從獸用生物制品企業(yè)角度看我國SPF雞質量控制現(xiàn)狀

何海蓉，王正春，劉文峰，劉玉云，張勇強

(1.中國牧工商集團總公司研究院，北京 100070；2.乾元浩生物股份有限公司，北京 100070)

隨著我國畜牧養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，規(guī)?；?、集約化養(yǎng)殖水平不斷提高，對于高品質疫苗的需求日益增加，促使我國獸用生物制品行業(yè)迅猛發(fā)展，獸用生物制品企業(yè)數(shù)量不斷增加，在所有獸用生物制品企業(yè)跨過農(nóng)業(yè)部GMP門檻后，產(chǎn)品品質的提升成為企業(yè)關注的重點。近年來，禽用活疫苗污染REV、ALV等蛋傳外源病毒的現(xiàn)象時有發(fā)生，企業(yè)在進行疫苗外源病毒質量控制的過程中逐漸將關注點聚焦到制備禽用活疫苗的主要原材料SPF種蛋的純凈性方面。對于SPF雞的微生物質量控制，世界各國根據(jù)不同國情都制訂了相應的標準。

1 SPF雞的質量標準

1.1 國內外標準

SPF雞是指飼養(yǎng)于屏障系統(tǒng)或隔離系統(tǒng)等可控環(huán)境中，無國內外(尤其是國內)流行的雞主要傳染病，具有良好的生長和繁殖性能的雞群。根據(jù)疫病的流行情況、危害程度、控制難度及檢測水平，不同國家在不同時期對特定病原的含義(即SPF雞的質量標準)也在不斷的發(fā)展和完善，如SPAFAS公司最初只檢測9個項目，而目前最多檢測31個項目。

國家質量技術監(jiān)督局1999年11月10日頒布中國SPF雞國家標準，并從2000年4月1日起實施(該標準2008年修訂，2009年5月1日起實施修訂版)，標準共 10個，即 GB/T 17998-2008、GB/T 17999.1-2008、GB/T 17999.2-2008、GB/T 17999.3-2008、GB/T 17999.4-2008、GB/T 17999.5-2008、GB/T 17999.6-2008、 GB/T 17999.7-2008、 GB/T 17999.8-2008、GB/T 17999.9-2008)，標準規(guī)定：我國SPF雞應不含19種病原微生物，包括禽腺病毒、產(chǎn)蛋下降綜合癥、禽腦脊髓炎病毒、禽流感病毒、多殺性巴氏桿菌、禽呼腸孤病毒、禽白血病、禽貧血病毒、雞痘病毒、雞副嗜血桿菌、傳染性支氣管炎病毒、傳染性法氏囊病病毒、傳染性喉氣管炎病毒、雞馬立克氏病病毒、雞敗血支原體、雞滑液囊支原體、雞新城疫病毒、網(wǎng)狀內皮增生癥病毒、雞白痢沙門氏菌。

國外主要控制16種病原微生物，即1種細菌(雞白痢沙門氏菌)，2種支原體(雞敗血支原體、雞滑液囊支原體)和13種病毒(禽腺病毒、產(chǎn)蛋下降綜合癥、禽腦脊髓炎病毒、禽流感病毒、禽呼腸孤病毒、禽白血病、雞痘病毒、傳染性支氣管炎病毒、傳染性法氏囊病病毒、傳染性喉氣管炎病毒、雞馬立克氏病病毒、雞新城疫病毒、網(wǎng)狀內皮增生癥病毒)［1］。

SPF雞的微生物控制種類，沒有國際統(tǒng)一的標準，但有國際共識，每個國家根據(jù)自己的實際情況確定需要控制的病原微生物種類。各國標準不僅數(shù)量不同(美國21種、法國16種、日本22種、澳大利亞16種、歐洲19種)，而且檢測項目也不完全一致。目前國際上公認的標準是 USDA和歐洲藥典(EPC)。我國的SPF雞微生物質量標準主要是參照美、日、澳的標準，并結合我國雞病流行的實際情況而制定的，從疫病監(jiān)測的項目來看，介于美國SPAFAS公司的標準蛋和保險蛋之間，從疫病檢測的微生物種類來看，中國的SPF雞微生物質量標準已完全接近國際水平。

