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    附紅細(xì)胞體病研究進(jìn)展

    2011-02-10 17:04:50李陸梅黨啟峰王樹杰
    中國動物檢疫 2011年7期
    關(guān)鍵詞:體病紅細(xì)胞動物

    鄒 蘭,鄒 敏,李陸梅,黨啟峰,王樹杰

    (1.新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)農(nóng)八師143團(tuán)農(nóng)業(yè)科,新疆 石河子 832021;2.青島易邦生物工程有限公司,山東 青島 266032;3.新疆西部牧業(yè)股份有限公司,新疆 石河子 832000)

    附紅細(xì)胞體病(Eperythrogoonosis)是由附紅細(xì)胞體(Eperythrozoon)寄生于人和動物的紅細(xì)胞表面、血漿、組織液和脊髓中,引發(fā)的以發(fā)熱、黃疸性貧血、呼吸困難為主要特征引起一種傳染性人畜共患傳染病[1-2]。國內(nèi)外曾有人稱之為黃疸性貧血、類邊蟲病、赤獸體病或紅皮病。本病多發(fā)于夏秋季節(jié),感染率和發(fā)病率均較高,目前世界上已有30多個(gè)國家和地區(qū)有關(guān)于本病的報(bào)道,我國是目前附紅細(xì)胞體病流行最為嚴(yán)重的國家之一[3]。目前,該病已對世界范圍內(nèi)的畜牧業(yè)發(fā)展及人類健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅,是一種急待控制的疫病之一?,F(xiàn)就本病的病原學(xué)、流行病學(xué)、診斷學(xué)以及現(xiàn)存的學(xué)術(shù)爭論綜述如下。

    1 概述

    1.1 病原學(xué)

    根據(jù)《伯杰氏細(xì)菌鑒定手冊》第8版將附紅體列入立克次氏體目(Rickettsiaies)、無形體科(Anoplasmataceae)、血蟲體屬也稱附紅細(xì)胞體屬(Eperythrozoon)[4]。按照宿主的不同附紅細(xì)胞體可分為14種,具有致病性的主要有豬附紅體(E.suis)、綿羊附紅體(E.ovis)和人附紅體(E.humanus)等少數(shù)幾種[5],病原具有嚴(yán)格的種特異性。附紅體為多形態(tài)單細(xì)胞、無明顯細(xì)胞器和胞核結(jié)構(gòu)的原生體;革蘭氏染色陰性,吉姆薩氏染色呈淡紅或淡紫色;外觀呈大、小球體,且小球體與大球體相連,或呈鏈狀、足掌狀、葫蘆狀,直徑0.3~1.5 μ m,厚約10nm,中心凹陷。人附紅細(xì)胞體的形態(tài)多變呈球狀、啞鈴狀、卵圓狀、星狀等,并呈各種扭動狀態(tài),直徑為0.3~0.8 μ m。豬附紅細(xì)胞體較大,呈圓形—卵圓形,其表面包被有一層膜,平均直徑為0.2~2 μ m,單獨(dú)或成鏈狀附著于紅細(xì)胞表面。感染機(jī)體后,在紅細(xì)胞上以二分裂及出芽分裂法增殖。附紅細(xì)胞體對化學(xué)藥品及干燥的抵抗力弱,一般的堿性消毒藥幾分鐘即可殺死。在酸性溶液中活力明顯增強(qiáng),但遇碘液即停止運(yùn)動,并不著色,在臨床上具有鑒別診斷意義。加熱60℃、30min,即可使附紅體失去致病活性。低溫冷凍情況下,可存活數(shù)年之久,這在本病的傳播上有重要意義。研究表明動物及人患附紅體病治愈后數(shù)年內(nèi)繼續(xù)呈隱性感染狀態(tài),甚至終生攜帶。

