胰腺癌中RECK和MMP-9蛋白的表達(dá)及臨床病理意義

葉素素 田字彬 魏良洲 趙清喜 孔心涓 李玉軍

·論著·

胰腺癌中RECK和MMP-9蛋白的表達(dá)及臨床病理意義

葉素素 田字彬 魏良洲 趙清喜 孔心涓 李玉軍

目的觀察RECK和MMP-9在胰腺癌組織中的表達(dá)，探討其與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系。方法采用免疫組化PV6000法檢測(cè)28例胰腺癌及10例正常胰腺組織中RECK、MMP-9的表達(dá)，應(yīng)用SPSS13.0軟件對(duì)RECK、MMP-9的表達(dá)與腫瘤臨床病理特征的關(guān)系進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果RECK在胰腺癌組織中的陽性表達(dá)率為46.4%(13/28)，顯著低于它在正常胰腺組織中90.0%(9/10)的陽性表達(dá)率。胰腺癌臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期組的RECK陽性表達(dá)率(75.0%，9/12)明顯高于Ⅲ+Ⅳ期組(25.0%，4/16，P<0.05)，無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組的RECK陽性表達(dá)率(60.0%，12/20)明顯高于有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移組(12.5%，1/8，P<0.05)。MMP-9在胰腺癌組織中的陽性表達(dá)率為75.0%(21/28)，顯著高于正常胰腺組織中的20.0%(2/10)陽性表達(dá)率(P<0.01)。胰腺癌臨床分期為Ⅰ+Ⅱ期組的MMP-9陽性表達(dá)率(50.0%，6/12)明顯低于Ⅲ+Ⅳ期組(93.8%，15/16，P<0.05),腫瘤高分化組的MMP-9陽性表達(dá)率(33.3%，1/3)明顯低于低分化組(100%，12/12，P<0.01)。胰腺癌組織中RECK與MMP-9的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.536，P<0.01)。結(jié)論胰腺癌組織中RECK呈低表達(dá)，MMP-9呈高表達(dá)，RECK、MMP-9聯(lián)合檢測(cè)可以作為胰腺癌臨床分期評(píng)估的指標(biāo)。

胰腺腫瘤； 基質(zhì)金屬蛋白酶9； RECK； 免疫組織化學(xué)

RECK(reversion inducing cysteine rich protein with kazal motifs, RECK)是1998年發(fā)現(xiàn)的一種腫瘤抑制基因，它在轉(zhuǎn)錄后水平抑制基質(zhì)金屬蛋白酶的表達(dá)與活性，從而抑制腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[1]。基質(zhì)金屬蛋白酶(matrix metalproteinases,MMPs)是一類能降解細(xì)胞外基質(zhì)及血管基膜的重要蛋白酶類，具有促進(jìn)腫瘤侵襲及血管形成的作用，其中MMP-9與腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移的關(guān)系密切。本實(shí)驗(yàn)采用免疫組化方法檢測(cè)RECK和MMP-9在胰腺癌中的表達(dá)，探討它們與胰腺癌臨床病理特征的關(guān)系。

材料和方法

一、一般材料

選擇青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科臨床病理資料齊全的胰腺導(dǎo)管腺癌組織蠟塊標(biāo)本28例，正常胰腺組織標(biāo)本10例。所有患者術(shù)前均未行放、化療。

二、方法

采用免疫組化染色PV6000方法。兔抗人RECK多克隆抗體(Santa Cruz公司)和兔抗人MMP-9多克隆抗體(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)1∶100稀釋，PBS代替一抗作為陰性對(duì)照。

RECK及MMP-9陽性表達(dá)為胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒。在高倍鏡下隨機(jī)觀察5個(gè)視野，按著色深淺評(píng)分：無著色，0分；淡黃色，1分；棕黃色，2分；棕褐色，3分。按陽性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：0～5%，0分；>5%～25%，1分；>25%～50%，2分；>50%，3分。兩項(xiàng)評(píng)分相乘，0～1分為-，2～3分為+，4～7分為++，8～12分為+++。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各指標(biāo)之間差異采用χ2檢驗(yàn)或Fisher確切概率法，RECK和MMP-9之間相關(guān)性采用spearman相關(guān)分析，以P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

結(jié) 果

一、RECK的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

RECK的表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì)(圖1a)。胰腺癌RECK陽性表達(dá)率為46.4%，正常胰腺為90.0%，差異顯著(P<0.05)。RECK表達(dá)與胰腺癌患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、分化程度間無關(guān)(P>0.05)，但TNM Ⅰ、Ⅱ期患者的陽性率明顯高于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05)，無轉(zhuǎn)移患者的陽性率明顯高于有轉(zhuǎn)移患者(P<0.05，表1)。

