不同粒度甘草超微粉甘草酸溶出情況的比較

何 昱， 鐘 濤， 陳 龍， 何曉瑋

(1.浙江中醫(yī)藥大學(xué)，浙江杭州 310053;2.浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬邵逸夫醫(yī)院，浙江杭州 310016;3.浙江東邦藥業(yè)有限公司，浙江臨海 317016)

中藥材超微粉碎曾經(jīng)一度是近年來(lái)研究的熱點(diǎn)，它從改變藥物的物理狀態(tài)著手，嘗試提高生物機(jī)體對(duì)藥物的吸收，增加藥物的生理效應(yīng)［1-3］。中藥經(jīng)超微粉碎后所得到的顆粒，粒徑可達(dá)到1～75 μm，表現(xiàn)出一般顆粒所不具有的一些特殊理化性質(zhì):如良好的溶解性、分散性、吸附性、化學(xué)反應(yīng)活性等，這使得超微粉碎在中藥制藥行業(yè)顯示出特有的優(yōu)勢(shì)［4］。

但是，隨著藥材粒度的減小，所含成分的溶解度和溶解速率并不會(huì)無(wú)限制的增大。在一定條件下，隨著比表面積的增大，表面能的因素不僅會(huì)使吸附作用加強(qiáng)，有效成分?jǐn)U散速度受到影響;而且其表面更易吸附空氣和帶有電荷，影響有效成分的溶出［5］。

因此，對(duì)于中藥的超微粉化不能一概而論，應(yīng)根據(jù)特定中藥的性質(zhì)，以有效成分的溶出速度和溶出量最佳、不良反應(yīng)最小為前提，來(lái)決定適宜的藥材粉碎粒度。

本實(shí)驗(yàn)選擇在臨床上廣泛使用的中藥材甘草，通過(guò)測(cè)定不同粒度甘草超微粉中甘草酸的溶出量來(lái)比較它們的溶出情況。溶出的介質(zhì)除了水之外，還以人工胃液和人工腸液來(lái)模擬體內(nèi)環(huán)境，為甘草藥材的粉碎提供更有說(shuō)服力的依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent 1200高效液相色譜儀;DF-101S集熱式恒溫加熱磁力攪拌機(jī)(河南鞏義市英峪予華儀器廠);萬(wàn)分之一電子天平［梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司］;PHS-3C(001級(jí))PH酸度計(jì)(上海精科);AnkeTGL-16B離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)。

1.2 對(duì)照品 甘草酸單銨鹽(中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)110731-200614)。

1.3 試劑 色譜級(jí)甲醇(天津市四友精密化學(xué)品有限公司)，胃蛋白酶(上海伯奧生物科技有限公司)，胰蛋白酶(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，冰醋酸(杭州化學(xué)試劑有限公司)，水為實(shí)驗(yàn)室自行制備的雙蒸水。

1.4 甘草樣品 均由上海中醫(yī)藥大學(xué)洪筱坤教授提供，包括寧夏甘草中粉，以及經(jīng)YSNM-1500-0005(臺(tái)式小型超細(xì)加工設(shè)備)處理所得到的1次處理粒徑(18.90±19.0)μm，用Y表示、5次處理粒徑(11.2±9.75)μm，用W表示、10次處理粒徑(9.51±7.98)μm，用S表示的寧夏甘草超微粉。

2 方法與結(jié)果

2.1 甘草酸測(cè)定的色譜條件 色譜柱:Eclipse XDB-C18柱(4.6 mm ×150 mm，5 μm)，流動(dòng)相:甲醇-0.2 mol/L 醋酸銨溶液-冰醋酸(66 ∶33 ∶1)，流速:1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng):250 nm，柱溫:25 ℃，進(jìn)樣量 :10 μL［6］。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取經(jīng)干燥的甘草酸單銨鹽標(biāo)準(zhǔn)品5.3 mg，置于25 mL量瓶中，加入流動(dòng)相溶解后定容，即得濃度為0.212 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.2.2 人工胃液、人工腸液的制備 按中國(guó)藥典2005版二部附錄項(xiàng)下進(jìn)行。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密稱取寧夏甘草中粉約20 g以及經(jīng)1次處理(Y)、5次處理(W)、10次處理(S)的超微粉樣品各約0.15 g，放入50 mL燒杯中，分別加雙蒸水、人工胃液和人工腸液25 mL，置于恒溫磁力攪拌器中(37±1)℃攪拌浸出，在 15、30、60、120、240 min 后取樣，所取樣品液5 000 r/min離心10 min，取上清液過(guò)0.45 μm微孔濾膜，即得各供試品溶液［7］。