    1.2 疫病史及分布

    附紅細(xì)胞體最早由Schilling[6]于1928年在嚙齒類動物體內(nèi)查到類球狀血蟲體(E.coccoides)。1937年Neitz等[7]在綿羊紅細(xì)胞上或在其周圍發(fā)現(xiàn)有多形態(tài)的微生物寄生,命名為綿羊附紅體(E.ovis)。1950年Splitter[8]首次在豬身上發(fā)現(xiàn)了由這種微生物引起的疾病。1986年,Puntaric等[9]正式描述了人類的附紅體病。到現(xiàn)在本病已遍布世界五大洲共27個(gè)國家。我國對此病的研究較晚,直至1981年以后才相繼報(bào)道在畜、禽中發(fā)現(xiàn)附紅體病[10]。1991年,內(nèi)蒙古自治區(qū)邰秀珍等[11]在國內(nèi)首次報(bào)告人的附紅體病病例。1993年由我國衛(wèi)生部組織的相關(guān)流行病學(xué)研究證實(shí)了附紅體病在人群中的感染。2003年我國農(nóng)業(yè)部組織的全國豬附紅細(xì)胞體病流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),該病在我國主要養(yǎng)豬省份均有分布,并在一些地區(qū)呈地方性流行,但死亡率較低。

    1.3 致病性

    附紅細(xì)胞體病是由多種因素引起的條件性疫病,只有當(dāng)動物或人體內(nèi)的附紅細(xì)胞體達(dá)到一定數(shù)量,機(jī)體抵抗力下降或處于應(yīng)激狀態(tài)(生理性或病理性的)時(shí)發(fā)病。摘除脾臟、幼齡、高齡、免疫功能發(fā)育不全及減退的動物,附紅體的感染率、發(fā)病率高?;颊弑冉】等巳焊腥韭曙@著增高;應(yīng)用免疫抑制劑治療者,附紅體感染均較嚴(yán)重。附紅體的發(fā)病機(jī)制是復(fù)雜的、多方面的,迄今尚不清楚。推測既有繁殖侵襲性的,也有毒素代謝性的,還有免疫遺傳、免疫缺陷及自身免疫性的。

    1.4 疫病危害

    附紅細(xì)胞體感染人或動物以后,多呈隱性經(jīng)過,當(dāng)機(jī)體抵抗力下降、體內(nèi)附紅體達(dá)到一定數(shù)量后導(dǎo)致發(fā)病。本病可通過水平方式、垂直方式傳播。病原可通過器械、生物制品和蚊蟲叮咬傳播,從而在動物間或人群中造成大面積感染,一旦發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)、機(jī)體免疫力降低便會在人群或動物中引起暴發(fā)。該病易與豬瘟、豬流感、藍(lán)耳病等動物疫病并發(fā)或繼發(fā),容易引起誤診或漏診,引起死亡。動物一旦發(fā)生附紅體病,可導(dǎo)致生產(chǎn)能力下降,乳、肉產(chǎn)量減少,生長發(fā)育受阻,母畜流產(chǎn)、早產(chǎn)或死胎,嚴(yán)重時(shí)引起死亡。隱性感染動物長期帶毒、耐過動物長期甚至終生散毒是本病難以控制的主要原因。近年來,該病的感染率、發(fā)病率及死亡率逐年上升,給我國的畜牧業(yè)發(fā)展、公共衛(wèi)生安全帶來了巨大的損失和危害。

    2 診斷及預(yù)防

    2.1 流行病學(xué)特征

    病人、病畜以及耐過者的分泌物、排泄物及體液都是本病的重要傳染源。主要傳播方式包括:被污染的針頭、剪刀、手術(shù)器械、保定器械,吸血的節(jié)肢動物如血虱、疥螨、蚊蠅等,胎盤感染垂直傳染,血液、體液,耐過的帶菌動物。易感動物有豬、牛、羊、雞、驢、犬、馬、狐、兔、馬、鼠、人等 14 種[5]。其中以豬、牛、羊、犬、兔、鼠和人發(fā)病較多。附紅體具有嚴(yán)格的種特異性,不同種動物間一般不會相互感染。該病的發(fā)生具有季節(jié)性,夏秋季發(fā)病較多,多呈地方流行性。以豬為例,將感染豬引入易感群是本病發(fā)生的主要原因,不同日齡、品種的豬均可感染此病,仔豬、育肥豬和懷孕母豬最易感,哺乳仔豬的發(fā)病率和死亡率可達(dá)80%~90%,其他豬多為隱性感染。季節(jié)變化及長途運(yùn)輸?shù)葘?dǎo)致的應(yīng)激反應(yīng)、過度疲勞、缺乏營養(yǎng)、伴發(fā)或繼發(fā)其他疾病和寄生蟲病引起機(jī)體免疫力下降等都是引發(fā)本病的原因之一。在診斷時(shí)應(yīng)對相關(guān)流行病學(xué)資料、流行病學(xué)因子進(jìn)行充分了解。

