短期應(yīng)用利尿劑對(duì)正常大鼠尿液水通道蛋白 2排泄?jié)舛鹊挠绊懷芯?/h1>
2011-04-25 05:23:10許頂立賴(lài)文巖
實(shí)用心腦肺血管病雜志 2011年9期
林 晟,許頂立,賴(lài)文巖
水通道蛋白 2(aquaporin-2)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最具病理生理意義的水通道蛋白之一,對(duì)維持機(jī)體水平衡和調(diào)節(jié)體液容量至為重要,主要分布在腎臟集合管主細(xì)胞胞漿內(nèi)和小管側(cè)細(xì)胞膜上,在體內(nèi)主要受血管加壓素 (AVP)調(diào)節(jié)[1-2];其中部分腎臟 AQP2蛋白可脫落于小管腔經(jīng)尿液排出[3]。尿液AQP2濃度的檢測(cè)可能是一些臨床重要疾病,如心力衰竭水潴留等的重要檢測(cè)指標(biāo)[4]。利尿劑是臨床常用藥物,主要用于調(diào)節(jié)機(jī)體水鈉代謝,利尿劑和 AQP2兩者之間的相互聯(lián)系一直是臨床較為關(guān)注的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)就生理狀況下,短期運(yùn)用呋塞米、雙氫克尿噻和安體舒通對(duì)大鼠尿液中 AQP2的改變進(jìn)行了研究。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年雄性 SD(Sprague dawley)大鼠 30只,體質(zhì)量 180～250g(購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。
1.1.2 試劑 呋塞米片,雙氫克尿噻片,安體舒通片。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 動(dòng)物分組 將 18只 SD大鼠隨機(jī)分為呋塞米組、安體舒通組、雙氫克尿噻組,每組 6只。放置代謝籠中,自由進(jìn)食水 (飼料由南方醫(yī)院動(dòng)物所提供)。環(huán)境溫度控制在 25～28℃左右。動(dòng)物適應(yīng) 3d后開(kāi)始灌藥,灌藥 1次/d。將藥物溶于2ml去離子水中,注入胃內(nèi)。呋塞米組:20mg/kg,雙氫克尿噻組:25mg/kg,安體舒通組:20mg/kg。
1.2.2 尿液的收集 每天收集大鼠尿液記尿量,在 4℃以3000r/min離心 10min,去除細(xì)胞殘骸和食物殘?jiān)?加入蛋白酶抑制劑 PMSF,放入-70℃低溫冰箱,尿滲量由南方醫(yī)院腎內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室采用冰點(diǎn)抑制法檢測(cè)。
1.2.3 ELISA 測(cè)定尿液 AQP2濃度[5]尿液用 0.05%SDSPBS等倍稀釋后,取 50m l加入 96孔酶標(biāo)板,37℃預(yù)包被30min,然后 4℃過(guò)夜。每 1個(gè)孔用洗滌緩沖液 (PBS含0.05%Tween)清洗 1次,然后加入封閉液 (PBS含 3%牛血清白蛋白)100μl 37℃,45min。去除封閉液,加入一抗 (兔抗鼠 1∶1000,用 3%BSA-PBS稀釋)37℃,溫育 2h。然后用洗滌緩沖液清洗 4次,1min/次。稍晾干后加入二抗 (1∶2000),37℃,溫育 90min,用洗滌緩沖液沖洗 4次,每次1min。晾干后加入底物 0.1%ATM顯色 10min,用 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。應(yīng)用酶標(biāo)儀在 450rm處測(cè)定吸光度 (od值)。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS12.0軟件行 One-Way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以 (±s)表示,各組間比較采用 SNK法,以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 尿量的變化 各實(shí)驗(yàn)組用藥 7d后與用藥前相比尿量均顯著增多 (P＜0.05),但 3者增加的趨勢(shì)不同。應(yīng)用呋塞米后尿量顯著增加至用藥后第 4天達(dá)峰值,其后尿量有所減少。雙氫克尿噻組和安體舒通組用藥后呈顯著增加趨勢(shì) (見(jiàn)表1～3)。