1.2 我們的看法

中國的SPF雞國家標準規(guī)定不含19種病原微生物，2010版《中國獸藥典》(三部)附錄《外源病毒檢驗法》規(guī)定，采用雞檢驗法檢測的病毒血清抗體有12種，可以看出現(xiàn)行的SPF雞質量標準應該能夠滿足活疫苗純凈性和檢驗動物易感性的要求。但從我們檢測國內SPF種蛋情況看，部分SPF雞場提供的SPF種蛋出現(xiàn)禽呼腸孤病毒、禽腦脊髓炎病毒、雞白痢沙門氏菌卵黃抗體陽性。說明盡管有與國際接軌的SPF雞微生物質量控制標準，但SPF雞微生物控制實際狀況并不樂觀。這就迫使獸用生物制品企業(yè)去研究檢測SPF種蛋中病毒卵黃抗體的方法來監(jiān)測SPF種蛋質量。另國外盡管存在禽貧血病毒(CAV)感染現(xiàn)象，但是美國、法國等一些國家未將其列入國標，而是單列，例如美國和歐盟允許雞場根據(jù)實際情況，提出自己的企業(yè)標準。如美國SPAFAS公司將SPF種蛋分為三個等級：標準蛋、保險蛋和研究蛋。標準蛋(standard egg)檢測21個項目，主要用于美國國內疫苗的生產(chǎn)；保險蛋(prem ium egg)檢測28個項目，主要用于出口；研究蛋(research egg)檢測31個項目，主要用于特殊疫病的科學研究［2］，這樣也提示在中國是否可以根據(jù)SPF雞不同用途單列一些檢測項目達到既降低檢測成本又具有標準的實際可操作性。

1.3 建議

1.3.1 鑒于SPF雞檢測種類越多，成本越高，參照發(fā)達國家的做法，建立切實可行的針對SPF雞的最低國家標準，根據(jù)不同的使用對象，提出不同的檢測標準和要求。

1.3.2 對SPF種蛋實行分級制度，滿足不同層次SPF種蛋的需求。在簽訂 SPF種蛋供應合同時，明確列出 SPF種蛋控制的病原微生物種類及檢測方法和結果，讓使用者心中有數(shù)；

1.3.3 建立SPF種蛋質量控制行業(yè)標準，可以先從市場反應較大，嚴重威脅禽用活疫苗安全性的主要蛋傳病毒REV、ALV、REO、CAV等入手，建立相應的標準及監(jiān)督運行機制，通過獸用生物制品企業(yè)的原材料質量控制手段對SPF雞場提供的SPF雞及種蛋進行監(jiān)控。

2 SPF雞檢測

2.1 檢測時間與方法

從理論上講SPF雞群被病原微生物污染的可能性隨時存在。需要每天都監(jiān)測才能保證原則上認可的質量控制，但這在實際操作中是不可能做到的。現(xiàn)行國家標準規(guī)定的監(jiān)測周期是根據(jù)經(jīng)濟成本、病原微生物感染擴散所需要的時間、容易檢出的最佳時間、在SPF雞微生物控制中的重要性等諸多方面因素綜合確定的。［3］SPF雞場也會根據(jù)各自實際情況制定高于國家標準的監(jiān)測周期，特別對于REV、ALV、REO、CAV等幾種主要蛋傳微生物的檢測。

我國標準規(guī)定：開產(chǎn)前進行100%取樣檢測，產(chǎn)蛋期，每隔4～8周，按照雞群數(shù)量的5% ～15%抽樣，檢測國家標準規(guī)定的所有項目。

SPF雞微生物檢測方法多采用血清學方法進行，主要是因為：雞的血清學檢測方法簡單，容易進行，準確性高。SPF雞微生物檢測方法有近10種，最常用的有：瓊脂擴散試驗(AGP)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)、血清中和試驗(SN)、血凝抑制試驗(HI)、平板凝集試驗(SPA)等［2］。

