重癥肺炎患者外周血自然殺傷細(xì)胞變化的意義

李金美

(麗水市人民醫(yī)院,浙江 麗水 323000)

重癥肺炎是多種原因引起的、臨床上以進(jìn)行性呼吸困難及難以糾正的低氧血癥為主要表現(xiàn)的肺部損傷,是肺組織失控性炎癥反應(yīng)的結(jié)果。自然殺傷細(xì)胞(Natural killer cells,NK)是天然免疫系統(tǒng)中的重要細(xì)胞,在機(jī)體免疫調(diào)控中發(fā)揮重要的作用,其特征性表型主要是NK細(xì)胞表達(dá)CD56和CD16分子,而不表達(dá)CD3分子和T細(xì)胞受體(TCR)[1]。多種感染性疾病與NK細(xì)胞調(diào)節(jié)功能異?；騺G失有關(guān)[2]。作者通過輕癥肺炎40例和重癥肺炎56例的外周血NK細(xì)胞絕對數(shù)及其占淋巴細(xì)胞比例的變化,分析其與肺炎病情及預(yù)后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2006年5月～2009年5月本院住院56例重癥肺炎患者,其中男35例,女21例,平均年齡(51.3±12.2)歲,其中 24例出現(xiàn)多器官功能障礙綜合征(MODS),符合MODS的診斷標(biāo)準(zhǔn)[3]。40例輕癥肺炎患者中男25例,女15例,平均年齡(52.3±13.2)歲,均符合社區(qū)、醫(yī)院獲得性肺炎中輕、重癥肺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)[4-5]。另外選擇50名本院體檢中心同期相互間無血緣關(guān)系的體檢健康者為對照組,其中男30例,女20例,平均年齡(49.7±10.5)歲,三組年齡、性別差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

1.2 方法 (1)標(biāo)本采集:用2mL EDTA抗凝負(fù)壓真空采血管采集研究對象外周靜脈血,在24小時(shí)內(nèi)進(jìn)行標(biāo)本染色;(2)流式細(xì)胞儀校準(zhǔn):為保證實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確性,用 FACS Comp CaliBRITE Beads、Trucount Controls和Multi-Check Control校準(zhǔn)FACSC alibur流式細(xì)胞儀,檢測儀器的準(zhǔn)確性,合格后再進(jìn)行標(biāo)本測定;(3)NK細(xì)胞絕對值和比值測定:取各表面抗體(CD3、CD16+、CD56+、CD45)10μ L 加入專用流式管,再加EDTA抗凝血 50μ L與之充分混勻,渦旋震蕩器震蕩混勻5秒,置室溫避光處(以抽屜代替)反應(yīng)15～30分鐘,加入已配好的BD FACS Lysing Solution(10倍)1000μ L,渦旋震蕩器混勻,置避光處5～10分鐘,應(yīng)用FACSC alibur流式細(xì)胞儀檢測標(biāo)記細(xì)胞并分析檢測結(jié)果。依NK細(xì)胞不表達(dá)CD3分子的特點(diǎn),將門設(shè)在CD3陰性淋巴細(xì)胞群,把表達(dá)CD56和/或CD16分子者計(jì)為NK細(xì)胞,分析NK細(xì)胞絕對值及比值[試劑 CD3-FITC、CD16+、CD56-PE、CD45-PerCP、BD FACS Lysing Solution(10倍)購于美國BD公司,PBS BUFFER購于美國BECKMAN COULTER公司]。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件,所有數(shù)據(jù)均以(±s)表示,原始數(shù)據(jù)經(jīng)轉(zhuǎn)換,擬合正態(tài)分布后組間差異采用t檢驗(yàn)。

2 結(jié) 果

2.1 NK細(xì)胞絕對值及比值 輕、重癥肺炎患者的NK細(xì)胞絕對值及比值與對照組相比均降低,均有顯著性差異(P＜0.01),輕、重癥肺炎兩組相比,也有顯著性差異(P＜0.01),見表1。

表1 三組NK細(xì)胞絕對值及相應(yīng)比值的比較(±s)

表1 三組NK細(xì)胞絕對值及相應(yīng)比值的比較(±s)

與對照組比較**P＜0.01,與輕癥肺炎組比較△△P＜0.01

組 別 n NK(個(gè)/μ L) NK(%)輕癥肺炎組 40 213±102** 10.01±4.07**重癥肺炎組 56 136±87**△△ 6.36±2.71**△△對照組 50 396±198 18.20±6.76

2.2 不同進(jìn)展期重癥肺炎患者NK細(xì)胞絕對值及比值 56例重癥肺炎按是否進(jìn)展為MODS分為MODS組24例與非MODS組32例,結(jié)果顯示,MODS組NK細(xì)胞絕對值及比值明顯低于非MODS組,有顯著性差異(P＜0.01),見表2。

表2 不同進(jìn)展期重癥肺炎患者NK細(xì)胞絕對值及比值的比較(±s)

表2 不同進(jìn)展期重癥肺炎患者NK細(xì)胞絕對值及比值的比較(±s)

