莪術(shù)油藥學(xué)研究進(jìn)展

展曉日，曾昭武，孟凡莉，王淑玲，謝 恬

（1.杭州師范大學(xué)生物醫(yī)藥與健康研究中心，浙江杭州 311121；2.杭州師范大學(xué)醫(yī)藥衛(wèi)生管理學(xué)院，浙江杭州 310036）

莪術(shù)油藥學(xué)研究進(jìn)展

展曉日1，曾昭武1，孟凡莉2，王淑玲1，謝 恬1

（1.杭州師范大學(xué)生物醫(yī)藥與健康研究中心，浙江杭州 311121；2.杭州師范大學(xué)醫(yī)藥衛(wèi)生管理學(xué)院，浙江杭州 310036）

莪術(shù)油是一種具有發(fā)展前景的抗腫瘤、抗病毒藥物.現(xiàn)將莪術(shù)油已取得的研究成果進(jìn)行整理，為莪術(shù)油的進(jìn)一步深入研究和開發(fā)提供參考.根據(jù)文獻(xiàn)報道，主要從莪術(shù)油的提取方法、化學(xué)成分、質(zhì)量控制、藥理研究等方面對其進(jìn)行概述.

莪術(shù)油；質(zhì)量控制；藥理研究

0 引 言

莪術(shù)為姜科植物蓬莪術(shù)CurcumaphaeocaulisVal.、廣西莪術(shù)CurcumakwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang或溫郁金CurcumawenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥根莖，后者習(xí)稱“溫莪術(shù)”.其性溫，味辛、苦，歸肝脾經(jīng).具有行氣破血，消積止痛之功.用于癥瘕痞塊，瘀血經(jīng)閉，食積脹痛等癥［1］.莪術(shù)油是從莪術(shù)中提取得到的揮發(fā)油，為傳統(tǒng)活血化瘀中藥.研究證實，莪術(shù)油藥理活性強(qiáng)、高效、安全，具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒、增強(qiáng)免疫等作用.下面對莪術(shù)油的研究進(jìn)展進(jìn)行概述.

1 提取方法

目前，莪術(shù)油的提取方法主要為傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法和超臨界萃取法.王地等［2］采用水蒸氣蒸餾法提取莪術(shù)揮發(fā)油，以正交試驗優(yōu)化提取條件，考察藥材粉碎度、加水量、蒸餾時間對揮發(fā)油提取率的影響，發(fā)現(xiàn)藥材粉碎度、加水量、提取時間對揮發(fā)油提出率均有顯著性影響.超臨界流體萃?。╯upercritical fluid extraction，SFE）技術(shù)是一項集提取、分離、濃縮為一體的新技術(shù)，其工藝優(yōu)越，質(zhì)量穩(wěn)定，適合工業(yè)化大生產(chǎn)的需要.郁紅禮等［3］以莪術(shù)醇為指標(biāo)對莪術(shù)的SFE工藝條件進(jìn)行了優(yōu)化.實驗證明，SFE法對莪術(shù)油及莪術(shù)醇的提取率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于文獻(xiàn)報道的水蒸氣蒸餾法的提取率.比較不同提取方法——SFE法、水蒸氣蒸餾法及索氏提取法對莪術(shù)油提取率的影響，并進(jìn)行超臨界CO2萃取法和水蒸氣蒸餾法對溫莪術(shù)油化學(xué)成分的影響研究.SFE法對莪術(shù)揮發(fā)油的提取效率明顯高于其它兩種方法，且SFE法與傳統(tǒng)水蒸氣蒸餾法制得的溫莪術(shù)油的化學(xué)成分基本一致，理化性質(zhì)基本相同，而其在效率、能耗、收率、所得提取物純度方面有著獨特的優(yōu)勢［4－5］.劉小虎等［5］嘗試采用近年來新興的加速溶劑萃取法進(jìn)行莪術(shù)揮發(fā)油的提取，該方法具有高效、無污染、工藝簡單和高實用等優(yōu)點，在揮發(fā)油提取方面有著良好的應(yīng)用前景.

