高效液相色譜法測(cè)定潤(rùn)降利膈顆粒中柚皮苷含量＊

董軍偉 ，王華新，李國(guó)川，彭安堂，張桂俠 ，吉朝鋒

(1.河北省石家莊市中醫(yī)院制劑室，河北 石家莊 050051;2.河北省石家莊市第一醫(yī)院藥劑科，河北 石家莊 050011;3.河北醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院，河北 石家莊 050091)

潤(rùn)降利膈丸是石家莊市中醫(yī)院的注冊(cè)制劑(注冊(cè)號(hào)為冀藥制字Z20051118)，具有養(yǎng)陰益胃、順氣開(kāi)郁的功效，對(duì)胃陰不足、肝氣犯胃所致胃氣上逆、吞咽不利、胸悶燒心、胃噪雜、反胃、腹脹等有良好的治療效果，用于治療食道炎、胃炎效果顯著。為更加方便患者應(yīng)用，已將劑型改進(jìn)為顆粒劑，但原制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)目。為進(jìn)一步控制制劑質(zhì)量，筆者采用高效液相色譜法測(cè)定了潤(rùn)降利膈顆粒中柚皮苷含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

島津LC-10AT型高效液相色譜儀，SPD-10A型紫外檢測(cè)器，N2010色譜工作站。潤(rùn)降利膈顆粒由石家莊市中醫(yī)院提供;柚皮苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為110722-200309);乙腈、甲醇、濃磷酸均為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱:KromasilC18柱(200mm×4.6 mm，5 μm);柱溫:室溫;流速:1.0 mL/min;流動(dòng)相:乙腈-0.1%磷酸溶液(20∶80)，等度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng):283 nm;進(jìn)樣量:20 μL。理論板數(shù)按柚皮苷計(jì)不低于3 000，色譜圖見(jiàn)圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2.2 溶液制備[1－2]

精密稱取柚皮苷對(duì)照品6.61mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇溶解，并稀釋至刻度，得每1 mL含264.50 μg的對(duì)照品溶液。精密稱取樣品5.014 g，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇50 mL，回流提取2h，取出放冷，離心，取上清液濃縮至5mL，移至25mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，靜置，過(guò) 0.22 μm微孔濾膜，即得供試品溶液。取不含枳殼的陰性樣品，按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察[3-4]:取對(duì)照品溶液，以甲醇溶液分別配制成質(zhì)量濃度為 264.50，132.25，66.13，33.06，26.45，13.23 μg/mL 的對(duì)照品溶液，各進(jìn)樣20 μL。以進(jìn)樣質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)(X)、峰面積積分值為縱坐標(biāo)(Y)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程 Y=14 477.828 7 X+25 249.230 5，r=0.999 5(n=6)。結(jié)果表明，柚皮苷質(zhì)量濃度在13.23～264.50 μg/mL范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn):精密吸取對(duì)照品溶液20 μL，連續(xù)重復(fù)進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果的 RSD為2.372 5%(n=6)，表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn):取同一供試品溶液，按照上述色譜條件在0，2，4，6，8 h時(shí)進(jìn)樣測(cè)定峰面積，結(jié)果的 RSD值為1.789 8%(n=5)，表明供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

重現(xiàn)性試驗(yàn):取同一批樣品6份，依法制備供試品溶液并測(cè)定含量。結(jié)果的 RSD為1.513 7%(n=6)，表明方法重現(xiàn)性良好。

加樣回收試驗(yàn):精密稱取同一批樣品粉末2.502 1 g，共6份，加入一定量柚皮苷對(duì)照品，按照供試品溶液制備方法制備溶液，進(jìn)樣測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 柚皮苷加樣回收試驗(yàn)結(jié)果(n=6)

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品3批，依法制成供試品溶液，精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，照外標(biāo)法計(jì)算樣品中柚皮苷含量。結(jié)果批號(hào)為20100416，20100417，20100418的3批樣品中，柚皮苷含量分別為 0.464 5，0.465 0，0.463 9 mg/g(n=3)。

3 討論

在對(duì)本制劑的提取中發(fā)現(xiàn)，超聲提取1 h和回流提取2 h效果差別較大，甲醇超聲結(jié)果不太明顯，而回流提取效果較好。因此，確定以甲醇回流提取2 h為樣品提取方法。參照文獻(xiàn)報(bào)道，取柚皮苷對(duì)照品溶液適量，在200～400 nm波長(zhǎng)范圍內(nèi)掃描，結(jié)果在283 nm波長(zhǎng)處有最大吸收，故選283 nm波長(zhǎng)作為檢測(cè)波長(zhǎng)。用本法測(cè)定潤(rùn)降利膈顆粒中柚皮苷的含量作為定量指標(biāo)，方法相對(duì)簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確可靠。

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