硫酸軟骨素片含鹽酸氨基葡萄糖量的測定

孫華云，張明晶，姜成忠

(哈藥集團制藥六廠，哈爾濱150056)

鹽酸氨基葡萄糖硫酸軟骨素片由鹽酸氨基葡萄糖和硫酸軟骨素組成，用于關(guān)節(jié)炎的治療［1－3］.本文采用HPLC建立了鹽酸氨基葡萄糖硫酸軟骨素片中含鹽酸氨基葡萄糖量測定的方法［4－5］.

1 儀器與試藥

Waters 515高效液相色譜儀、UV2487檢測器;鹽酸氨基葡萄糖(中國藥品生物制品檢定所，140649－200702);鹽酸氨基葡萄糖硫酸軟骨素片(自制);甲醇色譜純;其余試劑均為分析純.

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑的色譜柱(Hypersil C18，4.6 mm×150 mm);以醋酸鈉(6.8 g醋酸鈉溶解于700 mL水中，用稀醋酸調(diào)節(jié)pH值至5.9加水定容至1 000 mL)－甲醇(80∶20)為流動相;檢測波長為340 nm;流速為1.0 mL/ min;β－異構(gòu)體的相對保留時間為1.0，α－異構(gòu)體的相對保留時間1.5.

2.2 測定法

取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當(dāng)于鹽酸氨基葡萄糖25 mg)，置25 mL量瓶中，加水適量超聲溶解并稀釋至刻度，搖勻，離心過濾，取續(xù)濾液作為供試品溶液;另取鹽酸氨基葡萄糖對照品適量，用水制成每1 mL中含1 mg的對照品溶液.移取100 μL的衍生劑(稱取50 mg鄰苯二甲醛溶解在1.25 mL無水甲醇中，加入3－巰基丙酸50 μL和0.1mol/L的硼酸緩沖液11.2 mL，混勻，密封放置30 min后使用.

每兩天放入10 μL的3－巰基丙酸，密封避光處貯存，在室溫條件下兩周內(nèi)可以使用.)和100 μL的標(biāo)準(zhǔn)溶液或供試品溶液，置于含有400 μL 0.1 mol/L的硼酸緩沖液(取四硼酸鈉3.815 g溶解于80 mL水中，調(diào)節(jié)pH值至9.5，轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶，加水定容至刻度，搖勻.)的試管中，混勻，衍生1 min后注入色譜儀10 μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計算.

2.3 線性關(guān)系考察

取鹽酸氨基葡萄糖對照品適量，精密稱定，以水逐步稀釋，制成一系列供試品溶液，按含量測定方法進行衍生后，分別進樣10 μL，記錄色譜圖，結(jié)果見表1.

表1 鹽酸氨基葡萄糖線性關(guān)系試驗結(jié)果

結(jié)果表明:鹽酸氨基葡萄糖在100～2 000 μg/ mL的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，質(zhì)量濃度與峰面積呈良好的線性關(guān)系.線性方程為:y=ax+b(a=1.005 898E－003，b=－9.179 708E－003，r=0.999 9))式中y為峰面積，x為樣品質(zhì)量濃度(μg/mL)，r為相關(guān)系數(shù).

2.4 回收率試驗

分別稱取鹽酸氨基葡萄糖陰性樣品、鹽酸氨基葡萄糖對照品9份(相當(dāng)于分別含兩主成分80%、100%、120%3個質(zhì)量濃度水平各3份)，置100 mL量瓶中，加水超聲使溶解加水稀釋至刻度，搖勻，濾過，精密量取續(xù)濾液進行衍生后，進樣10 μL，結(jié)果見表2.

表2 鹽酸氨基葡萄糖測定回收率試驗結(jié)果

結(jié)果表明:本品回收率偏高，是由于硫酸軟骨素原料中含有少量鹽酸氨基葡萄糖所引起的.

2.5 溶液穩(wěn)定性試驗

精密稱取樣品適量，按測定前處理方法制備供試液，室溫放置，分別于0、0.5、1、3、4、6 h，進樣10 μL，記錄峰面積，結(jié)果見表3.

表3 鹽酸氨基葡萄糖穩(wěn)定性試驗結(jié)果

結(jié)果表明:供試品溶液室溫放置6 h，鹽酸氨基葡萄糖峰面積無明顯變化，證明樣品溶液穩(wěn)定性良好.

2.6 重復(fù)性試驗

精密稱取樣品適量，按測定前處理方法平行配制6份.依法測定，按外標(biāo)法計算其標(biāo)示質(zhì)量分?jǐn)?shù)，結(jié)果見表4.結(jié)果表明:本法的重復(fù)性良好.

表4 鹽酸氨基葡萄糖重復(fù)性試驗結(jié)果

3 結(jié)語

對于硫酸軟骨素片中含鹽酸氨基葡萄糖量測定，文獻多采用比色法及咔唑法，上述方法專屬性不強，且操作繁瑣費時.本文建立的衍生化反相高效液相法專屬性強、操作簡便、快速、準(zhǔn)確、可作為硫酸軟骨素片中含鹽酸氨基葡萄糖量測定方法.

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［4］ 萬慧芳，萬 歡，汪華杰.鹽酸氨基葡萄糖反相高效液相色譜法含量測定方法研究［J］.南昌大學(xué)學(xué)報:醫(yī)學(xué)版，2010，50(5):96－99.

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