脂負(fù)荷性餌食對家兔脂代謝的影響

楊 梅，周建光，任雷鳴，趙靜惠，曹雪濱

（1.中國人民解放軍第二五二醫(yī)院，保定 071000；2.河北醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥理學(xué)研究室，石家莊 050017；3.保定市第一醫(yī)院，保定 071000）

研究表明血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三脂（Triglyceride，TG）和低密度脂蛋白膽固醇（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）水平增高和高密度脂蛋白膽固醇（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）水平降低是心血管疾病的重要危險因素，其中TC水平的升高可能是惟一的可獨(dú)立引發(fā)動脈粥樣硬化（atherosclerosis，AS）病變的因素［1］，血清TC含量升高會加速AS及其心血管病的進(jìn)程。因此，降低TC、TG、LDL-C而升高HDL-C的水平有助于阻止AS的發(fā)生和發(fā)展［2］。Clifton等［3］對TC水平升高人群的研究中不同個體對高脂飲食的敏感性存在差異，部分人群血清TC水平隨飲食改變明顯，該組人群定義為飲食敏感組；而另一部分人群TC對同樣飲食的改變并不發(fā)生明顯變化，則將其定義為飲食非敏感組。Spady等［4］曾在攝入飽和脂肪的倉鼠中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對該種現(xiàn)象的原因目前尚不清楚。本研究擬用家兔作為實驗動物對該現(xiàn)象進(jìn)行研究證實，明確家兔對高脂飲食的敏感性是否存在個體差異，其血脂水平如何改變。

1 材料和方法

1.1 儀器、飼料與動物

普通級新西蘭大耳白兔，雄性，體重1.5～2.5kg，河北省實驗動物中心提供（合格證號：703076）。飼養(yǎng)于中國人民解放軍第二五二醫(yī)院動物實驗中心（環(huán)境設(shè)施符合《中華人民共和國衛(wèi)生部實驗動物標(biāo)準(zhǔn)》二級標(biāo)準(zhǔn)）。高脂飼料組成：每100g普通兔飼料中含7.5g蛋黃粉、1g膽固醇和8g豬油。日立7600-020全自動生物化學(xué)分析儀，日本日立公司制造；電子天平（JM10001），余姚紀(jì)銘稱重校驗設(shè)備有限公司；電子分析天平（FA2004），上海良平儀器儀表有限公司；LDZ5-2型離心機(jī)，北京醫(yī)用離心機(jī)廠；TC、TG、HDL-C、LDL-C試劑盒：北京北化精細(xì)化學(xué)公司臨床試劑分廠生產(chǎn)。

1.2 動物分組

選取健康雄性新西蘭大耳白兔80只，隨機(jī)選取10只飼以普通飼料，另外70只飼以高脂飼料。喂養(yǎng)4周時，高脂飼料組家兔死亡22只。第4周末，耳緣靜脈取血測血脂水平。48只高脂飼料組家兔中，血清TC低于10mmol/L的實驗動物8只作為高脂飲食非敏感組；其余40只家兔的血清TC水平超過10mmol/L，從中隨機(jī)抽取10只作為高脂飲食敏感組［3］；普通飲食組10只動物存活良好，全部納入實驗。分組情況如下：普通飲食組10只、高脂飲食敏感組10只和高脂飲食非敏感組8只。

1.3 動物飼養(yǎng)及體重測定

普通飲食組繼續(xù)飼以普通飼料，其他2組繼續(xù)飼以高脂飲食，每只動物給予飼料量為100g/d。實驗期間動物單籠喂養(yǎng)，自由飲水。動物每周稱體重1次。分別于實驗開始時（0周，即給予高脂飼料前，共80只）以及實驗開始后的第4周（即高脂飲食第4周末）、7周（入組后共28只）、10周和13周末，由家兔耳緣靜脈取血測定血脂。

1.4 實驗動物血脂測定

兔耳緣靜脈采血，直接注入促凝生化管中，常溫靜置3h，置-4℃冰箱保存24h后，離心15min，分離血清。使用日立7600-020全自動生物化學(xué)分析儀檢測血脂；TC（mmol/L）、TG（mmol/L）、HDL-C（mmol/L）以及LDL-C（mmol/L）的測定均采用酶法（TC、TG、HDL-C和LDL-C試劑盒）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié)果

2.1 高脂飲食對敏感和非敏感家兔體重的影響

飼以高脂飲食前，普通飲食組、高脂飲食敏感組和高脂飲食非敏感組之間相比，家兔體重?zé)o顯著差別（P＞0.05）（表1）。雙因素方差分析結(jié)果表明，高脂飲食非敏感組家兔在第7、10和13周時的體重增長與普通飲食組相同；盡管高脂飲食敏感組動物的體重增長緩慢，但與普通飲食組相比無顯著意義（P＞0.05）（表1）。

