牛的人工授精技術(shù)

余桂鳳

（廣西平樂縣水產(chǎn)畜牧獸醫(yī)局，平樂 542400）

1 概述

采精是人工授精的第1個重要環(huán)節(jié)。采精的原則是保證公牛正常和充分性欲和性行為表現(xiàn)，使射精順利完成，精液不被污染。目前常用的是假陰道采精法。對爬跨有困難的優(yōu)秀公牛也可采用電刺激法、對未經(jīng)采精訓(xùn)練的青年公牛還可采用按摩法。

2 準備工作

2.1 假陰道

（1）清洗假陰道。在每次采精結(jié)束后，必須用去污劑（洗衣粉等）在溫水中徹底清洗，隨后用清水沖凈、晾干。集精管要洗凈并進行高溫消毒。

（2）安裝與消毒。若用蘇式假陰道，應(yīng)將內(nèi)胎放入外殼內(nèi)，使露出2端的內(nèi)胎長短相等，將其翻轉(zhuǎn)于外殼的2端，用膠圈固定。用長柄鉗夾取70%的酒精棉球擦拭內(nèi)胎、要均勻、徹底。將經(jīng)高溫消毒的集 精杯經(jīng)酒精擦拭待其揮發(fā)后，扣在假陰道的一端。

（3）注水、測溫。從注水孔借助漏斗注入50～60 ℃的溫水，一般為假陰道內(nèi)胎和外殼夾層容積的1/2～2/3，用溫度計測量內(nèi)胎的溫度，維持在40～42℃即可。

（4）涂滑潤劑。一般用滅菌的白凡士林，在氣溫較低的冬春季節(jié)可用2∶1的凡士林和液體石蠟的混合劑。涂抹的深度一般以假陰道長的1／2～2／3為宜。

（5）壓力調(diào)節(jié)。從注水孔的活塞處吹入空氣，使假陰道人口呈丫行形即為適度。為了保溫起見，歐美式假陰道設(shè)有保溫套罩在集精管的外面。大型的公牛站，每次采精頭數(shù)較多，都將準備好的假陰道碼放在保溫箱內(nèi)，隨用隨取。在采精前要注意測量假陰道內(nèi)腔的溫度，可根據(jù)不同公牛的個體要求，控制在40～42 ℃。

2.2 臺牛

臺牛選擇。應(yīng)選擇健康、體壯、體型大小適宜的發(fā)情或不發(fā)情的母牛，也可選用性情溫順的公牛。采精前，應(yīng)將臺牛保定在采精架內(nèi)。對臺牛的后軀，特別是尾根、外陰及肛門等部位用肥皂或洗衣粉水刷洗干凈，再用消毒的布擦干。對初次用做臺牛的公母牛也可用2%來蘇兒溶液刷洗以上部位后擦干，以防采精過程中污染公牛的陰莖和精液。如有多頭公牛同日采精，可令下1頭準備采精的公牛觀察前1頭公牛的采精，這樣可增加預(yù)采精公牛的性刺激，提高其性欲，縮短采精時間，增加射精量。采精用的臺牛也可用假臺牛代替，做成固定的或活動的機械臺牛。是否使用假臺牛采精要根據(jù)被采精的公牛情況而定，以不影響公牛的性反射和射精量為原則。

3 采精操作

（1）假陰道。采精對采精的公牛，在其爬跨臺牛前要進行適當?shù)目刂?，待接受臺牛的性刺激引起性興奮、陰莖充分勃起，再令其爬跨。采精員在公牛爬跨前右手持假陰道站在臺牛的右側(cè)，使假陰道入口向上。待公牛爬跨臺牛準備射精時，右手虎口向上握住假陰道并與水平線呈30°固定于臺牛的臀部，左手旋即托住公牛的包皮將陰莖導(dǎo)入假陰道，公牛隨即縱身射精。切忌用假陰道去套公牛的陰莖，也不準用手直接握公牛的陰莖，以免造成陰莖外傷。為了減少對精液的污染，在采精前須對公牛下腹部和包皮鞘進行沖洗。采精場地要求安靜、整潔、防塵、防滑。

