川芎的有效成分鑒別與含量標(biāo)準(zhǔn)研究

趙文萃 康雪萊

（1 吉林省長(zhǎng)春市第二○八醫(yī)院藥劑科，吉林 長(zhǎng)春 130061；2 北京軍區(qū)北戴河療養(yǎng)院，河北 北戴河 066100）

川芎是傘形科植物的干燥根莖，主要具有行氣活血和祛風(fēng)止痛兩大功效，為活血化瘀的一種常用中藥[1]。在國(guó)內(nèi)外，關(guān)于該藥材的化學(xué)成分研究的報(bào)道有很多，結(jié)合該藥材的主要成分的藥理學(xué)的相關(guān)研究結(jié)果，有專(zhuān)家認(rèn)為該藥物的主要有效成分為藁本內(nèi)酯和阿魏酸[2]。為了對(duì)中藥川芎的有效成分進(jìn)行鑒別，并對(duì)相應(yīng)的含量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行系統(tǒng)的研究，為今后對(duì)該藥材進(jìn)行更加準(zhǔn)確的質(zhì)量控制，是該藥材的臨床應(yīng)用更加合理、準(zhǔn)確，避免出現(xiàn)不合理用藥現(xiàn)象，使患者的疾病能夠在最短的時(shí)間內(nèi)得到最有效的控制，提供一些比較有參考價(jià)值的資料，我們進(jìn)行了本次研究。在研究的整個(gè)過(guò)程中，我們抽取中藥川芎作為研究樣品，采用TLC法對(duì)川芎中的主要成分進(jìn)行鑒別，并采用HPLC法對(duì)其有效成分物質(zhì)的具體含量進(jìn)行測(cè)定?，F(xiàn)將具體研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

以中藥川芎為研究對(duì)象。

1.2 儀器和試劑

采用我院現(xiàn)有的高效液相色譜儀，甲醇純度為色譜純，水為純凈水，其他試劑的純度均為分析純。

1.3 方法

對(duì)抽取的中藥川芎楊平采用TLC法對(duì)川芎中的主要成分進(jìn)行鑒別，并采用HPLC法對(duì)其有效成分物質(zhì)的具體含量進(jìn)行測(cè)定。

1.3.1 藁本內(nèi)酯的含量測(cè)定

將濃度比為70∶30的甲醇：水溶液作為流動(dòng)相; 檢測(cè)波長(zhǎng)控制在240nm左右；流速應(yīng)控制愛(ài)0.9mL/min左右[3]。在上述色譜條件下，精稱適量藁本內(nèi)酯對(duì)照品，加甲醇配成19.814μg/mL的溶液，進(jìn)樣量分別為2、4、6、8、10、12μL，重復(fù)2次，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。精吸川芎樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣5次，進(jìn)行精密度試驗(yàn)，藁本內(nèi)酯峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差控制在0.4%左右[4]。不同的提取溶劑比較: 取川芎0.5g，制成粉末，共取8份，精稱，精密加入甲醇、乙醇、乙酸乙酯、氯仿各25mL，進(jìn)行稱重處理，超聲狀態(tài)下提取10min左右，放涼并進(jìn)行稱重，濾過(guò)；取10mL的續(xù)濾液，進(jìn)行減壓濃縮處理，用甲醇將殘留物洗出，定容至25mL。不同提取方法的比較: 取川芎0.5g制成粉末，精稱，共取7份，精密加入甲醇各25mL，進(jìn)行稱重處理，分別以冷浸狀態(tài)下放置3、6、9h和超聲狀態(tài)下進(jìn)行5、10、20、30min提取處理后，放冷并進(jìn)行稱重處理，搖勻后濾過(guò)，取續(xù)濾液經(jīng)過(guò)微膜，注入液相色譜儀進(jìn)行測(cè)定。穩(wěn)定性試驗(yàn): 精吸川芎試品20μL，分別在0、2、4、6、8、10、12、24h的時(shí)候進(jìn)樣，依法進(jìn)行測(cè)定。