表1RECK、MMP-9在胰腺癌的表達(dá)率及與臨床病理特征的關(guān)系

病理特征例數(shù)RECK陽性例數(shù)(%)P值MMP-9陽性例數(shù)(%)P值性別 男229(40.9)0.37218(81.8)0.144 女64(66.7)3(50.0)年齡 ≥60155(33.3)0.2559(60.0)0.084 <60138(61.5)12(92.3)腫瘤大小 ≥5cm85(62.5)0.4104(50.0)0.142 <5cm208(40.0)17(85.0)分化程度 高分化32(66.7)0.1331(33.3)0.006 中分化138(61.5)8(61.5) 低分化123(25.0)12(100)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 有123(25.0)0.06711(91.7)0.184 無1610(62.5)10(62.5)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移 有81(12.5)0.0388(100)0.075 無2012(60.0)13(65.0)腫瘤分期 Ⅰ+Ⅱ129(75.0)0.0206(50.0)0.023 Ⅲ+Ⅳ164(25.0)15(93.8)腫瘤部位 胰頭189(50.0)0.37015(83.3)0.171 胰體51(20.0)4(80.0) 胰尾53(60.0)2(40.0)

二、MMP-9的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

MMP-9也主要表達(dá)于腫瘤細(xì)胞胞質(zhì)(圖1b)。胰腺癌MMP-9的陽性表達(dá)率為75.0%，正常胰腺為20.0%，差異顯著(P<0.01)。MMP-9的表達(dá)與患者的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移之間無關(guān)(P>0.05)，但TNM Ⅰ、Ⅱ期患者的MMP-9陽性率明顯低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05),高分化腫瘤的陽性率明顯低于低分化者(P<0.01，表1)。胰腺癌組織中RECK和MMP-9的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.536，P<0.01)。

圖1RECK(a)和MMP-9(b)在胰腺癌組織中的表達(dá)(免疫組化 ×400)

討 論

許多研究表明，RECK在大部分正常組織或正常細(xì)胞株中高表達(dá)，但在許多腫瘤組織或腫瘤細(xì)胞株中低表達(dá)甚至不表達(dá)，RECK的表達(dá)量與腫瘤侵襲力呈負(fù)相關(guān)。Song等[2]報(bào)道，52%的胃癌組織RECK表達(dá)缺失，且與腫瘤分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。宋國慶等[3]報(bào)道，胃癌RECK的表達(dá)率為51.9%，并隨腫瘤浸潤深度的加深、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的發(fā)生、臨床分期的提高以及腫瘤分化程度的降低而降低。Furumoto等[4]報(bào)道，肝癌組織RECK高表達(dá)者與較好的預(yù)后顯著相關(guān)。李晟磊等[5]報(bào)道，食管癌RECK的表達(dá)明顯低于正常食管組織，且與腫瘤的分化程度、浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Masui等[6]報(bào)道，胰腺癌組織RECK表達(dá)率為52%，明顯低于癌旁組織，且與腫瘤的侵襲能力、預(yù)后成反比。本結(jié)果顯示，胰腺癌組織RECK表達(dá)明顯低于正常胰腺組織。RECK表達(dá)與患者TNM分期、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān)。提示RECK基因表達(dá)的缺失可能與胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移有關(guān)。

MMPs是降解基膜和細(xì)胞外基質(zhì)的主要酶類，其中MMP-9還可以通過促進(jìn)新生血管的生成而促進(jìn)腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移。Nagakawa等[7]報(bào)道，32例胰腺癌組織MMP-9的陽性率為50%，有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者的陽性率明顯高于無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者。Pryczynicz等[8]報(bào)道，胰腺癌MMP-9陽性率為36%，且與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。本結(jié)果表明，胰腺癌MMP-9表達(dá)顯著高于正常胰腺組織,且與腫瘤分化程度、臨床分期呈正相關(guān)。提示MMP-9的表達(dá)也與胰腺癌的侵襲過程有關(guān)。本組胰腺癌中MMP-9表達(dá)與遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移無關(guān)，與文獻(xiàn)報(bào)道不一致，不排除是由于樣本量較少所致。

研究發(fā)現(xiàn)[1]，在惡性細(xì)胞株中恢復(fù)RECK的表達(dá)，除能抑制細(xì)胞浸潤外，還伴有MMP-9的分泌減少，提示RECK可能對(duì)MMP-9產(chǎn)生負(fù)調(diào)節(jié)作用。本研究結(jié)果顯示，RECK和MMP-9在胰腺癌腫瘤組織中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，提示RECK蛋白可能通過抑制MMP-9表達(dá)來發(fā)揮抑制胰腺癌的侵襲作用。

[1] Takahashi C，Sheng Z，Horan TP,et al．Regulation of matrix metalloproteinase-9 and inhibition of tumor invasion bv the membrane anchored glycoprotein RECK．Proc Natl Acad Sci USA，1998，95:13221-13226.

