全自動加樣儀的應(yīng)用

李 榮 龐麗麗 杜新鳳

（廣西玉林市中心血站，廣西 玉林537000）

全自動加樣儀的應(yīng)用

李 榮 龐麗麗 杜新鳳

（廣西玉林市中心血站，廣西 玉林537000）

全自動加樣儀；自動化；血液檢測

隨著人們對安全輸血問題的日益重視，采供血機(jī)構(gòu)的質(zhì)量保證工作已成為其關(guān)注焦點(diǎn)，全面質(zhì)量管理的理念使血液的質(zhì)量保證已不局限于對其最終的檢查，而依賴于對生產(chǎn)過程的每一個環(huán)節(jié)加以控制。自動化設(shè)備如全自動加樣儀解決了大量標(biāo)本加樣和數(shù)據(jù)傳輸?shù)膯栴}，通過實(shí)驗(yàn)室管理系統(tǒng)軟件與其他檢測設(shè)備連接，最終與局域網(wǎng)聯(lián)網(wǎng)，使操作過程標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化，大大減輕了工作人員的工作強(qiáng)度、降低職業(yè)暴露的機(jī)會并減少了人為誤差，提高了實(shí)驗(yàn)室檢測的準(zhǔn)確度和特異性，有效的保證血液檢測質(zhì)量。筆者根據(jù)實(shí)際工作經(jīng)驗(yàn)并參照有關(guān)文獻(xiàn)，從全自動加樣儀的概況、發(fā)展、應(yīng)用等方面加以綜述。

1 ELISA試驗(yàn)

盡管在20世紀(jì)90年代初期，由于以聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）技術(shù)為代表分子生物學(xué)水平技術(shù)的發(fā)明，人們紛紛預(yù)測，酶免試驗(yàn)將被更高靈敏度、數(shù)百萬級信號放大的、病原體水平檢測的核酸檢測（NAT）所取代。ELISA試驗(yàn)仍然是傳染病血清學(xué)標(biāo)志物（如肝炎、艾滋、致畸病原Torch）、腫瘤標(biāo)志物及內(nèi)分泌等各種臨床免疫指標(biāo)檢測的主導(dǎo)技術(shù)，它檢測的是免疫抗原或抗體，NAT檢測的是病毒核酸，兩個方法對同一份標(biāo)本的檢測是互補(bǔ)的[1]，NAT法雖然靈敏度更高，但據(jù)報道抗-HCV陽性而HCV核酸檢測陰性的血液亦能使受血者感染，也就是說NAT亦會有部分弱陽性標(biāo)本漏檢；HIV DNA測不出不能說明HIV感染已消失，因?yàn)镠IV還存在于人體的CD4淋巴細(xì)胞和其他細(xì)胞、組織、器官中，而且在停藥治療后HIV RNA水平還可能反彈，所以抗-HIV陽性（經(jīng)確證）在目前還是我國診斷HIV感染的主要指標(biāo)。我們應(yīng)當(dāng)充分利用兩種方法優(yōu)勢互補(bǔ)作用用于血液篩查，不能互相代替[2,3]。

全自動加樣儀與全自動酶免分析儀(后處理)——如瑞士Hamilton公司制造的FAME、Tecan公司生產(chǎn)的BEPⅢ等連接，這就是全自動酶免分析系統(tǒng)，實(shí)現(xiàn)了ELISA試驗(yàn)從標(biāo)本加樣、稀釋到酶標(biāo)孵育、洗板、加試劑、讀數(shù)和結(jié)果打印全自動。

2 病毒核酸檢測（NAT）

隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，輸血傳染病的檢測技術(shù)也在不斷進(jìn)步，如化學(xué)發(fā)光免疫法（CLIA）、NAT也逐步引進(jìn)和應(yīng)用。核酸檢測能大大縮短窗口期、避免病毒變異和免疫沉默性感染等造成的漏檢，在歐美等發(fā)達(dá)國家，NAT已成為常規(guī)血液篩查技術(shù)。我國自2000年起即已有人對獻(xiàn)血者HCV NAT篩查的必要性和可行性做了初步探討，現(xiàn)在國家也將NAT納入新的輸血技術(shù)操作規(guī)程，部分采供血機(jī)構(gòu)也開展一些病毒的核酸檢測。鑒于我國各地采供血機(jī)構(gòu)發(fā)展不平衡，在獻(xiàn)血者中全面推廣應(yīng)用NAT技術(shù)尚存在技術(shù)、資金等問題。但血液行業(yè)是一個特殊的行業(yè)，正如美國AABB出版的《新千年血液》所言：“極少有其他某個行業(yè)能夠像血液制品行業(yè)這樣，始終處于公眾、新聞媒體、乃至政府高官的密切關(guān)注之下。當(dāng)發(fā)生血液安全問題時，往往激發(fā)出極其獨(dú)特的情緒化反應(yīng)，其強(qiáng)度常超過其他更大的公共衛(wèi)生問題[4]?！蔽覈晒┭獧C(jī)構(gòu)實(shí)施HBV、HCV、和HIV病毒核酸檢測或許是發(fā)展方向，但有關(guān)技術(shù)問題如試劑的靈敏度和實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性、標(biāo)本匯集檢測的限度等還有待解決。

