吉林地區(qū)奶牛乳房炎病原菌分離鑒定與藥敏試驗

尹柏雙,王洪斌,高 利

(1.吉林農(nóng)業(yè)科技學院動物醫(yī)學學院,吉林吉林 132101;2.東北農(nóng)業(yè)大學動物醫(yī)學學院,黑龍江哈爾濱 150030)

奶牛乳房炎是奶牛最常見、防治最難的疾病之一。它導致奶牛的乳腺功能減退,乳汁分泌減少,奶質(zhì)下降,嚴重者喪失泌乳功能,是引起奶牛淘汰的主要原因之一,給奶牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失,也危害了人類健康。據(jù)統(tǒng)計,世界范圍內(nèi)奶牛乳房炎的發(fā)病率高達50%左右[1]。

雖然抗生素及磺胺類等藥物在乳房炎治療中取得了滿意的效果,但由于各區(qū)域氣候環(huán)境等因素的不同導致引起奶牛乳房炎的病原菌有所差異,以及長期使用抗生素產(chǎn)生的耐藥性,給奶牛乳房炎的治療帶來困難。因此,及時準確地掌握引起區(qū)域內(nèi)奶牛乳房炎病原菌的種類及耐藥性情況是有效治療該地區(qū)奶牛乳房炎的關(guān)鍵。

本試驗調(diào)查了吉林地區(qū)部分奶牛場及散養(yǎng)戶奶牛乳房炎的發(fā)病情況,對主要病原菌進行了分離鑒定和藥物敏感性試驗,為該地區(qū)奶牛乳房炎的防治提供科學、合理的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試劑 培養(yǎng)基材料:營養(yǎng)肉湯、普通瓊脂和高鹽甘露醇瓊脂均購自北京奧博星生物技術(shù)責任有限公司;麥康凱瓊脂(含結(jié)晶紫)、伊紅美藍瓊脂購自杭州天和微生物試劑有限公司;營養(yǎng)瓊脂購自北京三藥科技開發(fā)公司。微量發(fā)酵管和藥敏紙片購自上海伊華醫(yī)學科技有限公司。魚腥草注射液(河南官渡獸藥制造有限公司);鏈霉素、青霉素、紅霉素、左氟沙星、氧氟沙星、克林霉素、環(huán)丙沙星等(吉林農(nóng)業(yè)科技學院提供)。

1.2 乳樣 乳房炎奶樣160份,采自吉林周邊地區(qū)奶牛場及部分散養(yǎng)戶飼養(yǎng)的發(fā)生臨床型乳房炎而未經(jīng)抗生素藥物治療的病牛。

1.3 培養(yǎng)基的制備 普通瓊脂培養(yǎng)基、兔鮮血瓊脂培養(yǎng)基、伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基、甘露醇高鹽瓊脂培養(yǎng)基、營養(yǎng)肉湯、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基、改良愛德華培養(yǎng)基等,按教材中方法配制。

1.4 乳樣采集 采樣前先用溫水清洗采樣乳頭,再用75%酒精棉消毒乳頭,在每次清洗或消毒乳頭后均用消毒紙巾擦干。棄去采樣奶牛的頭3把奶,然后采集奶汁10～15 m L擠入已做好標記滅菌瓶中,4℃保存,24 h內(nèi)進行培養(yǎng)鑒定。

1.5 細菌分離與培養(yǎng) 將奶樣搖勻,無菌條件下分別接種于普通瓊脂培養(yǎng)基和血液瓊脂培養(yǎng)基,置于37℃恒溫箱培養(yǎng),觀察菌落形態(tài),涂片,染色后,鏡檢。根據(jù)菌體形態(tài)、溶血情況及染色特性初步判定細菌類屬[2]。并將其進一步純化培養(yǎng),將符合鏈球菌形態(tài)特征的菌株接種于改良愛德華培養(yǎng)基;符合葡萄球菌形態(tài)特征的菌株接種于血瓊脂平板;符合革蘭陰性桿菌形態(tài)的菌株接種于麥康凱瓊脂培養(yǎng)基。

1.6 生化鑒定 根據(jù)菌落形態(tài)和鏡檢結(jié)果,將桿菌接種至肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)24 h,分別進行吲哚、V-P、M.R.、硫化氫、枸櫞酸鹽、過氧化氫酶、糖發(fā)酵等試驗鑒定[2]。球菌在普通營養(yǎng)瓊脂和血液瓊脂平板形成圓形、金黃色、灰白色或檸檬色菌落,且接觸酶試驗、凝固酶試驗陽性的細菌,即鑒定為金黃色葡萄球菌;鏡檢形態(tài)符合鏈球菌特性,且接觸酶試驗陰性細菌,即鑒定為鏈球菌屬細菌。若細菌CAMP試驗陽性,不水解七葉苷和馬尿酸鈉,即鑒定為無乳鏈球菌;若細菌CAMP試驗陰性,不水解七葉苷和馬尿酸鈉,即鑒定為停乳鏈球菌;若細菌CAMP試驗陰性,水解七葉苷和馬尿酸鈉,即鑒定為乳房鏈球菌[3]。