2.2 尿滲量的變化 呋塞米組用藥后尿滲量呈顯著減少趨勢(shì)(P＜0.05),至用藥后第 4天左右,改變漸趨平穩(wěn);而雙氫克尿噻組用藥后第 1天尿滲量減少 10%左右,其后呈逐漸增加趨勢(shì),至用藥后第 6天,有顯著增加意義;安體舒通組的尿滲量變化則未見(jiàn)有明顯變化趨勢(shì) (見(jiàn)表1～3)。
2.3 尿肌酐的變化 呋塞米組用藥后尿肌酐呈顯著降低趨勢(shì)(P＜0.01);雙氫克尿噻組用藥后第 1天尿肌酐減少 30%左右,此后呈明顯降低趨勢(shì);安體舒通組用藥后第 1天尿肌酐減少 40%左右,其后改變有輕微波動(dòng),但總體呈降低趨勢(shì) (見(jiàn)表1～3)。
2.4 尿液 AQP2的濃度 呋塞米組尿液 AQP2濃度用藥后第 1天增加約 15%左右,至第 3天左右逐漸增加至峰值;雙氫克尿噻組用藥后第 1天增加約 13%左右,其后呈逐漸增加趨勢(shì),至第 7d達(dá)峰值;安體舒通組在用藥前 3d其值增加明顯,其后雖有增加,但改變不明顯 (見(jiàn)表1～3)。
2.5 尿液 AQP2的排泄量 (經(jīng)尿肌酐校正) 3組藥物其排泄率均呈顯著增加趨勢(shì) (P＜0.05),其中呋塞米組增加最為明顯,雙氫克尿噻組次之,安體舒通組最弱 (見(jiàn)表1～3)。
表1 呋塞米組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Tab le 1 The clinical effect in Furosemide group
表1 呋塞米組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Tab le 1 The clinical effect in Furosemide group
用藥前 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d尿量(m l) 4.5±1.0 10.7±1.5 16.4±1.4 19.9±1.4 23.3±3.4 22.7±2.7 22.3±2.5 21.4±2.8尿滲量(mosm/kgH2 O) 2058±291 1625±272 1362±194 1244±252 1124±198 1073±215 1154±221 1018±187尿AQP2濃度(ng/m l) 8.1±1.4 10.7±1.5 11.6±1.7 12.7±2.0 11.4±1.3 11.9±1.3 12.7±1.7 13.2±2.0尿肌酐(mmol/ml) 3060±221 1814±281 1069±430 690±214 490±225 327±121 192±56 182±64尿 AQP2/Cr(pg/μmol) 2.8±1.2 7.6±4.83 13.4±7.7 20.3±9.4 31.3±10.2 42.4±17.2 67.4±22.4 78.6±30.4
表2 雙氫克尿噻組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table2 The clinical effect in Dihydrocholorothiazide group
表2 雙氫克尿噻組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table2 The clinical effect in Dihydrocholorothiazide group
用藥前 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d尿量(m l) 4.4±1.6 7.4±2.4 12.4±2.1 13.2±1.8 16.9±3.4 18.3±1.9 19.4±1.5 20.3±3.8尿滲量(mosm/kgH2 O) 2122±186 1812±234 2034±194 2334±338 2366±439 2553±288 2654±358 2776±330尿AQP2濃度(ng/m l) 6.6±1.4 8.3±1.8 9.2±1.4 11.1±0.9 11.4±1.2 11.2±1.3 12.7±1.1 13.2±1.4尿肌酐(mmol/ml) 3164±741 2265±524 1913±524 986±231 701±312 503±219 460±170 328±142尿 AQP2/Cr(pg/μmol) 2.4±1.2 4.0±1.1 5.7±2.5 13.6±3.6 24.4±12.6 28.2±15.1 28.6±14.4 47.1±26.8
表3 安體舒通組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table3 The c linical effect in Antisterone group