2 化學(xué)成分

莪術(shù)油中主要含有多種倍半萜類物質(zhì)，目前人們已經(jīng)確定了莪術(shù)油中含有以下化學(xué)成分：莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮、莪術(shù)烯醇、異莪術(shù)烯醇、去氫莪術(shù)二酮、蓬莪二醇、莪術(shù)烯酮、甜沒藥姜黃醇、莪術(shù)烯、α－蒎烯、β－蒎烯、樟烯、樟腦、異龍腦、龍腦、異呋吉馬酮、吉馬酮，新莪術(shù)二酮、（4S，5S）大牻牛兒酮4，5環(huán)氧化物、1，8－桉油素、四甲基吡嗪、欖香烯、莪術(shù)內(nèi)酯、13－h(huán)ydroxygermacrone、curzeone、curcumanolide A，B、bisacumol、bisacurol、bisacurone、（1S，10S），（4S，5S）－germacrone－1（10），4－diepoxide、germacrone－1，10－epoxide、epiprocurcumenol、isoprocurcumenol、neoprocurcumenol、（4S）－13－h(huán)ydroxydehydrocurdione等.其中欖香烯又包括了β、γ、δ型.蓬莪術(shù)、桂莪術(shù)、溫莪術(shù)3者的成分組成基本一致，其中以溫莪術(shù)中所含的β－欖香烯為多，而蓬莪術(shù)中以龍腦為主.

3 莪術(shù)油及其制劑的質(zhì)量控制

莪術(shù)油總成分的含量常采用分光光度法測定，單體成分適宜用色譜方法進(jìn)行分析，目前最常用的就是高效液相色譜（HPLC）法、氣相色譜（GC）法、色譜－質(zhì)譜聯(lián)用法.

3.1 紫外－可見分光光度法

田書霞等［7］采用紫外－可見分光光度法測定復(fù)方益康唑凝膠中莪術(shù)油的含量.由于莪術(shù)油中含有多種能使香草醛變成紅色化合物的還原性成分，采用紫外－可見分光光度法以莪術(shù)醇作為對照品測定莪術(shù)油含量時，需要先測定醇油系數(shù)，從而保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性.

3.2 薄層掃描法

田頌九等［8］建立了溫莪術(shù)和桂莪術(shù)揮發(fā)油中吉馬酮含量的薄層掃描測定方法，其測定范圍在2～6 μg間成線性關(guān)系，且重現(xiàn)性、穩(wěn)定性和回收率等均理想.

3.3 HPLC法

何歡等［9］采用HPLC方法，在不同條件下測定牻牛兒酮與其他5種成分（莪術(shù)二酮、莪術(shù)醇、莪術(shù)烯、呋喃二烯及β－欖香烯）間的相對校正因子（RCF）.以上述6種成分為指標(biāo)，分別利用替代對照品法和常規(guī)含量測定方法對莪術(shù)油及其注射液進(jìn)行含量測定.實驗證明以替代對照品法測得的結(jié)果與常規(guī)含量測定方法結(jié)果一致，該方法經(jīng)濟(jì)實用，可以高效、準(zhǔn)確地對莪術(shù)油及其注射液進(jìn)行質(zhì)量控制.

張慧等［10］采用RP－HPLC法分離分析了溫莪術(shù)油中6種倍半萜類成分——莪術(shù)二酮、莪術(shù)醇、吉馬酮、莪術(shù)烯、呋喃二烯和β－欖香烯，并比較了SPE和水蒸氣提取法的溫莪術(shù)油倍半萜類成分的種類.證實溫莪術(shù)油的提取工藝更適合用超臨界CO2流體萃取法替代傳統(tǒng)的水蒸氣蒸餾法.

