牡蠣中?；撬岷繙y定方法的建立

李秀娟 魯 曾 黃賢剛

（日照職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品工程學(xué)院，山東 日照 276800）

牡蠣中?；撬岷繙y定方法的建立

李秀娟 魯 曾 黃賢剛

（日照職業(yè)技術(shù)學(xué)院食品工程學(xué)院，山東 日照 276800）

確定分光光度法測定牛磺酸含量的條件，其最佳測定條件為：8mL 1mol/L的醋酸鈉，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%甲醛作為顯示劑，在60℃下進行顯色反應(yīng)，顯色20min后在350nm下進行測定，并對該試驗方法進行驗證性實驗，結(jié)果顯示該方法測定?；撬岢杀镜?，干擾少，重現(xiàn)性好，為測定的最佳方法。

分光光度法；牡蠣；?；撬?/p>

牛磺酸（lyium cortex taurine）又稱牛膽堿、牛膽素，化學(xué)名2－氨基乙磺酸，結(jié)構(gòu)式為NH2CH2CH2SO3H，因從牛膽汁（bovine bile）中首次分離而得名［1］。?；撬峋哂卸喾N生物藥物功能，對心臟、肝臟、內(nèi)分泌機能等起著一定的作用，并有促進人體細(xì)胞代謝、調(diào)節(jié)生理功能、治療疾病的作用［2］。

目前國內(nèi)外?；撬岽蠖嗖捎没瘜W(xué)方法合成，但該方法環(huán)境污染較為嚴(yán)重；而提取天然牛磺酸的工藝雖簡單且無污染，但價格遠(yuǎn)高于化學(xué)合成的?；撬帷Ｒ虼?，從海洋低值產(chǎn)品中提取?；撬峋哂休^高的經(jīng)濟、實用和環(huán)保價值［3］。目前國家標(biāo)準(zhǔn)食品中?；撬岬臏y定方法為液相色譜法，該法在應(yīng)用時，所需設(shè)備較為昂貴，成本較高。使得該提取方法的研究進展較為緩慢。因此，急需找到一種簡便、準(zhǔn)確的?；撬釡y定方法，以促進海洋低值產(chǎn)品中?；撬崽崛》椒ǖ难芯?。

1 材料與方法

1.1 主要儀器與試劑

1.1.1 原料與試劑

牡蠣：日照水產(chǎn)品市場；

乙醇、乙酰丙酮、甲醛、醋酸鈉：AR，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司；

牛磺酸樣品（BC）：湖州生物化學(xué)有限公司。

1.1.2 試驗儀器

高速組織搗碎機：DS－1，上海標(biāo)本模型廠制造；

電熱恒溫水浴鍋：HH－2，龍口市先科儀器公司；

實驗室臺式精密PH計：KE1106/KE1106B型，武漢科易科技有限公司；

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：N－1001型，上海蘭科儀器；

紫外可見分光光度計：752型，上海光譜儀器有限公司。

1.2 試驗方法

1.2.1 顯色原理 ?；撬崾且环N氨基酸，本身無紫外吸收。在醋酸鈉存在下，?；撬崤c乙酰丙酮和甲醛經(jīng)過加熱反應(yīng)生成 N－取代基－2，6－二甲基－3，5－二乙?；?，4－二氫吡啶。該配合物顯黃色，在400nm左右有一肩峰，其吸收值與?；撬嵩谝欢舛确秶鷥?nèi)呈線性。

1.2.2 分光光度計條件的確定 分別對影響吸光度的波長、顯色溫度、顯色時間、乙酰丙酮、甲醛、醋酸鈉用量進行確定，最終確定采用分光光度計法測定?；撬岬淖罴言囼灄l件。在進行試驗時，除所需確定的因素外，其他因素的試驗條件如下：10mL 1mol/L的 醋 酸 鈉，1mL 乙 酰 丙 酮，1mL 37%甲醛作為顯示劑，在50℃下進行顯色反應(yīng)，顯色10min后測定。

1.2.3 牡蠣中?；撬岬奶崛?采用水提法對牡蠣中的牛磺酸進行提取，并最終通過分光光度計對其中的牛磺酸含量進行測定。

2 結(jié)果與討論

2.1 測定條件的確定

2.1.1 波長的確定 采用1.2.2所述方法，從340～510nm每隔10nm測量1次吸光度，結(jié)果見圖1。

圖1 吸光度與波長的關(guān)系圖Figure 1 Effect of wavelength on absorbance

由圖1可知，吸光度在350nm時達到最高，這與文獻［4］所采用的吸光度有所不同，這可能是由于在進行試驗方法的確定時未對最大吸收波長進行確定，從而造成了最大吸收波長的偏差。

2.1.2 顯色溫度的確定 在350nm下，對不同顯色溫度下的顯色試驗，進行吸光度的測定，結(jié)果見圖2。

圖2 吸光度與溫度的關(guān)系圖Figure 2 Effect of temperature on absorbance

由圖2可知，溫度在60℃時，其吸光度達到最高。因此采用60℃作為其顯色溫度。

2.1.3 顯色時間的確定 在350nm下，60℃溫度下進行顯色反應(yīng)，對不同顯色時間的吸光度進行測定，結(jié)果見圖3。

圖3 吸光度與顯色時間關(guān)系圖Figure 3 Effect of the time of developer on absorbance

由圖3可知，吸光度在25min時達到最高，在20～40min內(nèi)無顯著差異（P＞0.1），20min與15min相比存在顯著差異（P＜0.05）。因此采用顯色時間20min后的進行測定，并在顯色40min內(nèi)測定完畢。

