蠅蛆殼聚糖降血脂作用機(jī)制探討

覃容貴，吳建偉，國 果，付 萍

(貴陽醫(yī)學(xué)院 1.藥學(xué)院 藥用植物學(xué)與生藥學(xué)教研室，2.基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室，貴州 貴陽 550004)

近年研究表明，殼聚糖具有降血壓、降血脂、降血糖、增強(qiáng)免疫力、保護(hù)胃黏膜、抗腫瘤及延緩衰老等生物學(xué)作用[1-3]?，F(xiàn)有降脂機(jī)理的研究主要集中在殼聚糖的化學(xué)結(jié)構(gòu)、對(duì)機(jī)體脂質(zhì)過氧化等方面[4-9]。而膽固醇在人體的合成和代謝過程是一個(gè)復(fù)雜的過程，調(diào)節(jié)血脂是在整體水平上根據(jù)不同脂蛋白的功能進(jìn)行調(diào)控，其中涉及很多酶、相關(guān)蛋白及血管活性物質(zhì)。為了進(jìn)一步探討蠅蛆殼聚糖調(diào)血脂作用機(jī)理，我們采用高脂血癥大鼠模型，觀察蠅蛆殼聚糖對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型大鼠載脂蛋白AI(ApoAI)、載脂蛋白B(ApoB)、卵磷脂膽固醇?；D(zhuǎn)移酶(LCAT)活性、超氧化物歧化酶(SOD)活性、血清脂質(zhì)過氧化代謝產(chǎn)物丙二醛(MDA)水平、血清一氧化氮(NO)及C反應(yīng)蛋白(CRP)的影響，從而較為廣泛地探討蠅蛆殼聚糖降血脂作用機(jī)理。

1 材料

蠅蛆皮由琨恩生物技術(shù)有限公司提供;蠅蛆殼聚糖，自制，脫乙酰度為82.3%;蝦蟹殼聚糖，購自濟(jì)南海得貝生物工程有限公司，脫乙酰度為95.3%;均以0.1%醋酸配制成所需濃度。

基礎(chǔ)飼料由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供;高脂飼料:用1%膽固醇、5%豬油、10%蛋黃粉及85%基礎(chǔ)飼料配制而成。

ApoAI、ApoB測定試劑盒購自上海榮盛生物技術(shù)有限公司;游離膽固醇(FC)測定試劑盒購自保定長城臨床試劑公司;CRP、MDA測定試劑盒、SOD測定試劑盒均購自南京建成生物工程研究所。

OLYMPUS-AU400全自動(dòng)生化分析儀，日本OLYMPUS公司;μ-Quant掃描酶標(biāo)分光光度儀，美國Bio-Tek公司。

SD大鼠，雄性，100只，體重180～205 g，由貴陽醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào):SCXK(黔)2002-0001。

2 方法

2.1 分組及造模指標(biāo)測定

用高脂飼料造模的同時(shí)給予蠅蛆殼聚糖預(yù)防高脂血癥的產(chǎn)生。用基礎(chǔ)飼料適應(yīng)性喂養(yǎng)大鼠5 d后，隨機(jī)分為5組，每組10只，分別為正常對(duì)照組:以基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng);高脂模型組:以高脂飼料喂養(yǎng);殼聚糖低、中、高劑量組:給高脂飼料的同時(shí)分別灌胃蠅蛆殼聚糖300，600，900 mg/kg;陽性對(duì)照組:給高脂飼料的同時(shí)灌胃蝦蟹殼聚糖600 mg/kg，1次/d，連續(xù)給藥4周，動(dòng)物自由進(jìn)水。正常對(duì)照組和高脂模型組分別給等量蒸餾水。于第4周末次給藥后，大鼠禁食12 h，股動(dòng)脈取血處死，并分離血清。

2.2 檢測指標(biāo)及測定方法

ApoAI、ApoB的測定應(yīng)用免疫透射比濁法，按兩酶系統(tǒng)測定LCAT作用前后一定量血清中FC的含量，以FC的減少量計(jì)算LCAT活性。FC的測定應(yīng)用膽固醇氧化酶－過氧化物酶法按試劑盒說明書進(jìn)行。血清SOD的測定采用黃嘌呤氧化酶法，血清MDA的測定采用硫代巴比妥酸法。血清NO的測定采用硝酸還原酶法。CRP的測定應(yīng)用免疫比濁法。

2.3 統(tǒng)計(jì)分析

3 結(jié)果

3.1 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清ApoAI、ApoB水平的影響

見表1。中、高劑量蠅蛆殼聚糖能提高大鼠血清 ApoAI水平(P ＜0.05～0.01);高劑量能降低ApoB水平(P＜0.05);中、高劑量能提高 ApoAI/ApoB 水平(P ＜0.05 ～0.01)。

表1 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清apoAI、apoB水平的影響(n=10，)Tab.1 The effects of housefly maggot chitosan on ApoAI and ApoB of rats(n=10，)

表1 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清apoAI、apoB水平的影響(n=10，)Tab.1 The effects of housefly maggot chitosan on ApoAI and ApoB of rats(n=10，)

與正常對(duì)照組相比:1P ＜0.05，2P ＜0.01;與模型組相比:3P ＜0.05，4P ＜0.01Compared with control group:1P ＜0.05，2P ＜0.01;Compared with model group:3P ＜0.05，4P ＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg) ApoAI/(g/L) ApoB/(g/L)ApoAI/ApoB正常對(duì)照組 －0.10 ±0.02 0.16 ±0.04 0.63 ±0.19高脂模型組 － 0.06±0.022 0.20±0.031 0.33±0.122低劑量組 300 0.07 ±0.02 0.19 ±0.03 0.38 ±0.08中劑量組 600 0.08 ±0.013 0.18 ±0.03 0.48 ±0.143高劑量組 900 0.09 ±0.024 0.17 ±0.033 0.52 ±0.094陽性對(duì)照組 600 0.10 ±0.024 0.17 ±0.033 0.61 ±0.214