3.4 GC法

袁文娟等［11］建立了測定莪術(shù)油中莪術(shù)醇含量的柱前衍生化氣相色譜法.采用N，O－雙（三甲基硅氧烷）三氟乙酰胺（BSTFA）－三甲基氯硅烷（99∶1）為柱前衍生化試劑，該試劑與莪術(shù)醇分子中的羥基定量發(fā)生反應(yīng)，掩蓋活性基團(tuán)，衍生產(chǎn)物易于分離及檢測，并應(yīng)用GC－MS進(jìn)行了結(jié)構(gòu)確證.馮海紅等［12］建立了以氣相色譜法測定不同品種莪術(shù)中β－欖香烯含量的方法.該方法測定莪術(shù)揮發(fā)油中欖香烯的含量，不需要任何前處理，方法簡便快速，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠.

3.5 液相色譜－質(zhì)譜（LC－MS）聯(lián)用法

目前，LC－MS聯(lián)用技術(shù)主要用于莪術(shù)醇的藥代動力學(xué)研究方面.王巖等［13］借助LC－MS/MS法對大鼠血漿中莪術(shù)醇的濃度進(jìn)行了測定，結(jié)果表明此方法快速、簡便、靈敏，并具有專屬性強(qiáng)、分析時間短和血漿用量少的特點，適用于莪術(shù)醇的血藥濃度監(jiān)測和藥動學(xué)研究.張蕊等［14］建立了HPLC－MS/MS方法測定生物樣品中莪術(shù)油的主要有效成分莪術(shù)醇含量，計算其藥代動力學(xué)參數(shù)，評價靜脈推注不同劑量莪術(shù)油脂肪乳劑后莪術(shù)醇在Beagle犬體內(nèi)的藥代動力學(xué)特征，為臨床應(yīng)用提供依據(jù).

3.6 氣相色譜－質(zhì)譜（GC－MS）聯(lián)用法

周欣等［15］采用GC－MS法對溫莪術(shù)揮發(fā)油的指紋圖譜進(jìn)行了研究，建立了溫莪術(shù)揮發(fā)油指紋圖譜的分析方法，為溫莪術(shù)藥材的質(zhì)量控制提供參考.杜霞等［16］通過實驗證明GC－MS測定方法，可用于β－欖香烯制劑的質(zhì)量控制及血中藥物濃度的測定.

4 藥理作用

4.1 抗腫瘤

抗腫瘤作用是莪術(shù)油的主要藥理作用之一，目前研究表明其主要的抗腫瘤成分為β－欖香烯、莪術(shù)醇、莪術(shù)二酮等.大量臨床實踐表明莪術(shù)揮發(fā)油對許多癌癥有較好的治療作用，如肝癌、肺癌、白血病、子宮內(nèi)膜癌等.研究者對于莪術(shù)揮發(fā)油的抗腫瘤作用機(jī)制進(jìn)行了大量的研究.

4.1.1 肝癌 莪術(shù)醇及莪術(shù)油可能通過抑制環(huán)氧化酶－2（COX－2）和血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的表達(dá)，導(dǎo)致人體肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞凋亡，從而達(dá)到抗肝癌的目的［17］.以免疫組化染色方法測定抗增殖細(xì)胞核抗原（PCNA）、細(xì)胞周期素D1（cyclinD1），結(jié)果表明莪術(shù)油可能通過下調(diào)cyclinD1的表達(dá)，抑制PCNA的陽性表達(dá)率，進(jìn)而抑制腫瘤的生長［18］.莪術(shù)油具有很好的誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的作用，其作用強(qiáng)度與氟尿嘧啶（5－Fu）相同，說明莪術(shù)油抑制小鼠HepA肝癌的機(jī)理不僅與其抑制PCNA的表達(dá)、降低細(xì)胞核DNA含量從而抑制癌細(xì)胞增殖有關(guān)［19］，也與其誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡有關(guān)［18］.莪術(shù)油還可顯著下調(diào)B－細(xì)胞淋巴瘤/白血?。?基因（bcl－2）誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡［20］.

4.1.2 白血病 莪術(shù)油對HL－60和K562細(xì)胞有良好的生長抑制作用，且隨著莪術(shù)油藥物濃度和對細(xì)胞作用時間的增加，抑制率明顯升高.推測莪術(shù)油治療白血病可能在于其能夠抑制白血病細(xì)胞的生長.臨床使用莪術(shù)油注射液治療白血病，既可抑殺白血病細(xì)胞，又可保護(hù)正常造血干細(xì)胞的損傷，可作為自體造血干細(xì)胞移植體外凈化藥物，使移植物體外凈化更徹底［21］.