    2.2 臨床癥狀

    2.2.1 豬附紅體病 又稱“紅皮病”。臨床上以仔豬多發(fā),最早3日齡發(fā)病。常發(fā)生于斷奶后特別是閹割后幾周的仔豬。急性表現(xiàn)為41~42℃的高熱稽留,厭食或絕食,鼻鏡干燥無汗發(fā)熱甚至龜裂。病初眼結(jié)膜潮紅或蒼白,后期黃染,耳廓邊緣、尾部、四肢末斷、腹下、股內(nèi)側(cè)皮膚發(fā)暗紅色或青紫色,指壓不退色、肢斷溫度比身體中心的溫度低,尿黃,糞先稀后干,公豬尿鞘積尿,精神差。病程長的耳廓發(fā)生壞死變干或翻卷,個(gè)別豬只有咳嗽和氣喘現(xiàn)象。病豬最后臥地不起,衰竭死亡,一般病程1~14 d。急性不死一周后即轉(zhuǎn)為慢性,表現(xiàn)為消瘦,體重快速下降,但有飲欲,皮膚蒼白,有時(shí)有不規(guī)則淤斑,可視黏膜發(fā)黃、蒼白、生長發(fā)育不良料重比增加。育肥豬主要表現(xiàn)為高熱稽留42℃,頑固性厭食,皮膚發(fā)紅,后期發(fā)紫,1周左右很快消瘦,貧血,若無其它病原感染,死亡率不高。懷孕母豬整個(gè)懷孕期都有可能感染,急性感染后的母豬發(fā)燒至42℃,厭食、糞便干燥、乳房和陰戶水腫持續(xù)1~3 d,產(chǎn)后缺奶,母性較差,哺乳缺乏耐性。慢性表現(xiàn)為繁殖障礙,如不發(fā)情,屢配不孕,空懷,流產(chǎn),產(chǎn)弱仔,有時(shí)可自愈,但生產(chǎn)能力下降。

    2.2.2 羊附紅體病 綿羊和山羊都能感染發(fā)病,但以綿羊更易感。發(fā)病后,體溫升高達(dá)41℃以上,呼吸、心跳加快,反芻和噯氣停止,糞便干燥,有時(shí)帶有暗紅色血液,排尿次數(shù)增加,尿液透明,呈淡黃色;鼻孔周圍有粘液性黃色結(jié)痂;可視黏膜水腫,呈淡紅色,有像針尖或綠豆樣大的出血點(diǎn)或斑,口腔內(nèi)側(cè)、齒齦、舌背面及兩側(cè)有粟粒樣大的出血點(diǎn),全身皮膚都有密集的像黃豆或蠶豆樣大小的出血斑點(diǎn)。

    2.2.3 牛附紅體病 各品種、各年齡的牛都易感,其中以奶牛附紅細(xì)胞體病對畜牧業(yè)發(fā)展造成的危害最大。感染發(fā)病后,病牛體溫升高至40℃以上、流清鼻涕、精神差、食欲下降、呼吸急促、嚴(yán)重貧血、皮膚及可視黏膜蒼白,個(gè)別牛有血尿、四肢無力、步態(tài)不穩(wěn)、喜臥等。

    2.2.4 家兔附紅體病 附紅細(xì)胞體是條件性致病菌,所以家兔感染后多呈隱性經(jīng)過。嚴(yán)重感染病例精神不佳,結(jié)膜黃染,食欲減退,糞便時(shí)稀時(shí)干,尿黃,呼吸加快心悸或衰弱,全身無力,消瘦,貧血,喜臥,體溫較高,有時(shí)會出現(xiàn)神經(jīng)癥狀。

