海南五指山苦丁茶黃酮含量測定的研究

陳 文，王湘君，趙 陽，陳啟芳

(1.瓊州學院理工學院，海南五指山572200;2.瓊州學院生物科學與技術學院，海南五指山572200;3.河南省新鄉(xiāng)市環(huán)境監(jiān)測站，河南新鄉(xiāng)453002)

0 引言

海南省五指山苦丁茶屬冬青科的兩個種，即冬青科冬青屬大葉冬青和冬青科冬青屬苦丁茶［1］。文章通過測定苦丁茶黃酮含量，發(fā)現(xiàn)黃酮是苦丁茶的重要組成成分。在一定范圍內(nèi)，隨著黃酮含量的增多，其產(chǎn)生的藥理作用對人體有益效果更加明顯［2］。

1 實驗研究

實驗研究以不同等級海南五指山苦丁茶為原料，采用醇提法對苦丁茶樣品進行初處理;根據(jù)黃酮類物質(zhì)與金屬鋁離子結合顯黃色，并在465nm波長下有最大吸收這一特征反應;利用紫外可見分光光度法與蘆丁標準系列定量比較，通過標準曲線得出公式，計算樣品中黃酮含量。將實驗測量結果與國內(nèi)其它地區(qū)苦丁茶相應物質(zhì)含量比較，發(fā)現(xiàn)五指山苦丁茶黃酮含量較高。

1.1 五指山苦丁茶中黃酮類物質(zhì)含量測定

1.1.1 材料、設備與試劑

1.1.1.1 苦丁茶樣品樣品均來自海南五指山山脈(海拔約為1860m)采摘的苦丁茶(曬干)。

高級苦丁茶:一級苦丁茶，肥壯，烏潤，勻凈，無花雜，價格適中。

低級苦丁茶:二級苦丁茶，褐黑，較勻凈，少量花雜，稍有嫩莖，經(jīng)濟實惠。

1.1.1.2 主要儀器設備TU－1901紫外－可見分光光度計:北京普析通用儀器有限責任公司

蒸餾裝置:M22型中量有機制備儀

電子天平:上海恒平科學儀器有限公司

電子分析天平:賽多利斯科學儀器(北京)有限公司

電子調(diào)溫電熱套:天津市泰斯特儀器有限公司

電子萬用爐:天津市泰斯特儀器有限公司

容量瓶:10mL，100mL，250mL，1000mL

吸量管:0.5mL，2mL，5mL，10mL

1.1.1.3 主要試劑(1)蘆丁標準品:稱取0.25g蘆丁粉末，用甲醇溶解配制成0.25mg/mL溶液。(2)5%亞硝酸鈉:稱取0.5g亞硝酸鈉固體，加入蒸餾水9.5mL配制成溶液。(3)5%硝酸鋁:稱取0.5g硝酸鋁固體，加入蒸餾水9.5mL配制成溶液。(4)4%氫氧化鈉:稱取4.0g氫氧化鈉固體，加入蒸餾水96mL配制成溶液。

(5)甲醇和95%乙醇:市售

1.1.2 實驗方法

1.1.2.1 苦丁茶黃酮樣品液制備將新鮮的苦丁茶葉經(jīng)粉碎機粉碎，用電子天平準確稱取10.0g粉末，用濾紙包好，裝入索氏提取器中，包好的濾紙緊貼器壁，上端呈凹狀，高度低于虹吸管最大高度，燒瓶內(nèi)加入125mL甲醇，水浴加熱抽提2－3小時，直到抽提液顏色變淺。得到深綠色的提取液，溶液水浴加熱濃縮約至100mL，轉(zhuǎn)入100mL容量瓶用甲醇定容，備用。

1.1.2.2 標準溶液的配制準確稱取干燥至恒重的蘆丁標準品0.25g，用甲醇溶解后轉(zhuǎn)入于1000mL容量瓶中，并定容至刻度，得濃度為0.25mg/mL標準貯備液，裝入棕色瓶中冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2.3 標準曲線的繪制準確吸取 0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2mL 蘆丁標準溶液于 25mL 已編號比色管中，依次加入0.3mL 5%亞硝酸鈉溶液，0.3mL 5%硝酸鋁溶液，4mL 4%氫氧化鈉溶液，以甲醇溶液定容至10mL，靜置15min，多次測量取平均值。

1.1.2.4 最佳波長的選擇取標準待測液(第4支比色管)在TU－1901紫外－可見分光光度計上，300－550nm波長范圍內(nèi)進行光譜掃描，取最大吸收波長為檢測波長，最后得到465nm處吸收最大。

1.1.2.5 待測樣品的準備取1mL樣品提取液用甲醇稀釋至10mL，再取其中1mL于10mL比色管中，依次加入0.3mL 5%亞硝酸鈉溶液、0.3mL 5%硝酸鋁溶液、4mL 4%氫氧化鈉溶液，以甲醇溶液定容至10mL，靜置15min，重復測量3次。

1.1.3 實驗數(shù)據(jù)與結果

1.1.3.1 實驗數(shù)據(jù)及標準曲線繪制

表1 蘆丁標準品標準曲線實驗數(shù)據(jù)

