p53、Bcl-2蛋白在結(jié)直腸癌中的表達(dá)及其與預(yù)后的關(guān)系

鄭 勇 高緒鋒 張松濤 張守永 黃新明 陳 生

野生型的p53蛋白對(duì)細(xì)胞增殖有負(fù)調(diào)控作用，突變的p53蛋白功能喪失，導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)度增殖，與腫瘤的發(fā)生密切相關(guān)。Bcl-2蛋白是屬于Bcl-2基因家族中的抑制細(xì)胞凋亡的蛋白，其表達(dá)的改變不僅影響正常細(xì)胞DNA損傷的修復(fù)和異常細(xì)胞的正常凋亡，還影響腫瘤細(xì)胞自身的凋亡[1]。關(guān)于p53和Bcl-2在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的臨床意義、與預(yù)后判斷的關(guān)系以及2種蛋白表達(dá)的相關(guān)性尚存爭(zhēng)論，我們通過(guò)免疫組化SABC法檢測(cè)結(jié)直腸癌組織中p53和Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)，并對(duì)隨訪病例資料進(jìn)行分析，旨在探討p53和Bcl-2在結(jié)直腸癌組織中表達(dá)的臨床意義及其與預(yù)后判斷的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 一般資料

2004年8月～2007年10月，我院收治的并行腫瘤切除術(shù)的結(jié)直腸癌患者120例，其中男性68例，女性52例，均有完整的病例資料，術(shù)前均無(wú)放療或化療?；颊吣挲g39～73歲，平均58.4歲，其中>60歲(老年組)36例，≤60歲(中青年組)84例。腫瘤部位：升結(jié)腸20 例，橫結(jié)腸18例，降結(jié)腸40例，乙狀結(jié)腸32例，直腸10例。Dukes分期：A期24例，B期32例，C期64例；腫瘤分化程度：高分化癌82例，中分化癌28例，低分化癌10例。 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：已轉(zhuǎn)移64例，未轉(zhuǎn)移56例。腫瘤生長(zhǎng)方式：腫塊型26例，浸潤(rùn)型38例，潰瘍型56例。SABC及DAB顯色試劑盒購(gòu)自武漢Boster(博士德)公司，Bcl-2單克隆抗體購(gòu)自Dako公司，p53單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Zymed公司。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化法檢測(cè)p53蛋白及Bcl-2蛋白 采用免疫組化SABC法，用已知胃癌Bcl-2表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞作為Bcl-2陽(yáng)性對(duì)照，用已知胃癌p53表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞為p53陽(yáng)性對(duì)照,用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。具體操作按試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.2.2 隨訪病例的研究 對(duì)Dukes B期的病例進(jìn)行5年隨訪，計(jì)算5年生存率。

1.2.3 結(jié)果評(píng)定標(biāo)準(zhǔn) 著染腫瘤細(xì)胞數(shù)與腫瘤細(xì)胞總數(shù)的比值在15%～20%為弱陽(yáng)性(+)，21%～50%為陽(yáng)性(++)，>50%為強(qiáng)陽(yáng)性(+++)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

所有數(shù)據(jù)均采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)；相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析法。

2 結(jié)果

2.1 p53和Bcl-2蛋白在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)情況

p53在結(jié)直腸癌腫瘤組織中表達(dá)的陽(yáng)性率為63.3%(76/120)，在高分化、中分化、低分化腫瘤組織中的陽(yáng)性率兩兩比較，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；不同年齡、性別、Dukes分期、腫瘤發(fā)生部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中，p53的陽(yáng)性率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。Bcl-2蛋白在結(jié)直腸癌腫瘤組織中的陽(yáng)性率為46.7%(56/120)，在高分化、中分化、低分化腫瘤組織中的陽(yáng)性率兩兩比較，P<0.01，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；不同年齡、性別、Dukes分期、腫瘤發(fā)生部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中，Bcl-2的陽(yáng)性率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P>0.05。見(jiàn)表1。

2.2 結(jié)直腸癌腫瘤組織中p53和Bcl-2蛋白表達(dá)的相關(guān)性

在不同分化程度的腫瘤組織中，隨著腫瘤分化程度的降低，p53的陽(yáng)性率升高；而B(niǎo)cl-2隨著腫瘤分化程度的降低，陽(yáng)性率降低。經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析顯示，腫瘤組織中p53的陽(yáng)性表達(dá)和Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，P<0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 p53、Bcl-2的在腫瘤組織中的表達(dá)與腫瘤臨床病理指標(biāo)的關(guān)系(例，%)

注：組內(nèi)兩兩比較，★為P<0.05，▼為P<0.01

2.3 Dukes不同分期病例的隨訪結(jié)果

120例中隨訪113例，隨訪率94.2%，隨訪期限6個(gè)月至5年。Dukes A期24例中p53陽(yáng)性表達(dá)14例，陰性表達(dá)10例；Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)13例，陰性表達(dá)11例。Dukes B期31例中p53陽(yáng)性表達(dá)19例，陰性表達(dá)12例；Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)15例，陰性表達(dá)16例。Dukes C期58例中p53陽(yáng)性表達(dá)38例，陰性表達(dá)20例；Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)24例，陰性表達(dá)34例。通過(guò)Spearman相關(guān)分析表明，p53的陽(yáng)性表達(dá)與患者的5年生存率呈負(fù)相關(guān)；Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)患者的5年生存率呈正相關(guān)。見(jiàn)表2。

