瘦素及瘦素受體在大鼠胰腺纖維化組織中表達的變化

鄒芳芳 陳少夫 鄭宏

·短篇論著·

瘦素及瘦素受體在大鼠胰腺纖維化組織中表達的變化

鄒芳芳 陳少夫 鄭宏

瘦素(leptin)是一個具有多項功能的細胞因子，與機體的許多生理功能及疾病的發(fā)生關(guān)系密切。瘦素的生物學效應是由瘦素受體(leptin receptor,ob-R)介導的。ob-R為單跨膜細胞表面受體，目前已發(fā)現(xiàn)的有全長型(ob-Rb)及不同剪接型(ob-Ra、c、d、f、e )等至少6種形式，其中ob-Rb 是主要的功能性受體。瘦素參與肝纖維化[1-2]、腎臟纖維化[3]、心肌纖維化[4]的過程。目前研究顯示，瘦素及ob-Rb在胰腺組織中表達[5-6]。為此，本實驗檢測胰腺纖維化大鼠胰腺組織中瘦素及ob-Rb的表達，探討兩者的關(guān)系。

一、材料與方法

1．實驗動物分組：雄性Wistar大鼠20只，清潔級，體重200～250 g，購自北京維通利華實驗動物公司。按數(shù)字表法隨機分成對照組和胰腺纖維化組，各10只。采用每周2次腹腔內(nèi)注射二乙基二硫代氨基甲酸鈉(DDC)1000 mg/kg體重的方法制備胰腺纖維化模型，對照組注射等量生理鹽水。6周后處死大鼠，取胰腺組織。

2．胰腺病理學檢查：選取不同部位的胰腺組織固定于10%甲醛，石蠟包埋、切片，常規(guī)HE染色。鏡下觀察胰腺病理學變化。

3．瘦素及ob-Rb檢測：采用SP法檢測瘦素及ob-Rb。兔抗鼠瘦素及ob-Rb一抗 1∶100 稀釋。鏡下見棕黃色染色為陽性。應用顯微圖像分析系統(tǒng)分析陽性染色面積的積分光密度值。

二、結(jié)果

1．胰腺病理學形態(tài)改變：對照組大鼠胰腺組織無明顯病理變化，只有個別大鼠胰腺有輕微充血，或少量炎性細胞浸潤。纖維化組可見胰腺組織萎縮,胰腺內(nèi)出血,炎性細胞浸潤,胰腺細胞空泡樣改變 ,胰腺組織間隔增寬,纖維組織增生(圖1) 。

2．胰腺組織瘦素的表達： 瘦素主要位于胰腺腺泡及胰島細胞內(nèi),呈棕黃色網(wǎng)格狀包繞細胞核(圖2) 。對照組與纖維化組瘦素積分光密度值分別為4.89±1.28和19.42±3.82,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

3．瘦素受體表達：ob-Rb主要位于胰腺腺泡及胰島細胞內(nèi),呈棕黃色網(wǎng)格狀包繞細胞核(圖3)。對照組與纖維化組ob-Rb積分光密度值分別為4.95±0.83和9.11±0.83,差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

圖1對照組(a)和纖維化組(b)大鼠胰腺病理變化(HE ×400)

圖2對照組(a)和纖維化組(b)大鼠胰腺瘦素表達 (免疫組化 ×400)

圖3對照組(a)和纖維化組(b)大鼠胰腺ob-Rb表達(SP ×400)

討論瘦素與靶細胞表面ob-R結(jié)合后，通過激活Janus激酶信號轉(zhuǎn)導與JAK/STAT途徑調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄，也可通過MAPK和PI3-K等通路傳遞信號[7-9]，發(fā)揮各種生物學效應。

胰腺纖維化以胰島細胞和腺泡細胞的破壞、胰腺星形細胞(PSC)的活化和結(jié)締組織替代為特征[10]。本實驗應用DDC誘導大鼠的胰腺纖維化,光鏡下觀察到胰腺腺細胞形態(tài)不規(guī)則、萎縮及炎癥細胞浸潤,腺細胞腺小葉之間的纖維間隔增大，瘦素及ob-R的表達明顯增加。提示瘦素對胰腺纖維化的發(fā)展起促進作用。其作用機制可能為：(1)抑制PSC的凋亡。Saxena等[1-2]在肝纖維化實驗中發(fā)現(xiàn)瘦素通過抑制肝星形細胞(HSC)凋亡而促進肝纖維化。在胰腺中存在的PSC在形態(tài)學上與HSC相似，合成并分泌細胞外基質(zhì)[11]。因此，瘦素也存在抑制PSC凋亡的可能[12]。(2)加重氧化應激反應，引起慢性胰腺損傷。有報道瘦素加重氧化應激的反應，降低抗氧化劑(如SOD、CAT等)的活性，增加氧自由基[13]。已知氧化應激可引起慢性胰腺損傷[14-15]，這可能也是瘦素加重胰腺細胞損傷的原因之一，進而促進胰腺纖維化的發(fā)展。(3)促進轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)的表達來調(diào)節(jié)PSC的活化。Ikejima等[16]發(fā)現(xiàn)，肝竇內(nèi)皮細胞加入瘦素后可通過活化STAT3而上調(diào) TGF-β1 mRNA的表達。是否能通過減少瘦素及瘦素受體在胰腺中的表達或降低血漿的濃度來減緩胰腺纖維化的發(fā)展有待于繼續(xù)相關(guān)實驗的研究。

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2009-05-22)

(本文編輯：呂芳萍)

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.03.023

110004 沈陽，中國醫(yī)科大學附屬盛京醫(yī)院消化內(nèi)科(鄒芳芳，現(xiàn)在天津市第一中心醫(yī)院東院普內(nèi)科)

陳少夫，Email:csf196211@yahoo.com.cn