4.1.3 宮頸癌 莪術(shù)油注射液在體外可抑制人子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞株RL－95－2增殖，可能系通過促進(jìn)P16表達(dá)增加，而改變細(xì)胞周期進(jìn)程，同時抑制突變型P16表達(dá)從而抑制細(xì)胞生長［22］.宋利瓊等［23］通過實驗證明了抑制腫瘤的端粒酶活性和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡可能是莪術(shù)油抗鼠宮頸癌的重要分子機(jī)制；α－2b干擾素與莪術(shù)油聯(lián)合使用對抑制宮頸癌細(xì)胞增殖有協(xié)同效應(yīng).

4.1.4 乳腺癌 宋愛莉等［24］認(rèn)為莪術(shù)油可改善乳腺癌癌前病變造模大鼠的血液流變學(xué)，增加乳房的微循環(huán)灌注量，從而治療和預(yù)防乳腺癌癌前病變.不同濃度莪術(shù)油處理人乳腺癌MCF－7細(xì)胞，隨著莪術(shù)油濃度的增加，MCF－7細(xì)胞的增殖抑制率逐漸增高、凋亡率逐漸增加，呈劑量依賴性.說明莪術(shù)油可抑制MCF－7細(xì)胞增殖，并誘導(dǎo)其凋亡［25］.

4.1.5 卵巢癌 莪術(shù)油注射液作用人卵巢癌SKOV3細(xì)胞株后，可明顯抑制SKOV3細(xì)胞的生長，其抑制率與藥物濃度、作用時間呈量－效、時－效關(guān)系.莪術(shù)油注射液作用后，多數(shù)SKOV3細(xì)胞出現(xiàn)典型脹亡現(xiàn)象，并且細(xì)胞脹亡的程度隨著藥物濃度的增加而增強(qiáng).說明莪術(shù)油注射液通過促使細(xì)胞脹亡來實現(xiàn)對卵巢癌細(xì)胞生長的抑制［26－27］.

4.1.6 結(jié)腸癌 莪術(shù)油體外可明顯抑制小鼠CT26結(jié)腸癌細(xì)胞生長，其濃度與細(xì)胞生長抑制率成正比；莪術(shù)油可延長荷瘤鼠壽命并促進(jìn)荷瘤鼠結(jié)腸癌細(xì)胞的原位凋亡，誘導(dǎo)機(jī)體抗腫瘤反應(yīng)［28］.

4.1.7 肺癌 采用Lewis肺癌瘤小鼠腹水于小鼠右腋皮下接種造模，以5－Fu做陽性對照，觀察小鼠瘤重，并用免疫組化法檢測PCNA視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（RB）的表達(dá).證實莪術(shù)油抑制細(xì)胞增殖，上調(diào)RB蛋白表達(dá)，有效抑制Lewis肺癌細(xì)胞［29］.

4.2 抗菌、抗病毒

莪術(shù)油體外實驗對呼吸道合胞病毒、腺病毒3型、柯薩奇B3病毒、甲型流感病毒H1N1亞型和流感病毒亞甲型鼠肺適應(yīng)株FM1都具有明顯的抑制作用［30］.黃亞東等［31］研制的莪術(shù)油噴霧劑對流感病毒，副流感病毒Ⅰ、Ⅲ，呼吸道合胞病毒，3、7型腺病毒有輕微抑制作用，對副流感Ⅱ型病毒有較強(qiáng)的抑制作用.徐建泓等［32］對莪術(shù)油滴眼液進(jìn)行了體內(nèi)外抗菌和抗病毒作用的藥效學(xué)研究，其體外抗菌和抗病毒作用較弱，但體內(nèi)抗菌和抗病毒作用較強(qiáng).另外，莪術(shù)油對輪狀病毒［29］、禽流感病毒H5N1亞型［30］具有抑制作用.