    2.2.5 人附紅體病 人感染附紅細(xì)胞體后多呈隱性感染。輕度感染者無明顯臨床癥狀,實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)基本正常。重癥病人長期不規(guī)則發(fā)熱,乏力,關(guān)節(jié)酸痛,食欲不振,易出汗,嗜睡;隨病程的延長,出現(xiàn)貧血,黃疸。病人有疲勞綜合征樣表現(xiàn)。

    2.3 病理變化

    2.3.1 豬附紅體病 主要病理變化為貧血、黃疸。血液稀薄,不易凝固,全身肌肉顏色變淡,皮下脂肪黃染,體表、肝臟、腎臟、肺臟、脾臟腫大,且有大小不一的出血點(diǎn)或出血斑。肝臟可見條狀壞死。脾臟邊緣不整齊,有粟粒大的結(jié)節(jié)。膽囊膨脹,膽汁濃稠。心包積液,心肌蒼白柔軟,心外膜及心冠脂肪出血黃染,有少量針尖狀出血點(diǎn)。全身淋巴結(jié)腫大,切面外翻,漿液滲出,切面有灰白色壞死灶或出血點(diǎn)。胃底部出血壞死嚴(yán)重,十二指腸黏膜脫落,腸管充血。膀胱蒼白、黏膜有少量的出血點(diǎn),內(nèi)有積尿,顏色深黃或如濃茶。胸腹腔大量積液,腦軟膜充血、水腫、腦室液增多。

    2.3.2 羊附紅體病 黏膜黃染、貧血、消瘦、腰背及四肢等末梢處瘀血、血液稀薄、腹腔及胸腔積水,淋巴結(jié)腫大等。

    2.3.3 牛附紅體病 病牛血液稀薄、腹腔及胸腔積水、淋巴結(jié)腫大、肝腫大1~2倍、脾出現(xiàn)壞死灶、心肌擴(kuò)張、心間質(zhì)水腫、心冠脂肪出血和黃染、肺出現(xiàn)代償性肺氣腫、腎臟腫大變性、胃腸黏膜局部水腫。

    2.3.4 兔附紅體病 剖檢可見血液稀薄,黏膜蒼白,脾腫大,膽囊腫脹,腹水多,胸膜脂肪和肝臟黃染。

    2.3.5 人附紅體病 人患附紅體病后,主要表現(xiàn)為血相發(fā)生變化,黃疸和肝、脾腫大、不同部位的淋巴結(jié)腫大等。臨床檢驗(yàn)可出現(xiàn)紅細(xì)胞、血紅蛋白、紅細(xì)胞比容、血小板計(jì)數(shù)等降低,膽紅素增高;心電圖有變化,腎功能不全,肌酐、尿氮、非蛋白氮升高。

    2.4 實(shí)驗(yàn)室診斷

    2.4.1 病原學(xué) 無菌采取瀕死或病死動物的血液、淋巴結(jié)、肝、脾、肺、腎以及膽汁等作如下檢測。

    2.4.1.1 壓片法檢查從耳靜脈或人的耳垂、無名指采血(或用抗凝血)1滴于載玻片上,加等量的生理鹽水稀釋,混勻,加蓋玻片,置400~600倍顯微鏡下觀察。被感染的紅細(xì)胞多失去球形立體形態(tài),其邊緣不整而呈齒輪狀、星芒狀、刺球狀、不規(guī)則多邊形。

    2.4.1.2 直接涂片鏡檢 目前仍然是診斷人、畜附紅體病的主要手段。用末梢血涂片,瑞氏染色,油鏡(1000×)下計(jì)數(shù)100個(gè)紅細(xì)胞,凡染有附紅體的紅細(xì)胞少于30個(gè)為輕度感染;30~60個(gè)為中度感染;大于60個(gè)為重度感染。