表3 安體舒通組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table3 The c linical effect in Antisterone group
用藥前 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d尿量(m l) 4.7±1.0 7.4±1.5 10.3±1.6 12.0±2.4 13.2±2.6 14.4±2.4 16.3±2.8 17.1±2.6尿滲量(mosm/kgH2 O) 2260±382 2145±3377 2020±207 1850±234 1973±314 1975±346 1978±194 2192±350尿AQP2濃度(ng/m l) 7.8±2.1 8.6±1.4 10.2±1.2 11.4±1.0 12.0±1.8 10.2±1.0 11.1±1.1 11.4±2.2尿肌酐(mmol/ml) 3416±887 2850±614 1593±430 1093±654 932±339 771±417 470±246 449±312尿 AQP2/Cr(pg/μmol) 2.4±1.2 4.3±2.5 6.8±2.3 15.4±1.8 15.7±8.4 18.8±11.0 31.5±18.4 36.3±18.1
3 討論
AQP2是 1988年克隆發(fā)現(xiàn)的水通道家族中的一員,主要分布在腎臟集合管主細(xì)胞的胞漿內(nèi)和管腔側(cè)細(xì)胞膜上,在機(jī)體內(nèi)主要受 AVP調(diào)節(jié)以出胞的方式和管腔膜融合,從而水通道開(kāi)放,水重吸收增加。在尿液的沖刷作用下部分 AQP2可脫落排出,正常的水供應(yīng)條件下每天大約有 3%～4%的腎內(nèi)總 AQP2經(jīng)尿液排出,尿液中檢測(cè)到的 AQP2含量與主細(xì)胞管腔膜上AQP2呈正相關(guān),同時(shí)也與血液中 AVP的作用和腎臟 AQP2水平相關(guān)。我們發(fā)現(xiàn)在心力衰竭的大鼠和患者都存在有尿液中AQP2的排泄增加,尿液中的 AQP2可作為臨床監(jiān)測(cè)心力衰竭時(shí)水鈉潴留的重要指標(biāo)[6-7]。
利尿劑是目前臨床運(yùn)用較多的調(diào)節(jié)機(jī)體水電解質(zhì)平衡的重要藥物,尤其在充血性心力衰竭的治療中有著較為廣泛的運(yùn)用。各種利尿劑的作用機(jī)制各不相同,對(duì) AQP2的影響也不一致,我們通過(guò) ELISA方法檢測(cè)尿液中的 AQP2排泄來(lái)初步評(píng)價(jià)各種利尿劑對(duì)其影響,從而更好地指導(dǎo)臨床上對(duì)于心力衰竭病人治療過(guò)程中的 AQP2的監(jiān)測(cè)。但由于尿液 AQP2濃度受到尿量的影響,故將每份尿液 AQP2濃度與尿肌酐相比,用尿液AQP2/肌酐來(lái)評(píng)價(jià)尿液 AQP2的排泄率。Uenishi F等[8]提出,尿液 AQP2/肌酐與尿滲量呈正相關(guān)。
在我們的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),3種利尿藥物作用均可引起尿量和尿液 AQP2排出的明顯增加,這與一些相關(guān)報(bào)道結(jié)果一致[9],但增加的趨勢(shì)各不相同,且尿滲量的改變也不相同。呋塞米在藥物干預(yù)第 1天即引起尿量的顯著增加,至干預(yù)后第 4天達(dá)到尿量峰值,其后尿量增加減少,但仍維持在一個(gè)較高水平,其尿滲量的改變亦表現(xiàn)為干預(yù)前 4天顯著下降而其后漸趨平穩(wěn)。其尿液 AQP2的排泄率在早期隨著尿液增加排出增加,即使尿量有所減少,其排泄率仍呈增加趨勢(shì);而雙氫克尿噻和安體舒通雖然引起尿量增加沒(méi)有呋塞米明顯,但總體呈增加趨勢(shì),且伴隨著尿量的增加,AQP2的排泄率也顯著增加。這與雙氫克尿噻引起尿滲量增加相一致,而安體舒通組尿滲量改變不明顯,可能與其利尿作用較弱且具有保鉀功能有關(guān)。
呋塞米組 AQP2排泄率隨著尿量增加而增加的同時(shí),在尿量開(kāi)始有所減少的藥物干預(yù)后第 4天仍有所增加,所以我們認(rèn)為在呋塞米引起的 AQP2排出增加的原因中,除了尿量增加這一影響因素外,管腔膜上的 AQP2的增加更是其尿量減少后排出率繼續(xù)增加的主要原因,這可能正是臨床上使用呋塞米后期出現(xiàn)利尿效果減弱的機(jī)制之一。