4.3抗氧化作用

莪術(shù)油具有增強(qiáng)谷胱甘肽過氧化物酶（GSH－Px）活性和提高超氧化物歧化酶（SOD）的活性，有力地清除老化機(jī)體過多生成自由基的作用.通過降低小鼠血漿丙二醛（MDA）含量，減輕脂質(zhì)過氧化物對組織細(xì)胞的損傷，從而具有抗氧化、防衰老、預(yù)防疾病的作用［35］.莪術(shù)油在改善慢性低氧大鼠學(xué)習(xí)和記憶能力方面具有一定的功效.分析其可能的原因為：1）通過增加血清和海馬組織SOD活性，減少MDA含量以及降低海馬組織鈣超載，繼而達(dá)到減少自由基產(chǎn)生和保護(hù)神經(jīng)元細(xì)胞膜的作用；2）通過增加海馬及胞膜上p－CaMKII表達(dá)改善低氧大鼠學(xué)習(xí)和記憶［36］.莪術(shù)油可能通過提高抗氧化酶含量及清除體內(nèi)自由基，起到對戶外紫外線（UVB）皮膚氧化損傷的治療作用［37］.

4.4 抗血栓作用

欖香烯乳注射液具有一定的抑制血小板聚集作用，可明顯降低血瘀模型大鼠的全血粘度，血漿粘度、血沉、紅細(xì)胞壓積，纖維蛋白原，使紅細(xì)胞電泳時間縮短，紅細(xì)胞變形指數(shù)、聚集指數(shù)降低，有效地改善血瘀大鼠的粘、凝、滯狀態(tài).并發(fā)現(xiàn)欖香烯乳靜脈給藥能明顯抑制血小板聚集及血栓素A2（TXA2）的生成，增加前列環(huán)素（PGI2）的生成［38－40］.

5 展 望

目前，關(guān)于莪術(shù)油中化學(xué)成分及質(zhì)量控制方法的研究已經(jīng)相對成熟，其制劑方面的研究雖然較多，但多數(shù)仍停留于實驗室研究階段，莪術(shù)油本身是混合物，其制劑的穩(wěn)定性、載藥量及其毒性等均有待進(jìn)一步完善，以便將其推廣應(yīng)用于臨床.藥理研究方面，已經(jīng)做了大量的工作，但其深度方面還顯欠缺，未能明確莪術(shù)油的相關(guān)作用機(jī)理.因而，下一步的研究工作重點應(yīng)該由廣度轉(zhuǎn)向深度，明確莪術(shù)油的作用機(jī)制，以便更好地指導(dǎo)臨床用藥.綜上所述，莪術(shù)油作為一種抗病毒、抗腫瘤作用明確的傳統(tǒng)中藥，其研究開發(fā)應(yīng)用前景比較廣闊.

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Pharmaceutical Researches on Zedoary Turmeric Oil

ZHAN Xiao－ri1，ZENG Zhao－wu1，MENG Fan－li2，WANG Shu－ling1，XIE Tian1

（1.Center of Biomedicine and Health，Hangzhou Normal University，Hangzhou 311121，China；
2.College of Medicine and Health Management，Hangzhou Normal University，Hangzhou 310036，China）

Zedoary Turmeric Oil is a kind of antitumor and antiviral drugs with a bright prospect of development.To provide a reference for its further development，some relevant researches have been sorted.According to literature，the paper summarized the extraction method，chemical composition，qulitity control and pharmacological researches of Zedoary Turmeric Oil.

Zedoary Turmeric Oil；quality control；pharmacological research

R282.71

A

1674－232X（2011）05－0454－05

10.3969/j.issn.1674－232X.2011.05.013

2010－11－05

國家自然科學(xué)基金項目（81001647）；浙江省教育廳科研基金項目（Y201016990）；浙江省科技廳科研基金項目（2009C33005）；杭州市市屬高校重點實驗室科技創(chuàng)新項目（20100331T09）.

展曉日（1980—），女，山東萊西人，助理研究員，博士，從事中藥新藥及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究.E－mail：cortex＠163.com