我們比較了中國與美國、日本、澳大利亞、法國等國家的檢測項目，基本一致。血清學方法在特異性上應該有保證，但在靈敏度方面較之病原的直接分離有差別，但因為特異性遠較靈敏性重要，假陽性的存在嚴重干擾對SPF雞群的質量認定，所以血清學檢測成為國家標準首選的檢測方法，也為SPF雞場所接受。

2.2 我們的看法

從獸用生物制品企業(yè)的角度，我們認為血清學抗體檢測的目的最終為SPF雞是否污染微生物提供依據(jù)，而我們最關注的是SPF種蛋是否直接攜帶病原微生物，因此對于養(yǎng)殖業(yè)危害比較大、影響活疫苗純凈性的主要病原微生物，僅僅采用血清學檢測方法來判斷SPF雞的微生物攜帶狀況是不夠的，應采取定期棉拭子采樣、病毒分離的方法來提高針對SPF雞攜帶病原微生物的檢測靈敏度。目前還沒有國家指定的SPF雞權威檢測機構，由于檢測試劑的缺乏，能夠按照國標進行檢測的雞場也只有少數(shù)幾家，而且都是自檢，各個雞場的檢測項目、檢測試劑、檢測方法、檢測周期也不一致［4］。部分 SPF雞場檢測項目少，檢測頻率低，甚至有的不具備檢測能力，只好委托代檢。而由于 SPF雞場的管理要求及屏障系統(tǒng)導致采樣困難等因素，第三方檢測機構的監(jiān)督檢驗缺失。以上因素致使SPF雞及種蛋質量良莠不齊，對獸用生物制品的生產(chǎn)和檢驗構成威脅。

2.3 建議

2.3.1 盡快建立我國 SPF雞權威檢測機構，按照SPF雞國家標準，不定期地對全國 SPF雞場進行質量抽檢，抽樣應具體到雞舍，既要抽檢血清 ，也要抽檢種蛋，定期公布抽檢結果，確保SPF雞胚的質量。SPF雞場售出的SPF種蛋，要附有權威檢測單位提供的檢驗報告；

2.3.2 針對網(wǎng)狀內皮組織增生病毒、禽白血病毒、禽呼腸孤病毒、禽腦脊髓炎病毒、雞白痢沙門氏菌等垂直傳播的重點病原微生物，組織高校、科研單位及獸用生物制品企業(yè)聯(lián)合研制針對病原檢測的快速方法，并制定行業(yè)標準，提高 SPF雞微生物檢測的靈敏度；

2.3.3 加快SPF雞微生物檢測試劑和標準品的研制和供應，研究國產(chǎn)替代品，解決檢測試劑、標準品完全依賴進口的問題；

2.3.4 根據(jù)乾元浩南京SPF雞場的檢測實踐，建議制定高于國家標準的檢測周期和抽樣量，1月齡、2月齡和3月齡按照雞群數(shù)量的5%取樣預檢，4月齡對備用雞群的每一只雞采集血樣進行100%檢測，100%檢測以后，每周按照雞群的1%抽檢進行血清學檢測，每月按照雞群的5%抽檢血檢，除周檢檢測部分重點監(jiān)控項目(從19個檢測項目中挑選數(shù)個)外，其余都檢測19個項目，周檢可以由自己完成，但是月檢和100%檢測，必須向國家指定檢測單位按照雞群數(shù)量的2%提供血樣。

3 國內SPF種蛋的來源及供應情況

3.1 現(xiàn)狀

1959年美國農(nóng)業(yè)部地區(qū)家禽研究所建立全球第一個SPF雞群，1961年世界上第一家商業(yè)性SPF雞生產(chǎn)企業(yè)—美國SPAFAS公司成立，1961年英國Houghton家禽研究所建立SPF雞群(ALV FREE)，七十年代荷蘭INTERVET、法國MERIEUX、澳大利亞CSIRO、日本相繼建立了SPF雞群。目前世界上生產(chǎn)SPF種蛋的3大巨頭分別是美國 SPAFAS公司，美國SUNRISE公司和德國LOHMANN公司。美國SPAFAS公司是目前世界上最大的SPF種蛋供應商，擁有Line22(30多年歷史)和Bx(10多年歷史)兩種品系，現(xiàn)有11個雞場，36個雞舍，每個雞舍月飼養(yǎng)4000-8000只母雞，2009年生產(chǎn)3660萬枚SPF種蛋(其中美國 Illinois供應 2100萬枚、美國Connecticut供應 990萬枚、歐洲 Hungary供應 570萬枚)，銷往全球40多個國家。