3.2 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清LCAT、NO、CRP水平的影響

見表2。中、高劑量蠅蛆殼聚糖能提高大鼠血清LCAT活性(P＜0.01)，各劑量均能提高大鼠血清NO水平(P＜0.01)，各劑量組大鼠CRP含量與高脂模型組無顯著性差異。

3.3 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清SOD活性、MDA水平的影響

見表3。中、高劑量蠅蛆殼聚糖能提高大鼠血清 SOD 活性(P ＜0.05，P ＜0.01)，降低 MDA 含量(P ＜0.01)。

4 討論

研究發(fā)現(xiàn)，ApoAI和ApoB較其他血脂指標(biāo)更加敏感，可以作為更好的動(dòng)脈粥樣硬化預(yù)測因子。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，蠅蛆殼聚糖能很明顯地升高血清ApoAI含量和ApoAI/ApoB，有效改善了給藥組動(dòng)物脂類代謝的異常。蠅蛆殼聚糖有顯著升高高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)的作用，這可能與提高ApoAI作用密切相關(guān);殼聚糖有顯著的降低低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)作用[10-11]，這可能與蠅蛆殼聚糖降低ApoB的作用有一定關(guān)系。蠅蛆殼聚糖能提高ApoAI，降低 ApoB，提高 ApoAI/ApoB比值，通過提高ApoAI促進(jìn)HDL的合成，激活LCAT，促進(jìn)膽固醇的逆向轉(zhuǎn)運(yùn)，從而起到調(diào)節(jié)血脂的作用。

表2 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清LCAT、NO、CRP水平的影響(n=10，)Tab.2 The effects of housefly maggot chitosan on LCAT，NO and CRP of rats(n=10，)

表2 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清LCAT、NO、CRP水平的影響(n=10，)Tab.2 The effects of housefly maggot chitosan on LCAT，NO and CRP of rats(n=10，)

與正常對(duì)照組相比:1P ＜0.01;與模型組相比:2P ＜0.05，3P ＜0.01Compared with control group:1P ＜0.01;Compared with model group:2P ＜0.05，3P ＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg)LCAT/[(nmol/(mL·h))]NO/(μmol/L) CRP/(mg/L)正常對(duì)照組 －118.5 ±11.7 63.30 ±2.05 2.45 ±0.91高脂模型組 － 56.7±15.41 33.64±2.571 4.50±1.411低劑量組 300 73.3 ±18.92 64.09 ±2.033 4.07 ±1.16中劑量組 600 86.0 ±15.53 66.24 ±3.433 4.57 ±1.26高劑量組 900 95.2 ±24.03 74.74 ±9.003 4.15 ±1.56陽性對(duì)照組 600 91.0 ±18.03 71.80 ±8.1233.70 ±1.26

表3 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清MDA、SOD水平的影響(n=10，)Tab.3 The effects of housefly maggot chitosan on MDA and SOD of rats(n=10，)

表3 蠅蛆殼聚糖對(duì)大鼠血清MDA、SOD水平的影響(n=10，)Tab.3 The effects of housefly maggot chitosan on MDA and SOD of rats(n=10，)

與正常對(duì)照組相比:1P ＜0.01;與模型組相比:2P ＜0.05，3P ＜0.01Compared with control group:1P ＜0.01;Compared with model group:2P ＜0.05，3P ＜0.01

組 別 劑量/(mg/kg) MDA/(nmol/L) SOD/(U/mL)正常對(duì)照組 －3.14 ±0.51 808.7 ±57.6高脂模型組 － 7.52±0.541 585.0±55.41低劑量組 300 7.08 ±0.76 626.9 ±61.9中劑量組 600 5.31 ±0.563 651.5 ±46.52高劑量組 900 4.01 ±0.653 794.0 ±56.03陽性對(duì)照組 600 3.83 ±0.793 802.1 ±50.33

本研究結(jié)果表明，高脂模型組LCAT活性明顯下降。蠅蛆殼聚糖有顯著降低總膽固醇的作用[10-11]，中、高劑量蠅蛆殼聚糖可顯著升高LCAT活性，說明蠅蛆殼聚糖通過提高LCAT活性，使膽固醇的酯化率升高，膽固醇的清除增加，移除膽固醇，使總膽固醇顯著降低。中、高劑量蠅蛆殼聚糖能明顯提高SOD活性，降低MDA含量。蠅蛆殼聚糖降低MDA作用隨劑量的增加而增強(qiáng)。說明蠅蛆殼聚糖具有提高血清SOD活力的作用，可抑制高脂血癥大鼠血清中異常升高的脂質(zhì)過氧化物含量和減少氧自由基損傷，具有抗氧化作用。蠅蛆殼聚糖能明顯升高NO水平，說明它可能通過改善血管內(nèi)皮的功能，促進(jìn)NO的生成和釋放，降低血管張力，達(dá)到保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的作用。另外，喂飼高脂飼料造成的高脂血癥模型CRP含量可發(fā)生改變。蠅蛆殼聚糖對(duì)血清CRP含量沒有影響，說明其調(diào)節(jié)血脂的作用可能與CRP沒有關(guān)系。

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