袋置于22℃±2℃溫度離心2600×g離心8min，離心后主袋置于分漿夾內(nèi)，先將大部分血漿分入第二袋，然后將白膜層（血小板、白細胞和少量紅細胞層）擠入第三袋，再從第二袋分出適量血漿至第三袋。

1.4.2 夾住第二、三袋間的塑料管，將第四袋內(nèi)的紅細胞保存液加入主袋內(nèi)，使之與主袋內(nèi)紅細胞混勻，熱合主袋與第四袋間的塑料管。

1.4.3 將第三、四袋置于22℃±2℃ 280×g輕度離心10min，將第三袋上層懸液分入第四袋即得血小板濃縮液。

2 結(jié)果

對照組和實驗組的數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS軟件進行數(shù)據(jù)分析，描述性統(tǒng)計結(jié)果見表1，獨立樣本t檢驗結(jié)果顯示全血血小板總體均數(shù)無顯著性差異的情況下，通過采用具有離心積分功能的德國Thermo-KR4i大容量冷凍離心機制備血小板，回收率(81.56±0.17)%顯著高于對照組(60.00±0.18)%，P<0.05。

表1 100例血小板制備的效果

3 討論

離心效果影響對濃縮血小板制備的質(zhì)量，離心力和離心時間是決定離心效果的關(guān)鍵因素[4]，但無法僅用這兩個參數(shù)來準確衡量離心效果，因為離心提速是個加速度過程，離心樣品量增加、電壓驟變、環(huán)境溫度和濕度改變、離心機轉(zhuǎn)子老化等因素都會減緩提速，從而影響最終的離心效果。離心積分(HRF)是國際公認衡量離心效果的科學標尺。HRF=RCF(相對離心力)與離心時間的積分，它是離心效果重復性的保證。Thermo-KR4i大容量冷凍離心機具備離心積分的功能，充分考慮了離心過程中各種影響因素對離心加速的影響，保證施加于樣品的離心力總量的一致，從而保證一致的離心效果。

實驗數(shù)據(jù)表明，利用具有離心積分功能的德國Thermo-KR4i大容量冷凍離心機離心制備的濃縮血小板含量比普通冷凍離心機的更高，回收率更穩(wěn)定。

[1]秦艷蘭,劉景春,劉仁強.自動和手工制備濃縮血小板的質(zhì)量評價[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2009,27(01):33-34.

[2]袁小玲,李文斌,熊春梅,等.優(yōu)化手工制備濃縮血小板方法的應(yīng)用[J].實驗與檢驗醫(yī)學,2010,28(05):493-494.

[3]劉海田.血液血液制品采集檢測技術(shù)標準及質(zhì)量控制實務(wù)全書[M].北京中軟電子出版社,2003:409.

[4]習 燕,雷 宇,付雪梅,等.手工分離濃縮血小板制備方法的質(zhì)量分析[J].中國輸血雜志,2010,23（3）:213-214.