圖1 蘆丁標準品溶液吸光度曲線圖Figure1 rutin standard solution absorbance curve

1.1.3.2 苦丁茶樣品液實驗數(shù)據(jù)

表2 苦丁茶樣品液實驗數(shù)據(jù)

1.1.3.3 實驗數(shù)據(jù)結果分析

計算公式:①吸光度值代入公式:

求得到測量樣液濃度C

②含量計算公式:

表3 苦丁茶黃酮含量結果

不同等級的海南五指山苦丁茶黃酮含量不一樣，經(jīng)計算低級苦丁茶和高級苦丁茶黃酮含量分別為2.204%和2.282%，高級苦丁茶黃酮含量較豐富，但整體含量相差不大;通過實驗數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)，黃酮類物質(zhì)在苦丁茶中所占分量較高，是苦丁茶的重要組成部分之一。

2 實驗結果討論與分析

2.1 與國內(nèi)其他地區(qū)不同等級苦丁茶物質(zhì)含量比較

表4 國內(nèi)不同等級苦丁茶中黃酮和咖啡因含量

綜上，黃酮類物質(zhì)在苦丁茶中的含量比重相對較高。長江中下游地區(qū)黃酮類比重相對較低，而海南五指山的含量相對較高，相對有些地區(qū)苦丁茶中黃酮類物質(zhì)含量高出近18%［3］。

2.2 實驗結果分析實驗采用的原料是不同等級的海南五指山苦丁茶，由于苦丁茶的等級級別較少并且等級級數(shù)相差不大，測量結果數(shù)據(jù)顯示相差不明顯;實驗結果通過TU－1901型紫外可見分光光度計測得，測量時采用多次平行測定，準確度相對較高。由于受環(huán)境如光照、溫度等條件影響較大，測量結果存在著一定的誤差，但仍具有參考價值。

3 黃酮類物質(zhì)藥用價值

苦丁茶的藥療功效需要長期飲用后才能有較明顯效果。據(jù)《本草綱目》記載，苦丁茶具有散熱、清目、生津、止渴、消食、提神、消炎、解毒、降壓、降脂等藥理功能［4］。黃酮廣泛存在于自然界植物和漿果中，4千多種，其分子結構不盡相同，不同分子結構的黃酮可作用于身體不同的器官?？喽〔柚悬S酮的種類和結構也多樣，了解其藥用價值對苦丁茶的深入認識奠定了基礎。黃酮的功效是多方面的，作為一種很強的抗氧劑，可有效清除體內(nèi)的氧自由基，阻止細胞的退化、衰老，也可抑制癌癥的發(fā)生［5］;黃酮可改善血液循環(huán)，降低膽固醇，降低心腦血管疾病的發(fā)病率;黃酮還有降低血糖的功效，因為其具有穩(wěn)定膠原質(zhì)的作用，對糖尿病引起的視網(wǎng)膜病及毛細血管脆化有很好的保護作用;黃酮還可抑制炎性生物酶的滲出，增進傷口愈合和止痛，由于具有抗組織胺性，可用于各類敏感癥［6］?？傊?，黃酮類物質(zhì)可以幫助人體改善血液循環(huán)，提高免疫力，降低血壓、抑制癌癥、抗擊衰老等多種藥療功效，是糖尿病、高血脂、高血壓患者的福音［7］。

4 結論

苦丁茶是天然保健綠色食品，有較好的藥用價值。海南五指山地區(qū)四季如春，獨特的氣候?qū)ΨN植苦丁茶可以提供優(yōu)越的環(huán)境，對實現(xiàn)海南五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)化，市場化具有重要意義。海南五指山不同等級苦丁茶中黃酮類物質(zhì)含量為2.204%至2.282%，相對國內(nèi)其它地區(qū)有較強的競爭優(yōu)勢，這對五指山苦丁茶發(fā)展研究提供科學的參考價值。目前，國家正在大力發(fā)展海南國際旅游島，應合理利用發(fā)展契機，開發(fā)五指山苦丁茶產(chǎn)業(yè)如飲料等新產(chǎn)品，具備良好的發(fā)展前景，促使苦丁茶行業(yè)迅猛發(fā)展。

［1］吳曄.苦丁茶的生化成分與保健功能［J］.現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011(10):351－352.

［2］孫怡，張鑫，張文芹.苦丁茶冬青苦丁茶中多酚類物質(zhì)的分離純化與結構解析［J］.食品科學，2011，32(11):60－63.

［3］沈強，司輝清，于洋.苦丁茶化學成分研究進展［J］.茶業(yè)通報，2010，32(1):21－24.

［4］劉宗岸.冬青屬苦丁茶的保健功效及利用［J］.熱帶農(nóng)業(yè)科技，2009，32(2):26－28.

［5］古小玲，李達敏.海南茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展概況［N］.海南日報，2008－03－18.

［6］王新雯，海洪，金文英.黃酮類化合物含量測定方法的研究進展［J］.遼寧化工，2008，37(12):858－860.

［7］石秀梅，鄒輝.茶類產(chǎn)品總黃酮類化合物測定方法研究概況［J］.蠶桑茶葉通訊，2008(4):33－34.