健兒消食口服液澄清工藝的實(shí)驗(yàn)研究

李 靜， 王曉義， 蒲宇紅， 高曉黎

(1.石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，新疆石河子 832008;2.新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥劑教研室，新疆 烏魯木齊 830054)

目前中藥口服液的研究大多集中凈化措施對(duì)有效成分含量以及對(duì)口服液澄明度的影響［1］，中藥口服液放置后易產(chǎn)生沉淀，影響產(chǎn)品的質(zhì)量。本課題參照《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑》第五冊(cè)中健兒消食口服液處方，研制健兒消食口服液。本實(shí)驗(yàn)分別考察了5種澄清工藝對(duì)健兒消食口服液中總多糖含量、黃芩苷含量、水浸出物量的影響，為確定健兒消食口服液的澄清工藝提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 試藥與儀器

1.1 儀器 SCL－10AVP型高效液相色譜儀(日本島津);UV－2401紫外可見分光光度計(jì)(日本島津);BP211D精密天平(德國 sartorius);XYJ80－離心機(jī)(金壇市恒豐儀器廠);SENCOW50－1恒溫水浴鍋(上海申生科技有限公司);TGL－16C高速離心機(jī)(上海弗魯克機(jī)電設(shè)備有限公司);ZF－I型三用紫外分析儀(上海顧村電光儀器廠)。

1.2 試藥 黃芩苷對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批號(hào):110715－200514);葡萄糖對(duì)照品(中國藥品生物制品檢定所，批 號(hào):0833－9501);蒽 酮 (中 國 聯(lián) 化 工 廠，批 號(hào):20030316)。甲醇〔色譜純，fisher公司〕，其他試劑均為分析純。健兒消食口服液(新疆特豐藥業(yè)股份有限公司研制，批號(hào):20060426)。

2 實(shí)驗(yàn)與結(jié)果

2.1 考察指標(biāo)及測(cè)定方法 從中藥化學(xué)成分角度分析，水煎液中既含有極性較大的皂苷類又含有水溶性的多糖類，在運(yùn)用各種澄清技術(shù)時(shí)必須考慮這些成分的含量，同時(shí)也要考慮每種澄清方法的水浸出物量，達(dá)到精制的目的。因此指標(biāo)擬采用總多糖含量、黃芩苷含量和水浸出物量為指標(biāo)對(duì)澄清工藝進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)(權(quán)重系數(shù)為0.4、0.4、0.2)。

綜合評(píng)分=(總多糖含量/最大總多糖含量)×40+(黃芩苷含量/最大黃芩苷含量)×40+(最小水浸出物量/水浸出物量)×20

2.1.1 水浸出物量的測(cè)定 精密吸取藥液50 mL，置于干燥至恒重并稱重的蒸發(fā)皿中，水浴蒸干，105℃烘箱干燥3 h至恒重，取出，迅速置干燥器中冷卻，稱重，計(jì)算水浸出物量。水浸出物量(%)=(干浸膏重量/藥材重量)×100%

2.1.2 總多糖的測(cè)定(采用硫酸－蒽酮法［2］)

葡萄糖對(duì)照品溶液的制備 精密稱取105℃干燥至恒重的葡萄糖對(duì)照品15.21 mg，置50 mL量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得(每1 mL中含葡萄糖對(duì)照品0.304 mg)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密吸取上述對(duì)照品溶液0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置于 25 mL 量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，分別吸取上述溶液2 mL于10 mL具塞刻度試管中，將試管置冰浴中，精密加入2‰硫酸蒽酮溶液(取蒽酮0.2 g，溶于水5 mL與硫酸95 mL的混合液中，振搖溶解，放冷，臨用新配)8 mL，搖勻，于90℃水浴中加熱10 min，取出，立即置于冰浴中，放置10 min，以第一份為空白對(duì)照液，在400～800 nm波長下進(jìn)行掃描，得最大吸收波長為627 nm。照分光光度法(2005年版一部附錄V)，以第一份為空白對(duì)照液，在627 nm波長處測(cè)定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。經(jīng)回歸得線性回歸方程為:A=0.046 3C －0.013 7，r=0.999 2，在2.4 ～14.6 μg/mL范圍內(nèi)，線性關(guān)系良好。

