女貞子化學(xué)成分研究Δ

張廷芳，戴毅，屠鳳娟，姚新生1，（1.暨南大學(xué)中藥及天然藥物研究所，廣州市51062；2.廣東省中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及創(chuàng)新藥物研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣州市 51062；.沈陽藥科大學(xué)，沈陽市 110016）

中藥女貞子（Ligustri LucidiFructus）為木犀科植物女貞Ligustrum lucidumAit.的干燥成熟果實(shí)[1]，分布于河北、山西、陜西、江蘇、福建、廣西、云南等省區(qū)。其味苦，平；滋陰補(bǔ)肝，烏發(fā)明目。主要用于肝腎陰虛、頭暈?zāi)垦?、耳鳴、頭發(fā)早白、腰膝酸軟等證的治療[2]。現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，女貞子具有免疫調(diào)節(jié)作用和抗腫瘤、抗衰老、降血糖血脂等多種活性[3～5]。為了確定其有效成分，保障臨床用藥安全，筆者對(duì)女貞子乙酸乙酯部位進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。通過多種柱色譜方法，從該植物乙酸乙酯萃取物中分離得到8個(gè)化合物，利用現(xiàn)代波譜學(xué)等方法鑒定了它們的結(jié)構(gòu)，分別為齊墩果酸（1）、2α-羥基齊墩果酸（2）、19α-羥基-烏蘇酸（3）、委陵菜酸（4）、3β-氧-順式-香豆酰-2α-羥基-齊墩果酸（5）、3β-氧-反式-香豆酰-2α-羥基-齊墩果酸（6）、3-氧-順式-香豆酰-委陵菜酸（7）、3-氧-反式-香豆酰-委陵菜酸（8）。

1 儀器與試藥

LCQ Advantage MAX質(zhì)譜儀（美國(guó) Finnigan公司）；AVANCE-400型超導(dǎo)核磁共振儀（瑞士Bruker公司）；安捷倫1200型高效液相色譜儀（美國(guó)Agilent公司）；薄層色譜用硅膠GF-254（煙臺(tái)化學(xué)工業(yè)研究所）；反相ODS填料（日本YMC公司）；Sephadex LH-20填料（瑞典Pharmacia公司）。

氘代試劑（美國(guó)CIL公司）；甲醇為色譜純，所用化學(xué)試劑均為分析純；女貞子藥材購(gòu)自廣州致信藥業(yè)有限公司，經(jīng)香港中文大學(xué)中醫(yī)學(xué)院車鎮(zhèn)濤教授鑒定確認(rèn)為真品。

2 提取與分離

女貞子1 kg，70%乙醇加熱回流提取3次，每次2 h。合并提取液，減壓濃縮，冷凍干燥后得女貞子醇提取物粉末380 g。以適量水混懸后，用乙酸乙酯萃取，減壓回收溶劑，得到乙酸乙酯萃取部分68 g。取50 g乙酸乙酯萃取物，加入100 g硅膠（100～200目）拌樣，充分干燥后采用硅膠柱色譜（1 kg，200～300目）分離，環(huán)己烷-乙酸乙酯梯度洗脫，得到3個(gè)組分。組分1經(jīng)反復(fù)ODS開放柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜得到化合物1。組分2經(jīng)反復(fù)ODS開放柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜以及制備HPLC[甲醇-水（15∶85）]得到化合物5、6。組分3經(jīng)反復(fù)ODS開放柱色譜、Sephadex LH-20柱色譜以及制備HPLC[甲醇-水（20∶80）]，得到化合物2、3、4、7、8。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物 1：白色粉末。EI-MSm/z：456，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C30H48O3。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：0.59（3H，s）、0.61（3H，s）、0.72（3H，s）、0.73（3H，s）、0.75（3H，s）、0.79（3H，s）、0.96（3H，s）、2.64（1H，m，H-18）、3.02（1H，m，H-3）、5.08（1H，brs，H-12）。13C-NMR（100 MHz ，CDCl3）δ：38.2（C-1）、26.4（C-2）、78.4（C-3）、38.4（C-4）、55.0（C-5）、18.0（C-6）、32.4（C-7）、39.0（C-8）、47.4（C-9）、36.7（C-10）、22.7（C-11）、122.0（C-12）、143.6（C-13）、41.0（C-14）、27.4（C-15）、23.1（C-16）、46.1（C-17）、41.0（C-18）、45.7（C-19）、30.3（C-20）、33.5（C-21）、32.3（C-22）、27.6（C-23）、14.9（C-24）、15.2（C-25）、16.4（C-26）、25.5（C-27）、32.6（C-29）、23.1（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，故鑒定化合物1為齊墩果酸（oleanolic acid）。