1 Nislesen S,Agre P.The aquaporin family of water channels in kidney[J].Kidney Int,1995,48(40):1057-1068.
2 許頂立,任昊,Martin PY,等.充血性心力衰竭大鼠腎臟Aquaporin-2水通道蛋白基因的表達(dá) [J].中華醫(yī)學(xué)雜志,1998,78(2):118-120.
3 Umenishi F,Summer SN,Cadnapaphornchai M,et al.Comparison of three methods to quantify urinary aquaporin-2 protein[J].Kidney Int,2002,62(6):2288-2293.
4 許頂立,任昊.慢性心力衰竭水潴留機(jī)制的研究進(jìn)展 [J].第一軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,21(1):65-67.
5 江榮炎,許頂立,賴(lài)文巖,等.間接酶聯(lián)免疫吸附法定量檢測(cè)大鼠尿液水通道蛋白-2濃度 [J].中華老年心血管病雜志,2005,4:261-263.
6 許頂立,任昊,鄧英姿,等.腎臟 Aquaporin 2水通道蛋白的檢測(cè)及其在充血性心力衰竭的應(yīng)用 [J].腎臟病與透析腎移植雜志,1998,7:196-198.
7 Xu DL,Martin PY,Ohara M,et al.Upregulation of aquaporin-2 water channel expression in chronic heart failure rat[J].JClin Invest,1997,99(7):1500-1505.
8 Starklint J,Bech JN,Nvvad O,etal.Increased urinary aquaporin-2 excretion in response to furosem ide in patients with chronic heart failure[J].Scand JClin Lab Invest,2006,66(1):55-66.
9 Starklint J,Bech JN,Nvvad O,et al.Urinary excretion of aquaporin-2 after furosemide and felodipine in healthy humans[J].Scand J Clin Lab Invest,2005,65(3):249-261.