樣品測(cè)定 精密吸取樣品液1.0 mL于1 000 mL瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻。再精密吸取上述溶液2.0 mL于10 mL具塞試管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線項(xiàng)下自“精密加入2‰硫酸蒽酮溶液”起，隨行空白，依法在627 nm波長處測(cè)定吸光度，根據(jù)回歸方程計(jì)算總多糖含量。

課堂教學(xué)模式的優(yōu)化需要一個(gè)具體的過程，并不是一兩節(jié)課就能夠解決的。它需要我們化學(xué)教師扎扎實(shí)實(shí)地進(jìn)行工作，認(rèn)認(rèn)真真地分析自己在教學(xué)中的問題，并仔仔細(xì)細(xì)地思考其中的緣由和解決措施，從而摸索出一條具有自身教學(xué)特色的課堂優(yōu)化之路，提升教學(xué)的質(zhì)量。

2.1.3 黃芩苷的含量測(cè)定 采用高效液相色譜法(中國藥典2005年版一部附錄VID)測(cè)定。

色譜條件 ODS色譜柱(Phenomenex 4.6 mm×150 mm，5 μm);甲醇－水－磷酸(47 ∶53 ∶0.2)為流動(dòng)相;檢測(cè)波長為280 nm;流速為1 mL/min;柱溫為40℃。

對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品10.05 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，得貯備液(0.201 mg/mL)。再精密吸取2 mL置10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成每1 mL含40 μg黃芩苷對(duì)照品溶液，作為對(duì)照品溶液。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立 精密吸取上述對(duì)照品貯備液(0.201 mg/mL)1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL 置 10 mL 量瓶中，加入甲醇稀釋至刻度，搖勻，制成濃度分別為20.1、40.2、60.3、80.4、100.5、120.6 μg/mL的對(duì)照品系列溶液。從中分別精密吸取20 μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積。以進(jìn)樣濃度(μg/mL)為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)進(jìn)行直線回歸，得線性回歸方程為:A=689 74C－110 328，r=0.999 9。以上結(jié)果表明，在20.1～120.6 μg/mL范圍內(nèi)，黃芩苷峰面積與進(jìn)樣濃度具有良好的線性關(guān)系。

供試品溶液的制備 精密吸取樣品1 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲10 min，放冷，再用甲醇稀釋至刻度，搖勻。取適量于具塞離心管中，離心10 min(3 000 r/min)，取上清液用微孔濾膜(0.45 μm)濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

測(cè)定方法 分別精密吸取對(duì)照品溶液，供試品溶液各20 μL，按上述方法和色譜條件進(jìn)行測(cè)定，用外標(biāo)一點(diǎn)法計(jì)算黃芩苷含量。

2.2 水提取液制備 稱取處方量藥材，按照上述優(yōu)化提取工藝所確定條件制得提取液并減壓濃縮為3 000 mL(1 mL藥液相當(dāng)于0.3 g生藥)。

2.3 不同澄清工藝樣品的制備

2.3.1 自然沉降法 精密吸取水提液100 mL置燒杯中自然沉降，靜置24 h，濾過，定容，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.3.2 高速離心法

2.3.2.1 離心轉(zhuǎn)速考察 精密吸取提取液100 mL 3份，分別按10 000 r/min、12 000 r/min、14 000 r/min轉(zhuǎn)速離心 15 min，取上清液，加水定容至500 mL，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.3.2.2 離心時(shí)間考察 精密吸取提取液100 mL 3份，在14 000 r/min 下，分別離心15 min、30 min、45 min，取上清液，加水定容至500 mL，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.3.3 乙醇沉淀法［2］精密吸取提取液100 mL 5份，加一定量乙醇使含醇量達(dá)到30%、40%、50%、60%、70%，靜置24 h，濾過，并用相應(yīng)濃度的乙醇清洗容器壁上殘留藥液，濾液統(tǒng)一定容至500 mL，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.3.4 ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑法