我國SPF雞群的飼養(yǎng)，開始于20世紀80年代。山東省家禽研究所1984年建立 SPF雞舍，1985年引進美國SPF種蛋，成功地培育出我國第一個SPF雞群。中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所1987年建立SPF雞舍，1988年引進德國羅曼公司 SPF種蛋，成功建立300只雞的SPF雞群。90年代以后，乾元浩、哈獸研、濟南斯帕法斯、遼寧益康、黑一廠等多家單位先后建立了具有一定生產(chǎn)規(guī)模的SPF雞群。

為了規(guī)范SPF雞胚生產(chǎn)，確保 SPF雞胚質量，國家加強了對SPF雞場的管理，2007年2月發(fā)布了《獸藥生產(chǎn)、檢驗用SPF雞(蛋)定點生產(chǎn)企業(yè)管理辦法》(征求意見稿)和《獸藥生產(chǎn)、檢驗用 SPF雞(蛋)定點生產(chǎn)企業(yè)檢查驗收評定標準》，該標準共73條，全面系統(tǒng)地規(guī)范了SPF雞的飼養(yǎng)管理。

截止2009年底，全國有17家SPF雞場通過驗收，獲得SPF雞生產(chǎn)許可證，2009年共生產(chǎn)SPF種蛋2396萬枚，2010年全國又新建5家SPF雞場，從設計產(chǎn)能看基本能夠滿足供應。

3.2 我們的看法

雖然國內SPF雞場的數(shù)量及產(chǎn)能能夠符合要求，但SPF種源的問題沒有得到根本解決，沒有穩(wěn)定可靠的SPF種源，SPF雞場從不同途徑引進SPF種蛋，通過檢測篩選合格的SPF雞，建立自己的核心種群。這樣的狀況令國內SPF種蛋質量難以得到有效保證，我國每年生產(chǎn)禽用活疫苗接近1000億羽份，禽用活疫苗的純凈性已經(jīng)受到養(yǎng)殖戶的高度關注，規(guī)?；瘓F用戶均高價使用進口活疫苗，SPF種蛋的質量狀況已經(jīng)成為國產(chǎn)活疫苗進入國內中高端市場的制約因素之一，如不能有效解決SPF種源問題，國產(chǎn)禽用活疫苗的發(fā)展前景堪憂。

3.3 建議

3.3.1 SPF種源問題應引起有關單位高度重視，近期需要通過引進國外優(yōu)質 SPF種蛋，建立國內的SPF種蛋供應基地來解決種源問題，中長期需要培育出中國自己的SPF種雞群，從而從根本上解決我國SPF雞的種源問題。

3.3.2 在SPF種蛋產(chǎn)大于銷的前提下，國家應加強對SPF雞場的驗收和管理，加大對SPF雞群抽檢，建立不合格的SPF雞場淘汰機制，樹立國產(chǎn)SPF雞及種蛋的公信制，使獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)能夠選擇到優(yōu)質SPF種蛋，養(yǎng)殖戶能夠使用放心安全的國產(chǎn)疫苗。

4 獸用生物制品企業(yè)對SPF種蛋的質量監(jiān)測情況

4.1 現(xiàn)狀

在許多國家，通常生產(chǎn)活疫苗使用SPF種蛋，生產(chǎn)滅活苗使用非免種蛋，但是滅活劑和滅活技術不能確保殺滅所有的病原微生物，同時滅活的病毒也有可能引發(fā)免疫反應，所以非免種蛋存在安全風險，美國所有禽用疫苗，無論活疫苗還是滅活苗，全部使用SPF種蛋生產(chǎn)。2000年版的《中華人民共和國獸用生物制品規(guī)程》明確規(guī)定：生產(chǎn)禽用活疫苗必須使用SPF雞胚。農(nóng)業(yè)部2006年11月22號下發(fā)的《關于加強獸用生物制品生產(chǎn)檢驗原料監(jiān)督管理的通知》規(guī)定：自2008年1月1日起，農(nóng)業(yè)部將對具備GMP資質疫苗生產(chǎn)企業(yè)的活疫苗生產(chǎn)使用無特定病原體(SPF級)雞胚情況進行全面監(jiān)督檢查，對達不到標準要求的，將根據(jù)《獸藥管理條例》規(guī)定進行處理。