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林 晟,許頂立,賴(lài)文巖
水通道蛋白 2(aquaporin-2)是迄今為止發(fā)現(xiàn)的最具病理生理意義的水通道蛋白之一,對(duì)維持機(jī)體水平衡和調(diào)節(jié)體液容量至為重要,主要分布在腎臟集合管主細(xì)胞胞漿內(nèi)和小管側(cè)細(xì)胞膜上,在體內(nèi)主要受血管加壓素 (AVP)調(diào)節(jié)[1-2];其中部分腎臟 AQP2蛋白可脫落于小管腔經(jīng)尿液排出[3]。尿液AQP2濃度的檢測(cè)可能是一些臨床重要疾病,如心力衰竭水潴留等的重要檢測(cè)指標(biāo)[4]。利尿劑是臨床常用藥物,主要用于調(diào)節(jié)機(jī)體水鈉代謝,利尿劑和 AQP2兩者之間的相互聯(lián)系一直是臨床較為關(guān)注的問(wèn)題。本實(shí)驗(yàn)就生理狀況下,短期運(yùn)用呋塞米、雙氫克尿噻和安體舒通對(duì)大鼠尿液中 AQP2的改變進(jìn)行了研究。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 成年雄性 SD(Sprague dawley)大鼠 30只,體質(zhì)量 180～250g(購(gòu)自南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心)。
1.1.2 試劑 呋塞米片,雙氫克尿噻片,安體舒通片。
1.2 實(shí)驗(yàn)方法
1.2.1 動(dòng)物分組 將 18只 SD大鼠隨機(jī)分為呋塞米組、安體舒通組、雙氫克尿噻組,每組 6只。放置代謝籠中,自由進(jìn)食水 (飼料由南方醫(yī)院動(dòng)物所提供)。環(huán)境溫度控制在 25～28℃左右。動(dòng)物適應(yīng) 3d后開(kāi)始灌藥,灌藥 1次/d。將藥物溶于2ml去離子水中,注入胃內(nèi)。呋塞米組:20mg/kg,雙氫克尿噻組:25mg/kg,安體舒通組:20mg/kg。
1.2.2 尿液的收集 每天收集大鼠尿液記尿量,在 4℃以3000r/min離心 10min,去除細(xì)胞殘骸和食物殘?jiān)?加入蛋白酶抑制劑 PMSF,放入-70℃低溫冰箱,尿滲量由南方醫(yī)院腎內(nèi)科實(shí)驗(yàn)室采用冰點(diǎn)抑制法檢測(cè)。
1.2.3 ELISA 測(cè)定尿液 AQP2濃度[5]尿液用 0.05%SDSPBS等倍稀釋后,取 50m l加入 96孔酶標(biāo)板,37℃預(yù)包被30min,然后 4℃過(guò)夜。每 1個(gè)孔用洗滌緩沖液 (PBS含0.05%Tween)清洗 1次,然后加入封閉液 (PBS含 3%牛血清白蛋白)100μl 37℃,45min。去除封閉液,加入一抗 (兔抗鼠 1∶1000,用 3%BSA-PBS稀釋)37℃,溫育 2h。然后用洗滌緩沖液清洗 4次,1min/次。稍晾干后加入二抗 (1∶2000),37℃,溫育 90min,用洗滌緩沖液沖洗 4次,每次1min。晾干后加入底物 0.1%ATM顯色 10min,用 2mol/L H2SO4終止反應(yīng)。應(yīng)用酶標(biāo)儀在 450rm處測(cè)定吸光度 (od值)。
1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用 SPSS12.0軟件行 One-Way ANOVA統(tǒng)計(jì)分析,計(jì)量資料以 (±s)表示,各組間比較采用 SNK法,以 P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
2 結(jié)果
2.1 尿量的變化 各實(shí)驗(yàn)組用藥 7d后與用藥前相比尿量均顯著增多 (P＜0.05),但 3者增加的趨勢(shì)不同。應(yīng)用呋塞米后尿量顯著增加至用藥后第 4天達(dá)峰值,其后尿量有所減少。雙氫克尿噻組和安體舒通組用藥后呈顯著增加趨勢(shì) (見(jiàn)表1～3)。
2.2 尿滲量的變化 呋塞米組用藥后尿滲量呈顯著減少趨勢(shì)(P＜0.05),至用藥后第 4天左右,改變漸趨平穩(wěn);而雙氫克尿噻組用藥后第 1天尿滲量減少 10%左右,其后呈逐漸增加趨勢(shì),至用藥后第 6天,有顯著增加意義;安體舒通組的尿滲量變化則未見(jiàn)有明顯變化趨勢(shì) (見(jiàn)表1～3)。