表2 113例結(jié)直腸癌患者術(shù)后5年生存率比較(例，%)

注：同一分期內(nèi)，p53陰性組與陽(yáng)性組比較，▲為P<0.05；Bcl-2陽(yáng)性組與陰性組比較，▲為P<0.01

3 討論

p53基因是細(xì)胞凋亡的重要調(diào)控基因,分為野生型和突變型2型。野生型p53基因是1種抑癌基因，能誘導(dǎo)終末分化,維持基因穩(wěn)定,觸發(fā)衰老和誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡,是負(fù)生長(zhǎng)調(diào)控因子。當(dāng)p53基因突變時(shí),細(xì)胞周期失控,某些癌基因得以激活(如RAS基因)，使細(xì)胞無(wú)限制地生長(zhǎng)，腫瘤的侵襲力增強(qiáng),淋巴轉(zhuǎn)移的危險(xiǎn)性增加。正常細(xì)胞內(nèi)p53基因?yàn)橐吧?其表達(dá)的蛋白在細(xì)胞中含量極少，且半衰期短，一般免疫組化方法不易檢出；而突變型p53蛋白由于構(gòu)象改變,表達(dá)量增加,半衰期延長(zhǎng)，穩(wěn)定性增加，故免疫方法測(cè)得的p53蛋白基本上是突變型p53 蛋白[2]。近年來(lái)，突變的p53蛋白在人結(jié)直腸癌腫瘤組織中的陽(yáng)性表達(dá)已經(jīng)得到證實(shí)。普遍認(rèn)為結(jié)直腸癌中抑癌基因p53的突變、功能減退與突變的p53蛋白的異常堆積密切相關(guān)[3]。本文研究結(jié)果顯示，p53在結(jié)直腸癌的陽(yáng)性率為63.3%，與文獻(xiàn)[4]報(bào)道結(jié)果較一致。本文研究結(jié)果還顯示，p53的陽(yáng)性率與腫瘤組織的分化程度有關(guān)，腫瘤的分化程度越低，p53的陽(yáng)性率越高。

關(guān)于p53的表達(dá)與腫瘤的進(jìn)展及腫瘤的生長(zhǎng)部位等的關(guān)系仍存在較多爭(zhēng)議[5，6]，多數(shù)資料顯示，p53的陽(yáng)性率與腫瘤的分期、淋巴結(jié)的轉(zhuǎn)移、腫瘤生長(zhǎng)部位及患者的年齡、性別關(guān)系不大。鄒揚(yáng)等[3]研究結(jié)果顯示，p53的陽(yáng)性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移顯著相關(guān)，而且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是多種因素中的唯一相關(guān)因素。本組資料研究結(jié)果顯示，p53的陽(yáng)性率與患者的年齡、性別、腫瘤的Dukes分期、腫瘤的生長(zhǎng)方式、生長(zhǎng)部位、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移無(wú)關(guān)，而在腫瘤的Dukes分期中，雖然在不同分期中p53的陽(yáng)性率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但是，DukesC期的陽(yáng)性率高于A、B期。本研究還表明，p53的陽(yáng)性表達(dá)率與患者的5年生存率呈負(fù)相關(guān)，有關(guān)p53表達(dá)與結(jié)直腸癌術(shù)后預(yù)后的關(guān)系及其相關(guān)機(jī)制分子還有待進(jìn)一步深入研究。

Bcl-2是抑制細(xì)胞凋亡的蛋白，在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)及其與結(jié)直腸癌的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后的關(guān)系也備受關(guān)注。多數(shù)研究認(rèn)為，Bcl-2的表達(dá)和結(jié)直腸癌的預(yù)后有關(guān)，認(rèn)為其表達(dá)和腫瘤的復(fù)發(fā)呈負(fù)相關(guān)；有學(xué)者認(rèn)為其與生存時(shí)間無(wú)關(guān)，與預(yù)后相關(guān)，也有少數(shù)研究認(rèn)為Bcl-2陽(yáng)性表達(dá)和預(yù)后無(wú)關(guān)。本組資料研究表明，Bcl-2蛋白在結(jié)直腸癌腫瘤組織中的陽(yáng)性率為46.7%，在高分化、中分化、低分化腫瘤組織中的陽(yáng)性率有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；在不同年齡、性別、Dukes分期、腫瘤發(fā)生部位及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中，Bcl-2的陽(yáng)性率均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Bcl-2的表達(dá)與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)，其陽(yáng)性表達(dá)5年生存率高于陰性表達(dá)者，有關(guān)Bcl-2表達(dá)與結(jié)直腸癌術(shù)后預(yù)后的關(guān)系及其相關(guān)分子機(jī)制還有待進(jìn)一步深入研究。本組資料研究還表明，在不同分化程度的腫瘤組織中，p53的表達(dá)和Bcl-2的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。

總之，突變的p53在結(jié)直腸癌組織中高表達(dá)，并且隨腫瘤組織分化程度的降低其表達(dá)增高；Bcl-2蛋白在結(jié)直腸癌組織中低表達(dá)，隨腫瘤組織分化程度的降低其表達(dá)亦降低。p53、Bcl-2的陽(yáng)性率與患者的5年生存率均相關(guān)。

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