化合物 2：白色粉末。EI-MSm/z：472，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C30H48O4。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：0.80（3H，s）、0.81（3H，s）、0.90（3H，s）、0.94（3H，s）、1.00（3H，s）、1.01（3H，s）、1.15（3H，s）、2.85（1H，m，H-18）、2.89（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3）、3.61（1H，m，H-2）、5.24（1H，brs，H-12）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：48.1（C-1）、69.5（C-2）、84.5（C-3）、40.6（C-4）、56.7（C-5）、19.6（C-6）、33.8（C-7）、40.5（C-8）、49.0（C-9）、39.3（C-10）、24.1（C-11）、123.4（C-12）、145.4（C-13）、43.0（C-14）、28.8（C-15）、24.6（C-16）、47.7（C-17）、42.8（C-18）、47.3（C-19）、31.6（C-20）、34.9（C-21）、33.9（C-22）、29.3（C-23）、17.8（C-24）、17.1（C-25）、17.5（C-26）、26.5（C-27）、33.6（C-29）、24.0（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，故鑒定化合物2為2α-羥基齊墩果酸（2α-hydroxy oleanolic acid）。

化合物 3：白色粉末。EI-MSm/z：472，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C30H48O4。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：0.77（3H，s）、0.79（3H，s）、0.92（3H，d，J＝6.8 Hz）、0.94（3H，s）、0.97（3H，s）、1.18（3H，s）、1.32（3H，s）、2.49（1H，s，H-18）、3.14（1H，m，H-3）、5.27（1H，brs，H-12）。13C-NMR（100 MHz ，CD3OD）δ：39.9（C-1）、27.9（C-2）、79.8（C-3）、39.8（C-4）、55.8（C-5）、19.6（C-6）、34.2（C-7）、41.1（C-8）、43.3（C-9）、38.1（C-10）、24.7（C-11）、129.5（C-12）、140.0（C-13）、42.6（C-14）、29.6（C-15）、26.6（C-16）、48.3（C-17）、55.1（C-18）、73.6（C-19）、43.1（C-20）、27.3（C-21）、39.0（C-22）、28.8（C-23）、15.9（C-24）、16.3（C-25）、17.5（C-26）、24.8（C-27）、182.2（C-28）、16.6（C-29）、27.1（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，故鑒定化合物 3為 19α-羥基-烏蘇酸（19α-hydroxy ursolic acid）。

化合物 4：白色粉末。EI-MSm/z：488，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C30H48O5。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：0.79（3H，s）、0.81（3H，s）、0.99（3H，s）、1.00（3H，s）、1.18（3H，s）、1.32（3H，s）、0.91（3H，d，J＝6.6 Hz，H-30）、2.92（1H，d，J＝9.6 Hz，H-3α）、3.62（1H，ddd，J＝4.5，9.6，11.2 Hz，H-2β）、2.5（1H，s，H-18）、5.29（1H，t，J＝3.5 Hz，H-12）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：48.2（C-1）、69.5（C-2）、84.5（C-3）、41.1（C-4）、56.7（C-5）、19.7（C-6）、34.1（C-7）、40.5（C-8）、48.6（C-9）、39.2（C-10）、24.7（C-11）、129.2（C-12）、140.2（C-13）、42.7（C-14）、29.6（C-15）、26.6（C-16）、48.7（C-17）、55.1（C-18）、73.6（C-19）、43.1（C-20）、27.3（C-21）、39.1（C-22）、29.3（C-23）、17.6（C-24）、17.1（C-25）、17.5（C-26）、24.8（C-27）、27.1（C-29）、16.6（C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，故鑒定化合物4為委陵菜酸（tormentic acid）。

化合物 5：白色粉末。EI-MSm/z：618，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C39H54O6。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：5.83（1H，d，J＝12.8 Hz，H-2′）、6.85（1H，d，J＝12.8 Hz，H-3′）、6.74（2H，d，J＝8.7 Hz，H-6′8′）、7.65（2H，d，J＝8.7 Hz，H-5′9′）。13C-NMR（100 MHz ，CD3OD）δ：47.3（C-1）、67.6（C-2）、85.3（C-3）、39.3（C-4）、56.5（C-5）、19.5（C-6）、33.8（C-7）、40.6（C-8）、49.0（C-9）、37.9（C-10）、24.1（C-11）、123.3（C-12）、145.5（C-13）、43.0（C-14）、28.8（C-15）、24.6（C-16）、46.8（C-17）、42.8（C-18）、47.7（C-19）、31.6（C-20）、34.9（C-21）、31.7（C-22）、29.2（C-23）、17.8（C-24）、17.1（C-25）、18.2（C-26）、26.4（C-27）、33.6（C-29）、24.0（C-30）。 168.6（C-1′）、116.8（C-2′）、144.7（C-3′）、145.5（C-4′）、133.6（C-5′）、115.8（C-6′）、159.9（C-7′）、115.8（C-8′）、133.6（C-9′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8，9]報(bào)道一致，故鑒定化合物5為3β-氧-順式-香豆酰-2α-羥 基 -齊 墩 果 酸 [3β-O-（cis-p-Coumaroyl）-2α-hydroxy oleanolic acid]。