與0周時的體重相比，普通飲食組和高脂飲食非敏感組在第4～13周、高脂飲食敏感組在第7～13周，家兔體重顯著增長（P＜0.05，P＜0.01）（表1）。

2.2 高脂飲食對敏感和非敏感家兔死亡率的影響

在13周實驗過程中，普通飲食組家兔10只，死亡1只，死亡率為10％；高脂飲食敏感組家兔10只，死亡4只，死亡率為40％；高脂飲食非敏感組8只，均存活良好，死亡率為0。普通飲食組和高脂飲食非敏感組動物的死亡率在數(shù)值上均低于高脂飲食敏感組，但未見統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。

2.3 高脂飲食對敏感和非敏感家兔血清脂質(zhì)水平的影響

2.3.1 血清TC的變化：飼以高脂飲食前，普通飲食組、高脂飲食敏感組和高脂飲食非敏感組之間相比，家兔血清TC水平無顯著差別（P＞0.05）（表2）。與普通飲食組相比，高脂飲食敏感組在第4～13周時，高脂飲食非敏感組在第7～13周時，動物血清TC水平顯著升高（P＜0.01）（表2）。但是，高脂飲食非敏感組家兔血清TC水平的上升程度顯著低于高脂飲食敏感組動物（P＜0.01）（表2）。

2.3.2 血清TG的變化：飼以高脂飲食前，普通飲食組、高脂飲食敏感組和高脂飲食非敏感組之間相比，家兔血清TG水平無顯著差別（P＞0.05）（表3）。與普通飲食組相比，高脂飲食敏感組在第4～13周時血清TG水平顯著升高（P＜0.01）（表3），而高脂飲食非敏感組血清TG水平的改變無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）（表3）。

高脂飲食非敏感組動物的血清TG水平在數(shù)值上有所升高，但是其升高程度顯著低于高脂飲食敏感組（P＜0.01）（表3）。

2.3.3 血清HDL-C的變化：飼以高脂飲食前，普通飲食組、高脂飲食敏感組和高脂飲食非敏感組之間相比，家兔血清HDL-C水平無顯著差別（P＞0.05）（表4）。與普通飲食組相比，高脂飲食敏感組在第4～13周以及非敏感組在第7～13周時，動物血清HDL-C水平均顯著升高（P＜0.05和0.01）（表4）。但是，高脂飲食非敏感組家兔血清HDL-C水平的上升程度顯著低于高脂飲食敏感組動物（P＜0.01）（表4）。

表1 兔高脂飲食13周各組體重變化情況Tab.1 Body weight of the rabbits fed an atherogenic diet for 13 weeks

表2 兔高脂飲食13周各組血清總膽固醇變化情況Tab.2 Serum total cholesterol levels in the rabbits fed an atherogenic diet for 13 weeks

表3 兔高脂飲食13周各組血清甘油三脂變化情況Tab.3 Serum triglyceride levels in the rabbits fed an atherogenic diet for 13 weeks

表4 兔高脂飲食13周各組血清高密度脂蛋白變化情況Tab.4 Serum HDL cholesterol levels in the rabbits fed an atherogenic diet for 13 weeks

表5 兔高脂飲食13周各組血清低密度脂蛋白變化情況Tab.5 Serum LDL cholesterol levels in the rabbits fed an atherogenic diet for 13 weeks

2.3.4 血清LDL-C的變化：飼以高脂飲食前，普通飲食組、高脂飲食敏感組和高脂飲食非敏感組之間相比，家兔血清LDL-C水平無顯著差別（P＞0.05）（表5）。與普通飲食組相比，高脂飲食敏感組在第4～13周以及非敏感組在第7～13周時，動物血清LDL-C水平均顯著升高（P＜0.05和0.01）（表5）。但是，高脂飲食非敏感組家兔血清LDL-C水平的上升程度顯著低于高脂飲食敏感組動物（P＜0.01）（表5）。

3 討論

血脂是指血液中的脂類，主要由血清TC、TG及非酯化脂肪酸等組成，其組成和含量可反映體內(nèi)脂類代謝情況，當(dāng)其濃度高于參考值范圍時為高脂血癥［5，6］。有調(diào)查結(jié)果提示［6］，高TC血癥、高LDL-C血癥和高TG血癥的患病率隨年齡增高而增高，且男性高于女性。TC、TG、LDL-C水平增高及HDL-C水平的下降與心血管疾病密切相關(guān)［2］。

兔對高脂飼料的敏感性高，是較易建立高脂血癥模型的動物之一，模型復(fù)制比較簡單，重復(fù)性好，易于評判。因此本實驗采用高脂飲食喂養(yǎng)法建立AS模型。雖然以往許多實驗給予兔高脂飼料中所含膽固醇比例不同，但均發(fā)現(xiàn)其實驗4周時TC水平明顯升高［7-9］（＞10mmol/L）。而本研究發(fā)現(xiàn)，實驗兔在給予高脂飲食后，某些實驗兔TC水平升高并不明顯（＜10mmol/L），且在13周實驗過程中這些動物TC升高趨勢明顯緩慢。Clifton等［3］對TC增高人群的研究發(fā)現(xiàn)，不同個體對高脂飲食的敏感性存在差異，部分人群血清TC水平隨飲食改變明顯，該組人群定義為飲食敏感組；而另一部分人群TC對同樣飲食的改變并不發(fā)生明顯變化，則將其定義為飲食非敏感組。因此，本研究將實驗4周時TC水平低于10mmol/L的實驗兔歸為高脂飲食非敏感組。