（2）按摩法采精。只適用于未經(jīng)訓(xùn)練的青年公牛和因肢蹄傷病無爬跨能力的公牛。采精前要對公牛進行適當?shù)谋６ǎ删珕T通過直腸將左手伸到恥骨下緣，緩緩向后向下沿骨盆底部找到輸精管膨大部（壺腹）和精囊腺。以拇指、食指和中指自前后分別輕輕按摩兩側(cè)壺腹，隨后再按摩兩側(cè)精囊腺，如此反復(fù)操作多次，最后將手掌向下，對準精囊腺后方的尿處殖道位前后滑動按摩，多數(shù)公牛即可在陰莖不充分勃起的情況下射精。按摩法收集的精液一般都比較稀。為防止污染，在采精前應(yīng)認真沖洗包皮鞘，并剪短包皮鞘前端的長毛。

（3）電刺激法采精。只適用于育種價值高而失去爬跨能力或性反射遲鈍的公牛。將2個電極套在以手套絕緣的拇指和食指上，伸入直腸后將手指固定在腰薦部神經(jīng)的射精中樞部位。交流電壓15～20伏，刺激5～10 S，間歇5～10 S，經(jīng)數(shù)次反復(fù)刺激，公牛即可射精。由于這種方法 比較復(fù)雜，給公牛造成痛苦較大，一般不采用。

4 精液品質(zhì)檢查

目前，在全世界范圍內(nèi)，牛的人工授精已普遍采用冷凍精液輸精。因此，在奶牛人工授精中的精液品質(zhì)檢查，主要是指在輸精前后，對解凍后的精液進行檢查。國內(nèi)外公牛的冷凍精液都有嚴格的質(zhì)量標準，用戶對其質(zhì)量的檢查主要是進一步核實其質(zhì)量，了解或發(fā)現(xiàn)操作中的問題。

4.1 精子解凍活率檢查

（1）顆粒冷凍精液。取消毒并封裝于安瓿內(nèi)的稀釋液，放于40 ℃的溫水中，待其溫度接近40℃時，打開安瓿放入顆粒冷凍精液1粒，輕輕搖動，使其融化，即可取樣在高倍顯微鏡下觀察其活率。檢查時顯微載物臺的溫度應(yīng)保持在37℃左右。在評定活率時，要注意上、中、下3個層次精子活率的變化，左、右、上、下4個方位視野的差異，才能做出較準確的判斷?；盥试?.3以上即為合格精液。

（2）細管冷凍精液?？芍苯油度?0℃溫水中，待其融化后，立即取出，剪去棉塞一端，取樣檢查。

4.2 死活精子比例檢查

先將精子死活染色液分裝于容量為0.5 ml左右的指形玻璃小管中，染色液 為伊紅。苯胺黑溶液，染色前先放入37 ℃恒溫箱或水浴箱中預(yù)熱，滴入解凍精液2～3滴，混勻后再放入溫箱，3 min后即可制做抹片，待抹片風(fēng)干后在油鏡下觀察。死精子為紅色，活精子不著色或只在頭部的核環(huán)處呈淡紅色。隨機觀察200個精子并計算出死、活精子的比例。

4.3 密度檢查

對精子密度檢查的最簡單方法是，取1滴解凍精液在低倍顯微鏡下憑經(jīng)驗粗略地估計其密度是否符合輸精的要求。較精確的方法是采用血球計數(shù)裝置，進行精確的計算，具體方法在這里不作介紹。以此為基礎(chǔ)建立起來的光電比色法測定精液中精子密度，已經(jīng)被大型公牛站廣泛應(yīng)用。通過密度的檢查可以計算出被檢精液每毫升所含的精子數(shù)，再根據(jù)解凍后的活率可得每毫升精液中的有效精子數(shù)，最后乘以輸精劑量計算出每個輸精劑量的有效精子數(shù)。