    2.4.1.3 電鏡檢查 主要用于研究附紅體的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、繁殖與紅細(xì)胞的關(guān)系、對紅細(xì)胞造成的破壞、影響等,也可用掃描及透射電鏡進(jìn)行確診。

    2.4.2 生物學(xué)診斷 也稱為動物試驗(yàn)。用疑患附紅體病的人、畜血接種于健康小動物(如小鼠、兔、雞等)或雞胚,接種后觀察其表現(xiàn),并采血檢查附紅體。用此法診斷耗時(shí)較長,但有一定的輔助診斷意義。

    2.4.3 血清學(xué)診斷方法 用血清學(xué)方法檢查,不僅可以診斷附紅體病,還可以做流行病學(xué)調(diào)查及監(jiān)測。但對附紅體的血清學(xué)診斷方法國內(nèi)研究甚少,而國外對動物附紅體的血清學(xué)研究較多,建立了將附紅體與紅細(xì)胞分開、制備抗原的方法,并用去掉紅細(xì)胞的E.ovis抗原對羊進(jìn)行ELISA與間接血凝試驗(yàn)(IHA)的對比,發(fā)現(xiàn)ELISA比IHA的敏感性高8倍。所以ELISA法是該病的一種敏感、快速、特異的診斷方法。但此法不適于小豬及公豬的診斷,也不適于急性期診斷。而IHA主要用于對患豬的診斷。有人用免疫熒光試驗(yàn)(IFA)檢查羊的E.ovis感染表明,該法敏感、特異,保持時(shí)間長,但其敏感性低于ELISA法。

    2.4.4 分子生物學(xué)技術(shù) 用此法檢查診斷附紅體病是近十年來才發(fā)展起來的,已建立了DNA雜交和PCR技術(shù)。1990年,Oberst等[12]從被E.suis感染的高峰期的患豬放血,分離E.suis,并提取DNA,以32P標(biāo)記制成分子探針。用此探針檢查各種樣品,其結(jié)果證明這種探針能區(qū)別豬是否被E.suis感染。1993年,Gwaltney等[13]用λgtⅡ構(gòu)建E.suis DNA基因庫,從中選出ksu-2克隆子。之后又以ksu-2 DNA中一部分作為引物,經(jīng)試驗(yàn)證明PCR敏感性可查到≥1 pg的DNA,還證明E.suis感染豬后24 h就可出現(xiàn)PCR陽性,擴(kuò)增產(chǎn)物約500 bp。結(jié)果表明PCR法比其他生物學(xué)診斷方法敏感性高、且快速、特異性強(qiáng),在豬附紅細(xì)胞體早期診斷中具有重要應(yīng)用價(jià)值。

    細(xì)菌16 S rRNA基因是目前最常用的分類鑒定基因,對16 S rRNA基因的序列分析已成為細(xì)菌種屬鑒定和分類的標(biāo)準(zhǔn)方法。Messick等[14]依據(jù)已經(jīng)擴(kuò)增并克隆的豬附紅細(xì)胞體的16 S rRNA基因設(shè)計(jì)特異性引物,可用競爭性PCR進(jìn)行定量檢測,最低檢出量可達(dá)57~800個(gè)附紅細(xì)胞體 。這是首次依據(jù)16 S rRNA基因診斷并定量檢測豬附紅細(xì)胞體,該法對附紅細(xì)胞體 感染不同階段均可很好的進(jìn)行檢測。目前,國內(nèi)外已經(jīng)建立了牛、貓、鼠等多種動物附紅細(xì)胞體感染的PCR檢測方法。周榮瓊等[15]報(bào)道,基于豬附紅細(xì)胞體重慶株16 S rRNA基因的序列,設(shè)計(jì)合成種特異性引物,建立了豬附紅細(xì)胞體PCR診斷方法,可用于豬附紅細(xì)胞體的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查。