2.3 尿肌酐的變化 呋塞米組用藥后尿肌酐呈顯著降低趨勢(shì)(P＜0.01);雙氫克尿噻組用藥后第 1天尿肌酐減少 30%左右,此后呈明顯降低趨勢(shì);安體舒通組用藥后第 1天尿肌酐減少 40%左右,其后改變有輕微波動(dòng),但總體呈降低趨勢(shì) (見(jiàn)表1～3)。
2.4 尿液 AQP2的濃度 呋塞米組尿液 AQP2濃度用藥后第 1天增加約 15%左右,至第 3天左右逐漸增加至峰值;雙氫克尿噻組用藥后第 1天增加約 13%左右,其后呈逐漸增加趨勢(shì),至第 7d達(dá)峰值;安體舒通組在用藥前 3d其值增加明顯,其后雖有增加,但改變不明顯 (見(jiàn)表1～3)。
2.5 尿液 AQP2的排泄量 (經(jīng)尿肌酐校正) 3組藥物其排泄率均呈顯著增加趨勢(shì) (P＜0.05),其中呋塞米組增加最為明顯,雙氫克尿噻組次之,安體舒通組最弱 (見(jiàn)表1～3)。
表1 呋塞米組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Tab le 1 The clinical effect in Furosemide group
表1 呋塞米組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Tab le 1 The clinical effect in Furosemide group
用藥前 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d尿量(m l) 4.5±1.0 10.7±1.5 16.4±1.4 19.9±1.4 23.3±3.4 22.7±2.7 22.3±2.5 21.4±2.8尿滲量(mosm/kgH2 O) 2058±291 1625±272 1362±194 1244±252 1124±198 1073±215 1154±221 1018±187尿AQP2濃度(ng/m l) 8.1±1.4 10.7±1.5 11.6±1.7 12.7±2.0 11.4±1.3 11.9±1.3 12.7±1.7 13.2±2.0尿肌酐(mmol/ml) 3060±221 1814±281 1069±430 690±214 490±225 327±121 192±56 182±64尿 AQP2/Cr(pg/μmol) 2.8±1.2 7.6±4.83 13.4±7.7 20.3±9.4 31.3±10.2 42.4±17.2 67.4±22.4 78.6±30.4
表2 雙氫克尿噻組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table2 The clinical effect in Dihydrocholorothiazide group
表2 雙氫克尿噻組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table2 The clinical effect in Dihydrocholorothiazide group
用藥前 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d尿量(m l) 4.4±1.6 7.4±2.4 12.4±2.1 13.2±1.8 16.9±3.4 18.3±1.9 19.4±1.5 20.3±3.8尿滲量(mosm/kgH2 O) 2122±186 1812±234 2034±194 2334±338 2366±439 2553±288 2654±358 2776±330尿AQP2濃度(ng/m l) 6.6±1.4 8.3±1.8 9.2±1.4 11.1±0.9 11.4±1.2 11.2±1.3 12.7±1.1 13.2±1.4尿肌酐(mmol/ml) 3164±741 2265±524 1913±524 986±231 701±312 503±219 460±170 328±142尿 AQP2/Cr(pg/μmol) 2.4±1.2 4.0±1.1 5.7±2.5 13.6±3.6 24.4±12.6 28.2±15.1 28.6±14.4 47.1±26.8
表3 安體舒通組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table3 The c linical effect in Antisterone group