NAT血液篩查主要有單個樣品（ID-NAT）和多樣品匯集（MPNAT）兩種模式，目前大多采用多樣品匯集模式[5]，這是由我國的國情所決定。有研究[6]在已有加樣設(shè)備基礎(chǔ)上開發(fā)自動標(biāo)本匯集，在MPLC上進(jìn)行全自動核酸提取，最后在COBAS AMPLICOR上擴(kuò)增和檢測，實(shí)現(xiàn)從標(biāo)本準(zhǔn)備、核酸提取及擴(kuò)增和檢測一體化和自動化。

3 ALT檢測

對獻(xiàn)血者血液丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(alanine aminotrasferase，ALT)檢測的意義雖然存在很大的爭議，但ALT目前仍是我國采供血機(jī)構(gòu)獻(xiàn)血者必查項目之一?！东I(xiàn)血者健康檢查要求》[7]規(guī)定酮體粉法只限于ALT初檢使用，復(fù)檢必須用賴氏法或速率法。由于全自動生化分析儀價格昂貴還不能在中小血站普遍推廣，所以不能使用FICC推薦的速率法，多數(shù)還是采用賴氏試管法，操作煩瑣，費(fèi)工費(fèi)時，不適宜大批量標(biāo)本的檢測，而且無法對原始數(shù)據(jù)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)化管理。利用全自動加樣器加樣，結(jié)合微孔板、酶標(biāo)儀以及局域網(wǎng)從而實(shí)現(xiàn)ALT的自動化檢測。與傳統(tǒng)賴氏法比較，微孔板法可實(shí)現(xiàn)自動化，具有測量速度快、操作簡便的優(yōu)點(diǎn)，雖然由于標(biāo)本、試劑用量小容易出現(xiàn)誤差，且受脂肪血和溶血的影響較大[8]，但只要加以制，還是能滿足質(zhì)量要求?，F(xiàn)在多數(shù)中小血站都采用賴氏微孔板法檢測獻(xiàn)血者ALT。

4 血型自動化檢測

以前采供血機(jī)構(gòu)實(shí)驗(yàn)室多使用手工法玻片（紙板）法或試管法作ABO正反定型和RhD血型篩查，操作煩瑣，每天大量的標(biāo)本做得手酸眼花，錯型、誤報等差錯時有發(fā)生。利用全自加樣儀處理樣本，用微孔板法對獻(xiàn)血者血液樣本進(jìn)行ABO及RhD血型篩查，血液標(biāo)本、試劑紅細(xì)胞、標(biāo)準(zhǔn)血清等均由全自動加樣儀完成，即便是用人工判讀結(jié)果，也減少了大量煩瑣的手工操作，實(shí)現(xiàn)血型檢測的自動化；由于全自動加樣儀加樣精度高，保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性，實(shí)現(xiàn)了血型檢測的標(biāo)準(zhǔn)化[9]。如果再配以全自動血型分析儀（如國產(chǎn)愛康智能血型分析儀），利用其判讀系統(tǒng)所具有的自動讀取自動加樣儀生成的條碼，并有影像記錄，保存原始數(shù)據(jù)，便于查詢和溯源；通過局域網(wǎng)自動發(fā)布結(jié)果，實(shí)現(xiàn)了血型檢測的數(shù)字化和規(guī)范化，避免人為因素對血型檢測結(jié)果的影響，提高工作質(zhì)量，并可減輕勞動強(qiáng)度，提高工作效率，還可大量節(jié)約試劑[10]，尤其適合采供血機(jī)構(gòu)大批量標(biāo)本血型篩查。有關(guān)權(quán)威人士認(rèn)為[11]，自動化檢測可檢出ABO亞型及相應(yīng)鹽水不規(guī)則抗體，從而保障輸血的安全性和有效性，但微孔板的自動判讀與肉眼判斷結(jié)合還是必須的，特別是亞型。