    2.5 預(yù)防

    該病治療費(fèi)用昂貴,且療效不確切,至今仍沒有可有效控制該病的疫苗。附紅體發(fā)病多與其它疫病伴發(fā)或繼發(fā),因此只能采用支持療法和綜合性預(yù)防性措施加以控制。加強(qiáng)動物飼養(yǎng)衛(wèi)生管理水平,提高營養(yǎng)水平以增強(qiáng)機(jī)體對病原的抵抗力,可起到預(yù)防本病的作用。

    3 存在的問題

    3.1 病原的分類學(xué)地位

    目前很多資料認(rèn)為,附紅細(xì)胞體有宿主特異性,但有調(diào)查表明人群中與動物接觸密切的感染率高;也有人用病豬內(nèi)臟懸液接種小白鼠,再取小白鼠病料接種家兔獲得成功。王亞鳴[16]發(fā)現(xiàn)近交系BALB/c小鼠感染附紅細(xì)胞體是來自感染小牛血清。我國發(fā)現(xiàn)的附紅細(xì)胞體種除兔、山羊、雞的附紅細(xì)胞體已命名外,馬、騾、驢、駱駝等動物的附紅細(xì)胞體都沒有命名。Neimark[17]等對附紅體的16 S rRNA 基因,提出應(yīng)將其歸于Mycoplasmataceae科。

    3.2 病原的生活史

    附紅細(xì)胞體的生活史至今尚不十分清楚,國內(nèi)學(xué)者根據(jù)附紅細(xì)胞體病發(fā)生的季節(jié)性,認(rèn)為吸血節(jié)肢動物是該病的主要傳播媒介。許耀臣等[18]發(fā)現(xiàn)豬舍內(nèi)的蚊子體內(nèi)能查出典型的附紅細(xì)胞體。至于附紅體在人畜體內(nèi)及節(jié)肢動物體內(nèi)的生長仍不清楚。有的研究者從血液中找到裂殖體,也有實(shí)驗(yàn)表明附紅體在血液中主要利用葡萄糖。

    3.3 致病機(jī)理

    目前還不清楚,但多認(rèn)為寄生數(shù)量多時(shí)因破壞紅細(xì)胞而引起發(fā)病。

    3.4 病原分離培養(yǎng)

    多數(shù)學(xué)者認(rèn)為附紅細(xì)胞體在自然界不能獨(dú)立生存,因?yàn)椴≡嫠璧臓I養(yǎng)物質(zhì)如氨基酸、脂肪酸等自身不能合成,需由宿主細(xì)胞來提供,不能在體外直接分離和傳代。但近年來也有進(jìn)行體外培養(yǎng)取得成功的報(bào)道。Nonaka等[19]對豬附紅細(xì)胞體的體外培養(yǎng)特性進(jìn)行了系統(tǒng)的研究,認(rèn)為可以在含10%小牛血清的REM培養(yǎng)液中生長,厭氧或5%的CO2條件均可。張守發(fā)等[20]用RPMI 1640、M199和DMEM等3種培養(yǎng)液作為基礎(chǔ)培養(yǎng)基、加入40%的犢牛血清,進(jìn)行牛附紅細(xì)胞體的體外培養(yǎng)獲得成功。房春林等[21]用RPMI 1640和小牛血清按不同比例混合在體外培養(yǎng)豬和兔附紅細(xì)胞體也獲得成功。這些培養(yǎng)方法的建立和完善,對于未來附紅細(xì)胞體的生物學(xué)特性研究、治療藥物篩選、抗原制備及疫苗研制將提供有效的途徑。

    4 小結(jié)

    以前,由于附紅細(xì)胞體病沒有大范圍的流行,所以沒有引起重視。但近幾年來,在我國多數(shù)地區(qū)的人群、畜群中開始發(fā)生此病并且造成危害,引起了醫(yī)學(xué)界、獸醫(yī)界的重視并開始進(jìn)行研究。對于該病的診斷與治療,雖然已有報(bào)道,但對該病原體生活史、傳播途徑、發(fā)病機(jī)制等不十分清楚。而且該病隱性感染率高,潛在危險(xiǎn)性大,生產(chǎn)中還不能有效地預(yù)防和控制此病,亟待進(jìn)行深入流行病學(xué)調(diào)查及監(jiān)測研究。

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