化合物6：白色粉末。EI-MSm/z：618，結(jié)合1H-NMR和13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C39H54O6。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.38（1H，d，J＝16.0Hz，H-2′）、7.62（1H，d，J＝16.0 Hz，H-3′）、6.80（2H，d，J＝8.7 Hz，H-6′8′）、7.46（2H，d，J＝8.7 Hz，H-5′9′）。13C-NMR（100 MHz ，CD3OD）δ：47.5（C-1）、67.6（C-2）、85.6（C-3）、39.3（C-4）、56.5（C-5）、19.5（C-6）、33.9（C-7）、40.6（C-8）、48.9（C-9）、38.0（C-10）、24.1（C-11）、123.1（C-12）、145.8（C-13）、43.0（C-14）、28.9（C-15）、24.6（C-16）、46.7（C-17）、43.0（C-18）、47.5（C-19）、31.7（C-20）、34.9（C-21）、31.7（C-22）、29.2（C-23）、17.9（C-24）、17.1（C-25）、18.3（C-26）、26.4（C-27）、33.6（C-29）、24.1（C-30）。 169.6（C-1′）、115.9（C-2′）、146.2（C-3′）、127.4（C-4′）、131.1（C-5′）、116.8（C-6′）、161.2（C-7′）、116.8（C-8′）、131.1（C-9′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8，9]報(bào)道一致，故鑒定化合物6為3β-氧-反式-香豆酰-2α-羥 基 -齊 墩 果 酸 [3β-O-（trans-p-Coumaroyl）-2α-hydroxy oleanolic acid]。

化合物 7：白色粉末。EI-MSm/z：634，結(jié)合 1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C39H54O7。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：6.89（1H，d，J＝13.0 Hz）、5.86（1H，d，J＝13.0 Hz）、7.65（2H，d，J＝9.0 Hz）、6.74（2H，d，J＝9.0 Hz）。13C-NMR（100 MHz ，CD3OD）δ：48.6（C-1）、67.6（C-2）、85.3（C-3）、40.5（C-4）、56.5（C-5）、19.6（C-6）、34.1（C-7）、41.1（C-8）、48.6（C-9）、39.2（C-10）、24.8（C-11）、129.0（C-12）、140.3（C-13）、42.7（C-14）、29.7（C-15）、26.7（C-16）、49.5（C-17）、55.2（C-18）、73.7（C-19）、43.1（C-20）、39.1（C-21）、27.4（C-22）、29.2（C-23）、17.6（C-24）、17.0（C-25）、18.2（C-26）、24.8（C-27）、27.1（C-29）、16.6（C-30）。168.6（C-1′）、117.5（C-2′）、144.7（C-3′）、127.8（C-4′）、133.6（C-5′）、115.7（C-6′）、159.9（C-7′）、115.7（C-8′）、133.6（C-9′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故鑒定化合物7為3-氧-順式-香豆酰-委陵菜酸（3-O-cis-p-Coumaroyl tormentic acid）。

化合物8：白色粉末。EI-MSm/z：634，結(jié)合1H-NMR、13C-NMR譜數(shù)據(jù)，推測(cè)其分子式為C39H54O7。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.65（1H，d，J＝16.0 Hz）、6.41（1H，d，J＝16.0 Hz）、7.48（2H，d，J＝9.0 Hz）、6.82（2H，d，J＝9.0 Hz）。13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：48.6（C-1）、67.6（C-2）、85.6（C-3）、40.6（C-4）、56.5（C-5）、19.6（C-6）、34.0（C-7）、41.1（C-8）、48.6（C-9）、39.2（C-10）、24.7（C-11）、129.1（C-12）、140.2（C-13）、42.7（C-14）、29.60（C-15）、26.6（C-16）、55.1（C-18）、73.6（C-19）、43.1（C-20）、39.0（C-21）、27.3（C-22）、29.3（C-23）、17.5（C-24）、17.1（C-25）、18.3（C-26）、24.8（C-27）、27.1（C-29）、16.6（C-30）。169.6（C-1′）、115.8（C-2′）、146.2（C-3′）、127.3（C-4′）、131.1（C-5′）、116.8（C-6′）、161.2（C-7′）、116.8（C-8′）、131.1（C-9′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，故鑒定化合物8為3-氧-反式-香豆酰-委陵菜酸（3-O-trans-p-Coumaroyl tormentic acid）。

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