本實驗中給予高脂飲食的家兔共70只，其中死亡22只，對于高脂飲食不敏感的家兔共8只，非敏感性家兔出現(xiàn)的比例為16.7％。在實驗過程中，普通飲食組家兔死亡1只，高脂飲食敏感組家兔死亡4只，而高脂飲食非敏感組家兔均存活良好。高脂飲食非敏感組和普通飲食組兔在實驗過程中體重增長水平均高于高脂飲食敏感組兔，而死亡率卻很低，表明在同等條件下，高脂飲食非敏感兔的健康程度、抗病能力以及對環(huán)境的耐受性、適應(yīng)能力均明顯高于高脂飲食敏感兔。持續(xù)脂負(fù)荷，高脂飲食敏感家兔TC、TG、LDL-C顯著增高，其死亡率也隨著升高；而對于高脂飲食非敏感家兔來說，TC、TG、LDL-C無顯著變化，脂負(fù)荷對高脂飲食非敏感組兔脂代謝影響較小。

有學(xué)者在對人群的研究中認(rèn)為人體存在的對高脂飲食敏感性差異可能與脂蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)及其代謝產(chǎn)物等因素相關(guān)［4，10］。另外，攝入大量膽固醇可以造成LDL-C受體調(diào)節(jié)水平下移也可能是導(dǎo)致這種現(xiàn)象的原因之一［11］，但僅在攝入飽和脂肪的倉鼠中發(fā)現(xiàn)過類似現(xiàn)象［3］。本研究在高脂飲食兔中亦發(fā)現(xiàn)此現(xiàn)象，每日給予實驗兔相同食量的高脂飼料，雖然血脂水平均升高，但高脂飲食非敏感組兔血脂升高程度明顯低于高脂飲食敏感組兔，尤其是TC和LDL-C水平，到第7周時高脂飲食非敏感組兔TC和LDL-C升高水平仍低于高脂飲食敏感組兔4周時的水平，并且有下降趨勢。而高脂飲食非敏感組兔在實驗過程中TG水平升高不明顯。研究表明高脂飲食非敏感兔對高脂飲食的耐受性優(yōu)于高脂飲食敏感兔，考慮原因可能與遺傳因素有關(guān)，也可能雖然攝入量相同，但高脂飲食非敏感兔代謝較快或選擇性吸收?？傊?，研究結(jié)果表明高脂飲食非敏感組兔血清TC水平明顯低于高脂飲食敏感組兔；高脂飲食非敏感組兔對高脂飲食的敏感性低，以上均說明兔自身對脂代謝的調(diào)節(jié)功能存在差異，但其具體發(fā)生機(jī)制尚待進(jìn)一步研究。

［1］蘇靜怡.心血管疾病的病理生理基礎(chǔ)和發(fā)病機(jī)制［M］.北京：北京醫(yī)科大學(xué)、中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)聯(lián)合出版社，1994，38-57.

［2］Zollner N，Tato F.Fatty acid composition of the diet：impact on serum lipids and atherosclerosis［J］.Clin Ivest，1992，70（11）：968-1009.

［3］Clifton PM，Kestin M，Abbey M，et al.Relationship between sensitivity to dietary fat and dietary cholesterol［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，1990，10：394-401.

［4］Spady DK，Dletschy SM.Dietary asturatd triacyiglycerols suppress hepatic low density lipoprotein receptor activit in the hamster［J］.Proc Natl Acad Sci USA，1985，82：4526-4530.

［5］羅霄山.參黃降糖方降血糖、血脂作用的實驗研究［J］.中藥材，2004，27（5）：371-373.

［6］Wang XJ，Qi JP，Guan BL.The relationship between vascular endothelial growth factor and atherogenesis in hyperlipidemic mice［J］.Chin J Clin Rehabil，2004，8（9）：1767-1768.

［7］Negis Y，Aytan N，Ozer N，et al.The effect of tocopheryl phosphates on atherosclerosis progressionin rabbits fed with a high cholesterol diet［J］.Arch.Physiol.Biochem，2006（450）：63-66.

［8］楚羅湘，姜德謙，劉照云.吡格列酮對高脂飲食兔主動脈CD40L表達(dá)的影響［J］.中國動脈硬化雜志，2006，14（6）：491-494.

［9］楊曉云，王琳，曾和松，等.辛伐他汀對兔動脈粥樣硬化斑塊中核因子κB-DNA結(jié)合活性和基質(zhì)金屬蛋白酶1及3表達(dá)的影響［J］.中國動脈硬化雜志，2006，14（4）：277-280.

［10］Pyorala K.Dietary cholesterol in relation to plasma cholesterol and coronar heart disease［J］.Am J Clin Nutr，1987，45：1176-1184.

［11］Applebaum-Bowden DS，Haffner SM，Hartsook E，et al.Downregulation of the low density lipoprotein receptor by dietary cholesterol［J］.Am J Clin Nutr，1984，39：360-367.