2.3 各樣品液中甘草酸的測(cè)定 用2.1項(xiàng)下的色譜條件分析對(duì)照品溶液、空白人工胃液、空白人工腸液以及以上各時(shí)間點(diǎn)所取的供試品溶液，空白人工胃液和空白人工腸液在甘草酸色譜峰對(duì)應(yīng)的保留時(shí)間處無(wú)吸收，不干擾甘草酸的測(cè)定;且各樣品液中甘草酸色譜峰的分離度都在2.0以上，因而可以用此條件進(jìn)行含量測(cè)定。S樣品在不同介質(zhì)中第一次取樣(15 min)分析所得的色譜圖見(jiàn)圖1、2。

2.4 用外標(biāo)法計(jì)算各供試品溶液中甘草酸的含量，具體測(cè)定結(jié)果詳見(jiàn)表1～3。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 S樣品在不同介質(zhì)中第一次取樣(15 min)分析時(shí)的色譜圖

表1 不同粒度甘草粉末在雙蒸水中的溶出量(n=2)

表2 不同粒度甘草粉末在人工腸液中的溶出量

表3 不同粒度甘草粉末在人工胃液中的溶出量

3 討論

3.1 中國(guó)藥典2005版收載的甘草藥材中甘草酸的含量測(cè)定是取甘草中粉加流動(dòng)相超聲提取后進(jìn)樣［6］。因本試驗(yàn)中人工胃液、人工腸液均以水為介質(zhì)，所以分別用水和流動(dòng)相對(duì)甘草中粉樣品進(jìn)行了超聲提取，對(duì)比兩種溶劑對(duì)甘草酸的提取效果:結(jié)果用流動(dòng)相提取的甘草酸含量為0.049 mg/mL/g，水提取的甘草酸含量為0.041 mg/mL/g，差別不明顯。

3.2 從表1、2、3可以看出:各粒度超微粉樣品的甘草酸溶出量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于中粉，說(shuō)明超微粉碎可有效增加藥材中成分的溶出。此外，3種介質(zhì)中，人工胃液中甘草酸的溶出量最低，而在水和人工腸液中溶出量較高，這與甘草酸結(jié)構(gòu)中具有羧基呈酸性，在酸性環(huán)境中溶出較小的特性是一致的。

3.3 由表1、2可見(jiàn):雙蒸水和人工腸液中，甘草酸的溶出量以5次處理的W樣品最小，低于經(jīng)1次處理的Y樣品和經(jīng)10次處理的S樣品，提示可能此粒徑大小的藥材顆粒吸附性最強(qiáng)，導(dǎo)致甘草酸溶出量的降低，因此甘草在超微粉碎時(shí)應(yīng)避免相應(yīng)的(11.2±9.75)μm粒度范圍。同時(shí)這一實(shí)驗(yàn)結(jié)果也再次證實(shí)了中藥材超微粉碎應(yīng)當(dāng)選擇其適宜的粒徑。

3.4 本實(shí)驗(yàn)僅對(duì)甘草超微粉中甘草酸單一成分的溶出情況進(jìn)行了研究，而對(duì)于中藥材而言，藥效的發(fā)揮與其含有的眾多成分相關(guān)，今后可結(jié)合全面的成分分析如指紋圖譜和藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)對(duì)甘草的超微粉碎進(jìn)行更深層次的探討。

致謝:實(shí)驗(yàn)儀器和試劑均由浙江中醫(yī)藥大學(xué)東洲科技園提供。

［1］樓丹飛.中藥超微粉碎研究進(jìn)展［J］.河南中醫(yī)，2008，28(8):102-105.

［2］關(guān)天增，雷敬衛(wèi)，鄭 艷.淺談超微粉碎［J］.中國(guó)中藥雜志，2002，27(7):499-500.

［3］黃一平，鞠建明，高美華，等.傳統(tǒng)中成藥超微粉碎前后粉末質(zhì)量比較研究［J］.中成藥，2007，29(1):135-137.

［4］陳開文，譚 涌.中藥超微粉碎應(yīng)用研究概況［J］.中國(guó)藥業(yè)，2005，15(2):75-76.

［5］李曉明，王躍生，閆 寒，等.超微粉碎決明子對(duì)其大黃酚溶出量的影響［J］.中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2001，7(6):6-8.

［6］中國(guó)藥典一部［S］.2005:59.

［7］遲文俊，吳愛(ài)學(xué).五苓散在人工胃液中微量元素溶出率［J］.中國(guó)中藥雜志，1990，15(11):31-33.