與非MODS組比較**P＜0.01

組 別 n NK(個(gè)/μ L) NK(%)MODS組 24 82±39** 4.11±0.85**非MODS組 32 177±91 8.05±2.38

2.3 并發(fā)MODS組不同轉(zhuǎn)歸者的NK細(xì)胞絕對值及比值的變化 24例繼發(fā)MODS重癥肺炎患者中死亡8例,存活16例。死亡患者的NK細(xì)胞絕對值及比值明顯低于存活組,兩者有顯著性差異(P＜0.05),見表 3。

表3 重癥肺炎不同轉(zhuǎn)歸者NK細(xì)胞絕對值及比值的變化(±s)

表3 重癥肺炎不同轉(zhuǎn)歸者NK細(xì)胞絕對值及比值的變化(±s)

與存活組比較*P＜0.05

組 別 n NK(個(gè)/μ L) NK(%)死亡組 8 34±20* 2.05±0.91*存活組 16 57±25 3.37±1.18

3 討 論

近年來,機(jī)體免疫狀態(tài)紊亂在肺炎的發(fā)生、發(fā)展中所起的作用備受關(guān)注。NK細(xì)胞是一種來自于骨髓的細(xì)胞,無T和B細(xì)胞表面特征,它們的胞質(zhì)中的含有許多嗜苯胺顆粒樣的物質(zhì),根據(jù)CD56和CD16分子表達(dá)與否可將NK細(xì)胞分為三個(gè)主要亞群:CD56+、CD56+CD16+、CD16+NK 細(xì)胞,是組成天然免疫系統(tǒng)的重要細(xì)胞,NK細(xì)胞不需要預(yù)先接觸抗原,無MHC限制性,不依賴抗體或補(bǔ)體即可直接殺傷MHC I類分子表達(dá)低下或缺如的腫瘤細(xì)胞,發(fā)揮其細(xì)胞毒殺傷功能,其效應(yīng)應(yīng)答是通過自身細(xì)胞膜上受體識別靶細(xì)胞上的HLAI類分子而調(diào)控免疫反應(yīng),NK細(xì)胞的功能包括控制病毒和細(xì)菌的感染,調(diào)節(jié)體內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定,產(chǎn)生細(xì)胞因子,對腫瘤細(xì)胞具有殺傷效應(yīng),并建立一個(gè)先天性免疫和獲得性免疫間的聯(lián)系[6]。所以,檢測NK細(xì)胞可知肺炎患者的免疫功能狀態(tài)。

作者對40例輕癥肺炎和56例重癥肺炎患者的外周血NK細(xì)胞絕對數(shù)及其占淋巴細(xì)胞比例進(jìn)行研究,結(jié)果顯示輕、重癥肺炎患者的NK細(xì)胞絕對數(shù)及比值與對照組比較,均呈現(xiàn)明顯降低(P＜0.01),輕、重癥肺炎患者兩者相比,重癥肺炎患者明顯降低(P＜0.01),提示輕、重癥肺炎患者NK細(xì)胞絕對數(shù)及相應(yīng)比值下降,其原因可能是在清除病原和殺傷受感染細(xì)胞的過程中消耗了大量的NK細(xì)胞,使患者免疫功能低下,不利于機(jī)體清除致病原和感染的細(xì)胞,致感染得以持續(xù)或二次感染容易發(fā)生。機(jī)體為了保持平衡性,在誘導(dǎo)產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子的狀態(tài)下,也可以誘導(dǎo)產(chǎn)生抗炎性細(xì)胞因子,如IL-4、IL-10等,而IL-4、IL-10則能抑制NK細(xì)胞的功能[7],另外,抗炎性細(xì)胞因子過度分泌使機(jī)體處于無應(yīng)變能力或易感狀態(tài),表現(xiàn)為代償性抗炎反應(yīng)綜合征(CARS),機(jī)體對外來刺激反應(yīng)低下,對感染易感性增強(qiáng),加劇膿毒癥和MODS[8-9],所以,繼發(fā)MODS的重癥肺炎患者外周血NK細(xì)胞絕對數(shù)及其占淋巴細(xì)胞比例均明顯低于無繼發(fā)MODS患者(P＜0.01)。此外,結(jié)果還顯示MODS重癥肺炎死亡患者NK細(xì)胞絕對值及相應(yīng)比值明顯低于存活組(P＜0.05),表明死亡患者NK細(xì)胞絕對值及相應(yīng)比值更一步降低,使NK細(xì)胞對樹突狀細(xì)胞(DC細(xì)胞)的正向調(diào)節(jié)作用、NK細(xì)胞對抗原特異性細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CTL細(xì)胞)活化的啟動起必需的輔助作用、NK細(xì)胞通過分泌干擾素γ(IFN-γ)促進(jìn)1型輔助T細(xì)胞(Th1細(xì)胞)的分化 、NK 細(xì)胞對 γ δ T 細(xì)胞的正向調(diào)節(jié)作用、NK細(xì)胞對天然殺傷T細(xì)胞(NKT細(xì)胞)所致爆發(fā)性肝臟免疫損傷的負(fù)調(diào)節(jié)作用減弱,不能有效地連接天然免疫和獲得性免疫,實(shí)現(xiàn)固有免疫對適應(yīng)性免疫的調(diào)節(jié)作用,導(dǎo)致患者出現(xiàn)不良預(yù)后。

因此,檢測外周血NK細(xì)胞絕對數(shù)及其占淋巴細(xì)胞的比例對評估重癥肺炎的病情和預(yù)后有重要的臨床意義。

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