2.3.4.1 澄清劑的配制

A組分溶液:稱取5.0 g A組分細(xì)粉，先用少量水?dāng)嚢璩珊隣?，再加水?00 mL，溶脹24 h，攪拌，雙層紗布濾過，即得1%粘膠液。

B組分溶液:稱取5.0 g B組分細(xì)粉，用少量1%乙酸溶液，攪拌成糊狀，再加1%乙酸至500 mL，溶脹24 h，攪拌，雙層紗布濾過，即得1%粘膠液。

2.3.4.2 操作方法 精密吸取提取液100 mL 3份，置60～70℃水浴中保溫20 min，緩慢細(xì)流加入B組分，邊加邊攪拌，再緩慢細(xì)流加入A組分，攪勻，置60～70℃水浴中保溫30 min，然后4℃靜置24 h，濾過，濾液定容至500 mL，測(cè)定結(jié)果見表1。

2.3.5 殼聚糖澄清劑法［4］

2.3.5.1 澄清劑的配制 稱取1.0 g殼聚糖細(xì)粉，用少量1%乙酸溶液攪拌成糊狀，再用1%乙酸溶液加至100 mL，溶脹24 h，攪拌，即得1%粘膠液。

2.3.5.2 操作方法 精密吸取提取液100 mL 3份，置60～70℃水浴中保溫10 min，緩慢細(xì)流加入1%殼聚糖澄清劑5、8、10 mL，邊加邊攪拌，攪勻后，靜置24 h，濾過，濾液定容至500 mL，測(cè)定結(jié)果見表1。

3 討論

健兒消食口服液由黃芩、黃芪、白術(shù)、陳皮、麥冬等七味藥材組成，是兒童天然胃動(dòng)力藥，具有促進(jìn)胃腸運(yùn)動(dòng)的功能。水煎液中既含有極性較大的皂苷類又含有水溶性的多糖類，其中多糖類成分則具有較強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用［5］，同時(shí)固體物析出越多澄明度越好，故實(shí)驗(yàn)以總多糖含量、黃芩苷含量及總固體物含量作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以此綜合考察不同澄清工藝對(duì)有效成分含量的影響。

從表1澄清方法綜合評(píng)分結(jié)果［6］得出:自然沉降＞高速離心法＞乙醇沉淀法＞ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑法＞殼聚糖澄清劑法。實(shí)驗(yàn)中筆者發(fā)現(xiàn)，高速離心法保留藥液的有效成分最多，但水浸出物量基本接近原液，在存放過程中大分子的雜質(zhì)聚合產(chǎn)生沉淀;藥液中加入ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑后黃芩苷含量的損失較大，而浸出物量無明顯降低，同時(shí)ZTC1+1－Ⅲ型天然澄清劑法所得溶液經(jīng)放置72 h有絮狀懸浮物;殼聚糖澄清劑也使黃芩苷含量明顯下降，對(duì)水浸出物量的影響不大，除雜后的溶液放置48 h后，其溶液出現(xiàn)絮狀沉淀;乙醇沉淀法與天然澄清劑法相比，隨著乙醇濃度的增加黃芩苷含量上升，總多糖含量下降，而澄明度升高，但放置后溶液穩(wěn)定性良好。

表1澄清方法考察(n=3)

以上實(shí)驗(yàn)表明，用乙醇沉淀法除雜，制得的成品澄清度、穩(wěn)定性更好，對(duì)有效成分的保留高于其他澄清劑法，縮短生產(chǎn)周期，降低成本，可以使用乙醇法制備健兒消食口服液。

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