青藤祛濕外敷散的長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)研究

呂邵娃，李永吉，孫 凌，郭玉巖，王 銳，田世超

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，哈爾濱150040)

青藤祛濕外敷散是以鹽酸青藤堿為主要成分，加適宜輔料，通過(guò)PVA薄膜及紙塑壓封包裝的一種新型外敷散劑.鹽酸青藤堿具有抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫抑制、降壓、抗心律失常等藥理作用，用于治療各種風(fēng)濕關(guān)節(jié)疼痛等各種風(fēng)濕病及抗心律失常.為了進(jìn)一步考察該藥的安全性，根據(jù)長(zhǎng)期毒性試驗(yàn)要求［1］，并參考相關(guān)文獻(xiàn)［2－4］，本文對(duì)其進(jìn)行了家兔的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)，現(xiàn)報(bào)道如下.

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

50只大耳白家兔，(2.0±0.25)kg，雌雄各半，由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供.

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物

青藤祛濕外敷散由黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)藥劑實(shí)驗(yàn)室自備.

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

健康家兔分籠飼養(yǎng)，每籠1只飼養(yǎng)1周后，按性別隨機(jī)分成5組，分別為1個(gè)賦形劑組和4個(gè)實(shí)驗(yàn)組，4個(gè)實(shí)驗(yàn)組:完整皮膚兩個(gè)劑量(高、低)組和破損皮膚兩個(gè)劑量(高、低)組，每組10只.制備完整皮膚:在給藥前24 h將家兔背部脊柱兩側(cè)去毛，去毛面積約為150 cm2.去毛后24 h檢查皮膚是否因去毛而受傷，選皮膚未受傷家兔進(jìn)行試驗(yàn).制備破損皮膚:按完整皮膚制備方法去毛、消毒皮膚后，用砂紙劃破皮膚，使皮膚出現(xiàn)滲血為度.

實(shí)驗(yàn)組分別給予高劑量、低劑量青藤祛濕外敷散，對(duì)照組給予賦形劑.將供試品均勻涂于脫毛區(qū)，以醫(yī)用滅菌紗布兩層覆蓋后再用膠帶加以固定.每日用藥1次.連續(xù)用藥8周后，各組處死動(dòng)物6只，剩余動(dòng)物在停藥后繼續(xù)觀察2周后處死，所有動(dòng)物每日檢查用藥處皮膚變化，同時(shí)觀察動(dòng)物是否有全身中毒反應(yīng)，包括精神狀態(tài)、飲食變化、糞便性狀、黏膜情況及運(yùn)動(dòng)情況，每周稱體重1次.實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)解剖觀察全身內(nèi)臟的情況.取心、肺、肝、脾、腎、腦、腎上腺、胰腺、前列腺、睪丸(包括附睪)或卵巢(包括子宮)、用藥部皮膚稱重，計(jì)算臟器指數(shù)，并與對(duì)照組比較.

一般觀察，體重每周稱重1次.血液學(xué)、血液生化及病理組織學(xué)檢查分別與給藥后8周及停藥2周后各測(cè)1次.

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 一般情況

賦形劑組及各實(shí)驗(yàn)組在8周后和停藥2周期間，無(wú)一例動(dòng)物死亡，食量、大小便、行為活動(dòng)、皮膚和黏膜、大小便與賦形劑組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，各組動(dòng)物隨著試驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng)，體重也逐周增加，增長(zhǎng)速度接近，結(jié)果見(jiàn)表1.

表1 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔體重增長(zhǎng)的影響±S)

表1 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔體重增長(zhǎng)的影響±S)

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2.2 血液生化

長(zhǎng)期外用青藤祛濕外敷散的家兔，分別測(cè)血糖、尿素氮、甘油三酯、堿性磷酸酶、肌酐、谷氨酰轉(zhuǎn)酞酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、膽固醇、谷草轉(zhuǎn)氨酶指標(biāo).與賦形劑組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05).結(jié)果見(jiàn)表2、3.

表2 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔生化指標(biāo)的影響S)(給藥8周末)

表2 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔生化指標(biāo)的影響S)(給藥8周末)

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表3 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔生化指標(biāo)的影響)(恢復(fù)2周)

表3 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔生化指標(biāo)的影響)(恢復(fù)2周)

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2.3 血液常規(guī)

長(zhǎng)期外用青藤祛濕外敷散的家兔，分別測(cè)得血常規(guī)(白細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、中性粒細(xì)胞、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、血紅蛋白、血小板計(jì)數(shù)、凝血酶原時(shí)間、凝血酶時(shí)間等).與賦形劑組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05).結(jié)果見(jiàn)表4、5.

表4 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔血常規(guī)指標(biāo)的影響)(給藥8周末)

表4 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔血常規(guī)指標(biāo)的影響)(給藥8周末)

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表5 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔血常規(guī)指標(biāo)的影響)(恢復(fù)2周)

表5 青藤祛濕外敷散對(duì)家兔血常規(guī)指標(biāo)的影響)(恢復(fù)2周)

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2.4 對(duì)家兔臟器系數(shù)的影響

各劑量組用藥后肉眼觀察的形態(tài)、位置、色澤、硬度等均未見(jiàn)藥物引起的異常.各組臟器系數(shù)與賦形劑組比較均無(wú)顯著性差異(P＞0.05).

2.5 對(duì)臟器組織的影響

組織病理學(xué)檢查結(jié)果顯示:長(zhǎng)期外用青藤祛濕外敷散的家兔心、肺、肝、脾、腎、腦、腎上腺、胰腺、前列腺、睪丸(包括附睪)或卵巢(包括子宮)、用藥部皮膚與賦形劑組相似，未見(jiàn)因藥物引起得實(shí)質(zhì)細(xì)胞變性、壞死、間質(zhì)炎癥等毒性病變，停藥后也未見(jiàn)新出現(xiàn)的遲發(fā)性病變.

3 結(jié)語(yǔ)

本實(shí)驗(yàn)觀察了青藤祛濕外敷散的長(zhǎng)期毒性反應(yīng).結(jié)果表明，使用青藤祛濕外敷散后，各組動(dòng)物一般體征良好，體重增長(zhǎng)正常，血液學(xué)、血液生化指標(biāo)、組織病理學(xué)檢查結(jié)果與賦形劑組比較均無(wú)顯著性差異.由此可知，青藤祛濕外敷散經(jīng)皮使用對(duì)家兔無(wú)長(zhǎng)期蓄積性的毒性作用，是一種可以安全使用的外用制劑.本實(shí)驗(yàn)結(jié)果和各項(xiàng)指標(biāo)可為今后臨床用藥提供重要的依據(jù).

［1］ 徐叔云，卞如濂，陳 修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2002:232－233.

［2］ 金可可，葉天申，蔣松鶴，等.類(lèi)風(fēng)關(guān)巴布劑毒理學(xué)研究［J］.中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志，2004，l1(3):216－217.

［3］ 莫遺盛，王冬梅，黃 茜，等.傷必止對(duì)家兔的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)研究［J］.時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2008，19(7):1712－1713.

［4］ 劉 悅，靳洪濤，李 偃，等.精苓消瘤膠囊對(duì)Beagle犬的長(zhǎng)期毒性研究［J］.哈爾濱商業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào):自然科學(xué)版，2010，26 (2):129－135.