1.7 藥敏試驗 采用藥敏紙片瓊脂擴散法[4],分別取經(jīng)鑒定的各培養(yǎng)基上的菌落,作密集劃線分別接種于相應培養(yǎng)基上,夾取抗菌藥物紙片,分別貼于平板上,置37℃恒溫培養(yǎng)24 h后取出,測量抑菌圈直徑,根據(jù)抑菌圈的大小,判定藥物的敏感性[5]。

2 結(jié)果與分析

2.1 細菌分離結(jié)果 從160份樣品中分離出224株細菌,經(jīng)分離培養(yǎng)、染色鏡檢、生化鑒定等試驗,判定感染病原菌的類型。結(jié)果表明,金黃色葡萄球菌、無乳鏈球菌、停乳鏈球菌是引起本地區(qū)奶牛乳房炎的主要病原菌,占總發(fā)病率的82.70%。其他菌共計41株,占18.30%。在160份樣品中只含1種優(yōu)勢菌的樣品 173份,既單一菌感染的病例占77.23%;含2種及 2種以上菌種的樣品51份,既混合感染的病例占22.77%。

表1 乳樣中細菌檢測結(jié)果

2.2 藥敏試驗結(jié)果 選用環(huán)丙沙星、克林霉素、氧氟沙星、青霉素、魚腥草注射液等11種藥物進行了藥敏試驗。結(jié)果表明,各種菌對同一藥物的敏感性多不同,但同一種菌的不同菌株對藥物的敏感程度相似,應用環(huán)丙沙星、左氟沙星、氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素和魚腥草注射液引起該地區(qū)奶牛乳房炎的病原菌對其均有較好的抑制作用,該地區(qū)奶牛乳房炎的病原菌對青霉素、紅霉素、克林霉素、鏈霉素等有廣泛的耐藥性(表2)。

表2 11種藥物對7種病原菌的平均抑菌直徑(平均值±標準誤)

3 討論

奶牛乳房炎是危害奶牛養(yǎng)殖業(yè)最嚴重的疾病之一,奶牛乳房炎發(fā)病數(shù)量一直居高不下,產(chǎn)生的經(jīng)濟損失在所有奶牛疾病中居于首位。引起奶牛乳房炎的病原微生物種類繁多,有真菌、細菌、病毒等,但95%以上都是由細菌引起的[6],各地區(qū)地理環(huán)境及飼養(yǎng)因素的不同導致引起奶牛乳房炎病原菌的種類略有差異。該研究結(jié)果表明,導致該地區(qū)奶牛乳房炎的病原菌種類主要有表皮葡萄球菌、乳房鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌、停乳鏈球菌、無乳鏈球菌與金黃色葡萄球菌。引起致病菌感染病畜的原因主要有兩方面:一方面,是由環(huán)境因素引起的,如病原菌通過牛體、泥土、糞便等傳播感染牛只,通過該途徑感染的病菌主要有表皮葡萄球菌、乳房鏈球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌等;另一方面,是通過擠奶過程感染,如經(jīng)擦洗乳房用的毛巾、水等接觸傳播,通過該途徑感染的病菌多為傳染性病原菌,如無乳鏈球菌與金黃色葡萄球菌。因此,保持牛舍內(nèi)外清潔、牛體的衛(wèi)生、避免擠奶過程中的交叉感染,是預防奶牛乳房炎的重要措施。

藥敏試驗結(jié)果表明,該地區(qū)奶牛乳房炎主要病原菌對青霉素、紅霉素、克林霉素、鏈霉素等獸醫(yī)臨床常用抗生素產(chǎn)生了較強的耐藥性。環(huán)丙沙星、左氟沙星、氧氟沙星、頭孢曲松鈉、慶大霉素和魚腥草注射液對該地區(qū)奶牛乳房炎主要病原菌均有較好的抑制作用,可以選用這6種抗菌藥物作為治療本地區(qū)奶牛乳房炎的候選藥物。不同地區(qū)奶牛乳房炎病原菌對抗生素的敏感性呈現(xiàn)較大差異[7]。純中藥制劑可以有效地治療奶牛乳房炎,解決了抗生素累積的問題[8],因此,本次試驗中選用了魚腥草注射液作為本地區(qū)奶牛乳房炎治療的藥物,結(jié)果表明,魚腥草注射液對這7種菌產(chǎn)生了很好的抑制作用,因此該藥物可以作為本地區(qū)奶牛乳房炎治療的首選藥物。

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