表3 安體舒通組用藥 7d尿量、尿滲量、尿肌酐及 AQP2排泄 (±s)Table3 The c linical effect in Antisterone group
用藥前 1d 2d 3d 4d 5d 6d 7d尿量(m l) 4.7±1.0 7.4±1.5 10.3±1.6 12.0±2.4 13.2±2.6 14.4±2.4 16.3±2.8 17.1±2.6尿滲量(mosm/kgH2 O) 2260±382 2145±3377 2020±207 1850±234 1973±314 1975±346 1978±194 2192±350尿AQP2濃度(ng/m l) 7.8±2.1 8.6±1.4 10.2±1.2 11.4±1.0 12.0±1.8 10.2±1.0 11.1±1.1 11.4±2.2尿肌酐(mmol/ml) 3416±887 2850±614 1593±430 1093±654 932±339 771±417 470±246 449±312尿 AQP2/Cr(pg/μmol) 2.4±1.2 4.3±2.5 6.8±2.3 15.4±1.8 15.7±8.4 18.8±11.0 31.5±18.4 36.3±18.1
3 討論
AQP2是 1988年克隆發(fā)現(xiàn)的水通道家族中的一員,主要分布在腎臟集合管主細(xì)胞的胞漿內(nèi)和管腔側(cè)細(xì)胞膜上,在機(jī)體內(nèi)主要受 AVP調(diào)節(jié)以出胞的方式和管腔膜融合,從而水通道開(kāi)放,水重吸收增加。在尿液的沖刷作用下部分 AQP2可脫落排出,正常的水供應(yīng)條件下每天大約有 3%～4%的腎內(nèi)總 AQP2經(jīng)尿液排出,尿液中檢測(cè)到的 AQP2含量與主細(xì)胞管腔膜上AQP2呈正相關(guān),同時(shí)也與血液中 AVP的作用和腎臟 AQP2水平相關(guān)。我們發(fā)現(xiàn)在心力衰竭的大鼠和患者都存在有尿液中AQP2的排泄增加,尿液中的 AQP2可作為臨床監(jiān)測(cè)心力衰竭時(shí)水鈉潴留的重要指標(biāo)[6-7]。
利尿劑是目前臨床運(yùn)用較多的調(diào)節(jié)機(jī)體水電解質(zhì)平衡的重要藥物,尤其在充血性心力衰竭的治療中有著較為廣泛的運(yùn)用。各種利尿劑的作用機(jī)制各不相同,對(duì) AQP2的影響也不一致,我們通過(guò) ELISA方法檢測(cè)尿液中的 AQP2排泄來(lái)初步評(píng)價(jià)各種利尿劑對(duì)其影響,從而更好地指導(dǎo)臨床上對(duì)于心力衰竭病人治療過(guò)程中的 AQP2的監(jiān)測(cè)。但由于尿液 AQP2濃度受到尿量的影響,故將每份尿液 AQP2濃度與尿肌酐相比,用尿液AQP2/肌酐來(lái)評(píng)價(jià)尿液 AQP2的排泄率。Uenishi F等[8]提出,尿液 AQP2/肌酐與尿滲量呈正相關(guān)。
在我們的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn),3種利尿藥物作用均可引起尿量和尿液 AQP2排出的明顯增加,這與一些相關(guān)報(bào)道結(jié)果一致[9],但增加的趨勢(shì)各不相同,且尿滲量的改變也不相同。呋塞米在藥物干預(yù)第 1天即引起尿量的顯著增加,至干預(yù)后第 4天達(dá)到尿量峰值,其后尿量增加減少,但仍維持在一個(gè)較高水平,其尿滲量的改變亦表現(xiàn)為干預(yù)前 4天顯著下降而其后漸趨平穩(wěn)。其尿液 AQP2的排泄率在早期隨著尿液增加排出增加,即使尿量有所減少,其排泄率仍呈增加趨勢(shì);而雙氫克尿噻和安體舒通雖然引起尿量增加沒(méi)有呋塞米明顯,但總體呈增加趨勢(shì),且伴隨著尿量的增加,AQP2的排泄率也顯著增加。這與雙氫克尿噻引起尿滲量增加相一致,而安體舒通組尿滲量改變不明顯,可能與其利尿作用較弱且具有保鉀功能有關(guān)。
呋塞米組 AQP2排泄率隨著尿量增加而增加的同時(shí),在尿量開(kāi)始有所減少的藥物干預(yù)后第 4天仍有所增加,所以我們認(rèn)為在呋塞米引起的 AQP2排出增加的原因中,除了尿量增加這一影響因素外,管腔膜上的 AQP2的增加更是其尿量減少后排出率繼續(xù)增加的主要原因,這可能正是臨床上使用呋塞米后期出現(xiàn)利尿效果減弱的機(jī)制之一。
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