為了確保禽用活疫苗的純凈性，部分獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)建立了自己的SPF雞場，通過有效的檢測手段，控制了 SPF種蛋污染病原微生物，確保禽用活疫苗的純凈性。但多數(shù)企業(yè)并不擁有自己的SPF雞場，除了在選擇SPF雞及種蛋供應商的初期能夠得到SPF雞血樣進行各種抗體檢測外，在使用過程中很難做到定期獲得血清監(jiān)測血清抗體，只能選擇相對穩(wěn)定的SPF種蛋供應來源，通過對SPF種蛋卵黃抗體、疫苗半成品、成品外源微生物的檢測監(jiān)控SPF雞外源微生物污染。如針對行業(yè)關注的主要蛋傳外源微生物，企業(yè)通常采用的方法是用ELISA試劑盒檢測SPF種蛋卵黃抗體，采用PCR、間接免疫熒光等方法檢測半成品病原，采用雞胚法、細胞法、動物法檢測成品。

4.2 我們的看法

按照國家制訂并發(fā)布的SPF雞微生物檢測標準嚴格執(zhí)行的SPF雞場，其種蛋質量應能保證無外源污染微生物，但實際上，疫苗中能夠檢測到的外源微生物絕大部分是由于SPF種蛋污染造成，這與我們SPF雞的種源、飼養(yǎng)管理、設施、質量監(jiān)測過程中存在的問題密切相關。在 SPF雞場——獸用生

物制品生產(chǎn)企業(yè)——養(yǎng)殖戶的供應鏈中，養(yǎng)殖戶除了國產(chǎn)活疫苗還可以選擇進口活疫苗，SPF雞場雖然真正能夠滿足19項外源微生物檢測全部合格要求的不多，但由于存在市場需求，SPF雞及種蛋仍然是供不應求，唯有獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)面對激烈的市場競爭，根據(jù)國家和養(yǎng)殖戶要求，為保證疫苗的純凈性，不得不在疫苗原材料質量控制及生產(chǎn)環(huán)節(jié)中建立諸多外源微生物內控質量標準，把本該SPF雞場控制的SPF種蛋外源微生物污染風險轉嫁到獸用生物制品生產(chǎn)企業(yè)自身，無形中增加了疫苗檢測的人力、物力和財力，削弱了國產(chǎn)禽用活疫苗的國際競爭力。

4.3 建議

4.3.1 行業(yè)主管單位將企業(yè)針對 SPF種蛋及疫苗產(chǎn)品外源微生物檢測結果作為對SPF雞場進行質量監(jiān)控的參考。同時鼓勵企業(yè)與科研單位合作將外源微生物檢測技術及企業(yè)的內控標準上升為行業(yè)標準，對SPF雞場實施有效的質量監(jiān)控；

4.3.2 建立SPF雞污染外源微生物質量追溯機制，促使SPF雞場自覺按照國家標準及要求做好 SPF雞質量檢測工作并承擔相應的責任。

［1］徐桓 .SPF雞群與疫苗生產(chǎn)［J］.中國獸藥雜志.2003，37 (4)：23-25.

［2］秦卓明，張世棟，金維江.對中國SPF雞監(jiān)測的建議［J］.中國家禽.2003，5(18)：6-9.

［3］趙繼勛，秦卓明，張秀美.淺析中國SPF雞微生物質量控制標準［J］.山東家禽.1996，2：3-7.

［4］程水生，陳洪巖，李昌文.關于我國SPF雞卵生產(chǎn)情況的調查報告［J］.中國預防獸醫(yī)學報.2006，28(5)：606-608.