1.3.2 阿魏酸含量測(cè)定

以濃度比為35∶65甲醇-1%乙酸容易作為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)控制在321nm左右；流速控制在0.9mL/min左右；柱溫控制在25攝氏度左右[5]。精稱阿魏酸對(duì)照品5.08mg，用甲醇將其定容至50mL，吸取1、3、5、7、9μL后將其分別注入到液相色譜儀中，重復(fù)進(jìn)樣2次，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算回歸方程。精吸川芎的樣品溶液，重復(fù)進(jìn)樣處理5次，阿魏酸峰面積積分值的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.50 %[6]。提取溶劑的選擇方法: 精稱0.5g川芎制成粉末，共制10份，精密加入甲醇、乙醇、三氯甲烷、乙酸乙酯，甲醇與濃度為1 %乙酸的混合溶液各20mL，進(jìn)行稱重處理，在超聲狀態(tài)下提取10min左右，放涼后進(jìn)行稱重并濾過(guò)；精取10mL續(xù)濾液進(jìn)行減壓濃縮處理，用甲醇將殘留物洗出，定容至10mL。提取方法的選擇方法：精稱川芎制成粉末，共制6份，精密加入甲醇各20mL，稱重，在超聲狀態(tài)下分別處理5、10、20、30min左右和冷浸12、24h 后進(jìn)行提取，放冷后進(jìn)行稱重并濾過(guò)，取續(xù)濾液過(guò)微孔濾膜，進(jìn)行液相的相關(guān)測(cè)定。穩(wěn)定性試驗(yàn)：精吸10μL川芎試品溶液，分別在0、2、4、6、8、10、12、24h的時(shí)候進(jìn)樣，依法進(jìn)行相關(guān)測(cè)定。由峰面積積分值統(tǒng)計(jì)結(jié)果可見(jiàn)，川芎溶液在24h內(nèi)能夠保持穩(wěn)定，RSD=1.07 %。

2 結(jié) 果

研究結(jié)果顯示，中藥川芎的主要有效成分為藁本內(nèi)酯和阿魏酸，這兩種有效成分物質(zhì)在該藥材內(nèi)的含量分別在1.5%和0.05%以上。

3 討 論

中藥川芎中主要含有酚酸、生物堿、內(nèi)酯和揮發(fā)油等多類(lèi)有效成分，相關(guān)文獻(xiàn)中常報(bào)道用液相色譜-紫外檢測(cè)法、液相色譜-質(zhì)譜法、毛細(xì)管電泳-紫外檢測(cè)法和氣相色譜-質(zhì)譜法等的方法對(duì)其有效成分進(jìn)行測(cè)定。上述幾種方法為對(duì)川芎的質(zhì)量進(jìn)行嚴(yán)格控制作出了十分重要的貢獻(xiàn)，且具有良好的發(fā)展前景和空間。

對(duì)中藥川芎的主要有效成分和相應(yīng)的含量進(jìn)行充分了解，可以保證今后的在臨床上對(duì)該藥物進(jìn)行更加合理更加準(zhǔn)確的應(yīng)用，避免出現(xiàn)不合理用藥現(xiàn)象，使患者的病情在最短的時(shí)間內(nèi)能夠得到最有效的治療。采用TCL法對(duì)中藥有效成分進(jìn)行鑒別具有著很強(qiáng)的專(zhuān)屬性，且具有精密度高、重現(xiàn)性好等特點(diǎn)。

[1] 石力夫,鄧延昭,吳柏生.川芎干燥根莖揮發(fā)油化學(xué)成分及其穩(wěn)定性的研究[J].藥物分析雜志,2005,12(3):318-319.

[2] 曹建敏,王宗花,孫廣平,等.川芎中內(nèi)酯類(lèi)化學(xué)成分的提取與溶劑萃取分離方法研究[J].分析試驗(yàn)室,2005,14(9):528-529.

[3] 鄭春松,葉蕻芝,劉獻(xiàn)祥,等.藥對(duì)川芎-白芍與其單味藥揮發(fā)油的衰減全反射-傅里葉變換紅外光譜指紋圖譜研究[J].中國(guó)臨床藥理學(xué)與治療學(xué),2009,15(6):342-343.

[4] 楊光明,蔡寶昌,潘揚(yáng),等.川芎藥材指紋圖譜研究與產(chǎn)地比較(Ⅰ)[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,21(3):387-388.

[5] 曾志,謝潤(rùn)乾,譚麗賢,等.川芎水蒸氣蒸餾和超臨界CO2提取物化學(xué)成分的GC-MS分析鑒別[J].應(yīng)用化學(xué),2011,11(8):168-169.

[6] 蔡寶昌,潘揚(yáng),王天山,等.中藥川芎指紋圖譜共有模式的建立及其在藥材質(zhì)量控制中的應(yīng)用[J].世界科學(xué)技術(shù),2007,14(6):294-295.