活性炭和培養(yǎng)容器對(duì)黃獨(dú)種質(zhì)離體保存的影響

尹明華，歐陽(yáng)佩

（上饒師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院，江西 上饒 334001）

黃獨(dú)（Dioscorea bulbifera L.）為薯蕷科薯蕷屬多年生草本植物[1]，在我國(guó)主產(chǎn)于湖北、湖南、江蘇等地[2]，其干燥塊莖有清熱解毒、散結(jié)消瘀、止血止痛之功效[3]，臨床多用于治療甲狀腺癌、食管癌、胃癌等[4]。關(guān)于黃獨(dú)組織培養(yǎng)的研究，國(guó)內(nèi)少見報(bào)道。近年來，我們對(duì)黃獨(dú)試管苗的快繁及其生長(zhǎng)發(fā)育進(jìn)行了初步的研究。

本研究初步探討了活性炭以及培養(yǎng)容器大小對(duì)黃獨(dú)試管苗生長(zhǎng)發(fā)育和離體保存的影響，以期為黃獨(dú)的種質(zhì)保存提供基本的理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 供試材料

黃獨(dú)無菌苗由上饒師范學(xué)院生命科學(xué)學(xué)院植物組織培養(yǎng)室提供。

1.2 方法

將黃獨(dú)帶芽莖段（0.5～1.5 cm）接種在培養(yǎng)基上進(jìn)行單因子試驗(yàn)。所用培養(yǎng)基均為MS＋KT 2 mg/L＋NAA 0.5 mg/L?；钚蕴吭囼?yàn)分為添加活性炭0.3 g/L和未添加活性炭2組，其均采用100 mL三角瓶加入40 mL的固體培養(yǎng)基、7.5 g/L瓊脂和30 g/L蔗糖。試驗(yàn)采用100，150，200 mL的三角瓶，其中均加入了60 mL的液體培養(yǎng)基和30 g/L蔗糖。以上培養(yǎng)基pH值均調(diào)為5.8～6.0，配制好后均在高壓滅菌鍋（121℃，0.1 MPa）滅菌20 min。培養(yǎng)條件為:光照時(shí)間14 h/d，光照強(qiáng)度1000～2000 lx，溫度（25±1）℃，濕度70%～80%。每隔數(shù)天觀察黃獨(dú)試管苗的生長(zhǎng)情況，6個(gè)月后統(tǒng)計(jì)試管苗的成活率。試驗(yàn)重復(fù)3次，數(shù)據(jù)取其平均值。

2 結(jié)果與分析

2.1 活性炭對(duì)黃獨(dú)試管苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響

由表1、圖1可知，添加活性炭會(huì)抑制黃獨(dú)試管苗的生長(zhǎng)，但可提高其成活率。試驗(yàn)還表明，試驗(yàn)早期活性炭由于可以吸附培養(yǎng)基中的有害物質(zhì)和帶芽莖段切口褐化的有毒物質(zhì)，從而對(duì)黃獨(dú)試管苗芽的提早萌發(fā)有促進(jìn)作用，但由于活性炭還可以吸附培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物激素，后期反而抑制黃獨(dú)帶芽莖段的生長(zhǎng)。

表1 活性炭對(duì)黃獨(dú)試管苗生長(zhǎng)發(fā)育和成活率的影響

2.2 培養(yǎng)容器對(duì)黃獨(dú)試管苗生長(zhǎng)發(fā)育的影響

由表2、圖2可知，培養(yǎng)容器的大小對(duì)黃獨(dú)試管苗的生長(zhǎng)有影響。容器越大，黃獨(dú)試管苗生長(zhǎng)狀況越好，但生長(zhǎng)速度過快，會(huì)導(dǎo)致營(yíng)養(yǎng)消耗也快，大容器保存6個(gè)月后的成活率就會(huì)越低。

表2 培養(yǎng)容器對(duì)黃獨(dú)試管苗生長(zhǎng)發(fā)育和成活率的影響

3 討論

目前研究表明，將繼代培養(yǎng)得到的試管苗進(jìn)行適當(dāng)分割轉(zhuǎn)入種質(zhì)保存培養(yǎng)基（通常加入一些限制植物生長(zhǎng)的物質(zhì)）中可顯著延長(zhǎng)保存時(shí)間[5]?；钚蕴恳话憔哂休^強(qiáng)的吸附性，能夠吸附一些有害物質(zhì)[6]，防止酚類物質(zhì)引起組織褐變[7-8]，因此，其在一定程度上可促進(jìn)黃獨(dú)幼苗生長(zhǎng)。但是，活性炭可能也會(huì)吸附培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和植物激素，而植物體內(nèi)同時(shí)存在數(shù)種植物激素，它們之間可相互促進(jìn)增效，也可相互拮抗抵消，在植物生長(zhǎng)發(fā)育過程中，任何一種生理過程往往不是培養(yǎng)基中某一激素的單獨(dú)作用，而是培養(yǎng)基中多種激素相互作用的結(jié)果[9]。因此，活性炭吸附植物激素將阻礙黃獨(dú)幼苗對(duì)營(yíng)養(yǎng)的吸收，不利于黃獨(dú)幼苗的后期生長(zhǎng)，但可延長(zhǎng)其保存時(shí)間。對(duì)于植物而言，生長(zhǎng)空間不足會(huì)導(dǎo)致根系無法充分生長(zhǎng)，影響水分和礦物質(zhì)吸收以及根細(xì)胞的呼吸作用，地上部分枝葉不能充分伸展，阻礙光合作用進(jìn)行。因此，容量瓶體積增大，增加了黃獨(dú)幼苗的生長(zhǎng)空間，更有利于其生長(zhǎng)，但營(yíng)養(yǎng)消耗過快，會(huì)導(dǎo)致其成活率下降。綜合考慮，100 mL三角瓶對(duì)黃獨(dú)的生長(zhǎng)發(fā)育和離體保存比較適宜。

［1］林厚文，張罡，趙宏，等.黃藥子的研究進(jìn)展[J].中草藥，2002，33（2）:175.

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［5］夏時(shí)云，孫濤，李德森.雜交壽的無菌播種、篩選、快速繁殖與離體種質(zhì)保存[J].華北農(nóng)學(xué)報(bào)，2004，19（4）:114.

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