2.1.4 醋酸鈉用量的確定 在350nm下，60℃溫度下加入不同量的1mol/L的醋酸鈉進行顯色反應(yīng)，反應(yīng)至20min時進行測定，結(jié)果見圖4。

圖4 吸光度與醋酸鈉用量關(guān)系圖Figure 4 Effect of the amount of sodium acetate on absorbance

由圖4可知，醋酸鈉用量在8mL時達到最大，隨著醋酸鈉用量的加大，其吸光度反而呈下降趨勢，說明醋酸鈉對此試驗有較大的影響。

2.1.5 乙酰丙酮用量的確定 在350nm下，60℃溫度下加入不同量的乙酰丙酮進行顯色反應(yīng)，反應(yīng)至20min時進行測定，結(jié)果見圖5。

圖5 吸光度與乙酰丙酮用量關(guān)系圖Figure 5 Effect of the amount of acetyl acetone on absorbance

由圖5可知，乙酰丙酮用量在0.6mL時達到最高，隨著乙酰丙酮用量的加大，其吸光度反而呈下降趨勢。

2.1.6 甲醛用量的確定 在350nm下，60℃溫度下加入不同量的37%甲醛進行顯色反應(yīng)，反應(yīng)至20min時進行測定，結(jié)果見圖6。

由圖6可知，37%甲醛用量在2mL時吸光度達到最高，隨著甲醛加入量的加大其吸光度呈下降趨勢。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程的確定

采用上述所確定的試驗方法，即：8mL 1mol/L的醋酸鈉，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%的甲醛作為顯示劑，60℃下進行顯色反應(yīng)，顯色20min后在350nm下進行測定，其標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖7。

圖6 吸光度與甲醛用量關(guān)系圖Figure 6 Effect of the amount of formaldehyde on absorbance

圖7 ?；撬針?biāo)準(zhǔn)工作曲線Figure 7 Standard working curve of taurine

由圖7可知，分光光度法測定?；撬嵩?00mg之內(nèi)具有較好的線性關(guān)系，其相關(guān)系數(shù)為0.997 5。

2.3 牡蠣中?；撬釡y定的添加回收率試驗

在牡蠣中精確添加一定量的?；撬針?biāo)準(zhǔn)樣品，然后采用水提法對牡蠣中的?；撬徇M行提取，并用陽離子交換樹脂進行純凈處理，最終得到的添加率試驗結(jié)果見表1。

由表1可知，水提法提取的牛磺酸，用分光光度法進行測定時其他物質(zhì)對吸光度的影響較小；該測定方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好；此方法與液相色譜法相比所需設(shè)備投入較小，成本較低，為一種簡單實用的測定方法。

表1 ?；撬釡y定的添加回收率試驗Table 1 Recovery of taurine added sample

3 結(jié)論

本試驗確定了分光光度法測定?；撬岷康臈l件，其最佳測定條件為：8mL 1mol/L的醋酸鈉，0.6mL乙酰丙酮，2mL 37%甲醛作為顯示劑，在60℃下進行顯色反應(yīng)，顯色20min后在350nm下進行測定，該試驗方法測定牛磺酸在200mg內(nèi)具有較好的線性相關(guān)，該方法準(zhǔn)確度高，重現(xiàn)性好，不失為一種簡單實用的牛磺酸測定方法。

1 Hayes K C.Myocardial failure in cats associated with low plasma taurine：A versible cardiomy pathy［J］.Science，1987（14）：237.

2 丁力，萬華印.?；撬釋π募〖?xì)胞的保護作用及機理［J］.廣州醫(yī)藥，1995（1）：3～5.

3 何麗華，申曉輝.食品中?；撬釋θ梭w的影響［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2003，30（1）：768～772.

4 楊涓，魏智清，龐偉.分光光度法測定寧夏枸杞中牛磺酸含量［J］.農(nóng)業(yè)科學(xué)研究，2005，26（2）：28～30.

The determination of taurine in ostrea rivularis by spectophotometry

LI Xiu－juan LU ZengHUANG Xian－gang

（College of Food Engineering，Rizhao polytechnic，Rizhao，Shandong276826，China）

This article determined the conditions of taurine for content spectrop－h(huán)otometer.The result showed that the amount of 1mol/L sodium acetate is 8mL，acetyl acetone is 0.6mL，37%formaldehyde is 2mL.The experiment only under 60℃ develop 20min，can obtained accurate results under 350nm wavelength.

spectmphotometer；oyster；lyium cortex taurine

10.3969 /j.issn.1003－5788.2010.05.023

李秀娟（1967－），女，日照職業(yè)技術(shù)學(xué)院副教授，碩士。E－mail：lxj818＠163.com

2010－06－01