[2] Song SY，Son HJ，Nam E，et al．Expression of reversion-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs (RECK)as a prognostic indicator in gastric cancer．Eur J Cancer，2006，42:101-108.

[3] 宋國慶,王強(qiáng). RECK，MMP-9及TGF-β1在胃癌組織中的表達(dá)及其相互關(guān)系.世界華人消化雜志，2007,15:1731-1737.

[4] Furumoto K，Arii S，Mori A，et al．RECK gene expression in hepatocellular carcinoma：correlation with invasion-related clinicopathological factors and its clinical significance．Reverse-inducing-cysteine-rich protein with Kazal motifs.Hepatology，2001,33：189-195．

[5] 李晟磊,趙秋民,劉宗文，等.食管鱗癌中RECK和MMP-9蛋白表達(dá)相關(guān)性及臨床病理意義.世界華人消化雜志，2007，15:1082-1086.

[6] Masui T，Doi R，Koshiba T，et al．RECK expression in pancreatic cancer:its correlation with lower invasiveness and better prognosis．Clin Cancer Res，2003，9:1779-1784.

[7] Nagakawa Y, Aoki T，Kasuya K，et al．Histologic features of venous invasion，expression of Vascular endothelial growth factor and matrix metalloproteinase-2 and matrix metalloproteinase-9，and the relation with liver metastasis in pancreatic cancer．Pancreas，2002，24:169-178．

[8] Pryczynicz A,Guzinska-Ustymowicz K,Dymicka-Piekarska V,et al.Expression of matrix metalloproteinase 9 in pancreatic ductal carcinoma is associated with tumor metastasis formation.Folia Histochem Cytobiol,2007,45:37-40.

2009-11-06)

(本文編輯：屠振興)

ExpressionofRECKandMMP-9inpancreaticcanceranditsclinicopathologicalsignificance

YESu-su,TIANZi-bin,WEILiang-zhou,ZHAOQing-xi,KONGXin-juan,LIYu-jun.

DepartmentofGastroenterology,AffiliatedHospital,MedicalCollege,QingdaoUniversity,Qingdao266003,China

Correspondingauthor:TIANZi-bin,Email:tianzb@qyfy.cn

ObjectiveTo investigate the expression of RECK and MMP-9 in pancreatic cancer and to explore the relationship between RECK, MMP-9 expression and the clinicopathological characteristics.MethodsPV6000 immunohistochemical method was used to detect the expression of RECK and MMP-9 in 28 cases of pancreatic cancer and 10 cases of normal pancreatic tissue. All the statistical analyses were performed by using SPSS 13.0 statistical software to determine the relationship between RECK, MMP-9 expression and the clinicopathological characteristics.ResultsThe overall positive rate of RECK espression was 46.43% (13/28) in pancreatic cancer, which was significantly lower than that in normal pancreatic tissue (90%, 9/10). The positive rate of RECK espression in Ⅰ+Ⅱ clinical stage (75.0%,9/12) was significantly higher than that in Ⅲ+Ⅳ stage (25.0%,4/16P<0.05). The positive rate of RECK expression in cases without distant metastases (60.0%,12/60) was significantly higher than that in cases with distant metastasis (12.5%, 1/8,P<0.05). The overall positive rate of MMP-9 was 75% (21/28) in pancreatic cancer, and 20% (2/10) in normal pancreatic tissue. The comparison between these two groups indicated a significant difference (P<0.01). The positive rate of MMP-9 in Ⅰ+Ⅱclinical stage(50.0%,6/12) was significantly lower than that in Ⅲ+Ⅳ stage (93.8,15/16,P<0.05). The positive rate of MMP-9 in well differentiation group(33.3%,1/3) was significantly lower than that in poor differentiation group (100%,12/12,P<0.01). The expression of RECK was negatively correlated with the expression of MMP-9(r=-0.536,P<0.01).ConclusionsRECK is lowly expressed in pancreatic cancer, but MMP-9 is highly expressed. RECK and MMP-9 may serve as important markers in the evaluation of tumor stage.

Pancreatic neoplasms; Matrix metalloproteinase-9; RECK; Immunohistochemistry

10.3760/cma.j.issn.1674-1935.2010.03.015

266003 青島，青島大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院消化內(nèi)科

田字彬，Email:tianzb@qyfy.cn