5 標(biāo)本留樣存檔

我國《血站管理辦法》第三十一條規(guī)定：血清（漿）標(biāo)本的保存期應(yīng)在血液使用后2年。一般血站保存的血樣為血袋小辮，先離心后熱合，由于小辮軟而不直，即使充分離心，仍有血樣中紅細(xì)胞不能完全下沉的現(xiàn)象，致使保存的血漿辮中混雜紅細(xì)胞，冷凍后溶血，影響標(biāo)本質(zhì)量。采用保存板（Archive plare，孔深35mm，孔容量1.5mL）結(jié)合全自動加樣儀和條形碼技術(shù)留取血樣（血清/漿），通過電腦記錄留樣信息并生成詳細(xì)的留樣文件，使血樣保存板和加樣文件形成一一對應(yīng)的關(guān)系，確保留樣的準(zhǔn)確、可靠，便于查找，具有簡單快捷、效率高且質(zhì)量好、保存量大的特點(diǎn)[12,13]。更重要的是微板留樣確保檢測標(biāo)本與留樣標(biāo)本一致，對實(shí)驗(yàn)室來說是一種有效的自我保護(hù)。但有報道[14]微板留樣會造成弱陽性標(biāo)本OD值顯著下降，因此在微板留樣的同時不能舍棄血袋上的小辮標(biāo)本。

6 其 他

DNA純化、PCR加樣、DNA測序加樣、克隆快速篩選分配、藥物篩選自動分配、梅毒凝集實(shí)驗(yàn)等。

發(fā)展到今天的全自動加樣儀其功能越來越功能強(qiáng)大，能滿足醫(yī)院和采供血機(jī)構(gòu)的不同需求，可使用96孔板、384孔板、120孔血型板或非標(biāo)準(zhǔn)微板、試管、試紙等。完全可以有理由相信，全自動加樣儀以其高度智能化和自動化的特點(diǎn)，將在現(xiàn)代實(shí)驗(yàn)室得到更廣泛應(yīng)用。

[1]吳劍媚,張慶武.核酸檢測技術(shù)在血液病毒篩查中的應(yīng)用[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2008,10(1):86-90.

[2]徐明忠,王赤林.抗-HCV陽性反應(yīng)血清的HCV核酸檢測分析[J].中國輸血雜志,2006,19(5):393-394.

[3]季陽,鄭忠偉,蔡輝,等.病毒血清學(xué)檢測與核酸檢測技術(shù)在輸血傳染病篩查中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2010,23(6):413-416.

[4]任芙蓉.實(shí)施血液病毒核酸檢測策略的相關(guān)問題探討[J].中國輸血雜志,2010,23(1):1-3.

[5]蔣昵真,黃成垠,肖建宇,等.獻(xiàn)血者HBV、HCV、HIV的單人份核酸檢測[J].臨床輸血與檢驗(yàn),2010,12(3):208-210.

[6]葉賢林,周一炎,楊立新,等.血液HBV DNA全自動檢測及基因分型分析[J].中國輸血雜志,2005,18(2):94-96.

[7]中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)《獻(xiàn)者健康檢查要求》,GB18467-2001[S].2001.

[8]陳惠民,吳麗惠.丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶3種方法檢測結(jié)果比較[J].中國輸血雜志,2007,20(56):382-383.

[9]趙樹銘,張循善.關(guān)于紅細(xì)胞ABO血型鑒定規(guī)范化的思考及建議[J].中國輸血雜志,2009,22(6):431-433.

[10]王福成,施之雍,蔡雋,等.梯形微板技術(shù)在ABO血型檢測中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2007,20(1):53-54.

[11]周筱嫣,向東,徐忠,等.ABO血型自動化檢測[J].中國輸血雜志,2010,23(3):205-206.

[12]潘海平,吳玉清,趙林.應(yīng)用全自動加樣儀留取血樣的探討[J].中國輸血雜志,2007,20(2):142-143.

[13]曹慶宏,王子成,朱廣亮,等.保存板在保存血樣中的應(yīng)用[J].中國輸血雜志,2001,14(6):374.

[14]王旭安,方昌志,簡雪平,等.保存后的微板留樣血液檢測結(jié)果分析.中國輸血雜志,2010,23(4):304.

R-03

A

1671-8194（2011）20-0171-03