洛伐他汀膠囊質(zhì)量控制的高效液相色譜方法

韓媛媛,趙燕燕,李月秋,杜光玲,白潔

(河北大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,河北保定 071000)

洛伐他汀膠囊質(zhì)量控制的高效液相色譜方法

韓媛媛,趙燕燕,李月秋,杜光玲,白潔

(河北大學(xué)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心,河北保定 071000)

利用高效液相色譜法(HPLC)建立洛伐他汀膠囊質(zhì)量控制方法.采用VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d)柱,流動相為V(甲醇)∶V(磷酸緩沖溶液(p H=4.0))=78∶22,流速1.0 mL/min,檢測波長238 nm,進(jìn)樣體積10μL,柱溫為室溫.洛伐他汀在0.004～1.000 g/L內(nèi),峰面積與質(zhì)量濃度呈良好線性關(guān)系(r=0.999 9),平均回收率99.19%(n=9),方法精密度RSD為0.32%(n=6),最小檢出限3 ng.該方法簡單,準(zhǔn)確,重現(xiàn)性好,可應(yīng)用于洛伐他汀膠囊的質(zhì)量控制.

洛伐他汀膠囊;高效液相色譜法;質(zhì)量控制

洛伐他汀(lovastatin)是羥甲戊二酸單酰輔酶A(HM G-CoA)還原酶抑制劑[1],屬常見的降血脂藥物.而且隨著各方面研究開展,證實(shí)洛伐他汀除了有調(diào)脂作用外,還有許多非調(diào)脂作用[2].測定洛伐他汀的分析方法主要有紫外分光光度法(UV)[3-4]和HPLC法[5-7].HPLC方法穩(wěn)定,重現(xiàn)性好,目前廣泛應(yīng)用于藥物質(zhì)量控制領(lǐng)域[8-9].本研究建立的洛伐他汀膠囊HPLC測定方法,具有流動相體系簡單、分離度好、靈敏度高的特點(diǎn),經(jīng)2005版藥典中規(guī)定的藥品質(zhì)量方法進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果準(zhǔn)確可靠,可用于洛伐他汀膠囊含量和有關(guān)物質(zhì)的同時測定以及質(zhì)量控制.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器與試藥

LC-10A Tvp高效液相色譜儀(日本島津公司),SPD-M 10vp檢測器,Class-vp工作站;洛伐他汀對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號:100600-200301,純度為99.4%);洛伐他汀膠囊對照藥品(黑龍江肇東華富藥業(yè)有限責(zé)任公司,批號:040901);洛伐他汀膠囊樣品(實(shí)驗(yàn)室自制,規(guī)格20 mg);甲醇(色譜純,天津康科德科技有限公司);其他試劑均為分析純.

1.2 色譜條件

色譜柱:Shim-pack VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d.);流動相:V(甲醇)∶V(磷酸緩沖溶液(p H=4.0))=78∶22;流速1.0 mL/min;進(jìn)樣體積10μL;檢測波長238 nm;室溫測定.

1.3 溶液的制備

精密稱取洛伐他汀對照品適量,加流動相使溶解并制成每1 m L含洛伐他汀0.2 m g的溶液,作為對照品溶液;精密稱取洛伐他汀膠囊內(nèi)容物適量(相當(dāng)于洛伐他汀20 m g),置100 m L量瓶中,加流動相約80 m L,振搖使溶解,用流動相稀釋至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為供試品溶液;按處方比例稱取模擬空白輔料適量,置10 m L容量瓶中,加流動相稀釋至刻度,搖勻,濾過,作為空白對照溶液.

有關(guān)物質(zhì)測試液配制:取上述供試品溶液4 m L,在低溫加熱條件下,分別加入0.1 mo l/L NaOH或0.1 mo l/L HCl各1 m L放置1 h,用酸或堿中和后,用流動相稀釋至原體積,作為堿破壞和酸破壞樣品;量取供試品溶液4 m L,在100℃水浴中加熱0.5 h近干,用流動相稀釋至原體積,作為高溫破壞樣品;量取供試品溶液4 mL,加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為30%雙氧水放置2 h后用流動相補(bǔ)充至原體積,作為氧化破壞樣品.

1.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密稱取對照品適量,用流動相制成0.004,0.04,0.1,0.2,0.6,1 g/L系列質(zhì)量濃度的溶液,按“1.2”色譜條件進(jìn)樣測定,記錄峰面積,以峰面積對進(jìn)樣量回歸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線.

2 結(jié)果與分析

2.1 檢測波長的確定

分別稱取3批供試樣品、對照品以及按處方比例配制的模擬空白輔料適量,配制供試品溶液、對照溶液及空白輔料溶液,并在200～400 nm的波長內(nèi)進(jìn)行紫外掃描.3批樣品均在230,238與246 nm處有紫外吸收,其中在238 nm處為最大吸收,與對照品測定結(jié)果一致.輔料在此掃描范圍內(nèi)沒有吸收,對方法無干擾.故選取238 nm做為檢測波長.

2.2 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)

對空白輔料溶液、對照品溶液、供試品溶液,按“1.2”色譜條件進(jìn)行色譜分析,HPLC譜圖見圖1.結(jié)果表明,輔料對洛伐他汀膠囊含量測定無干擾.

2.3 方法專屬性實(shí)驗(yàn)

分別對堿破壞、酸破壞、高溫破壞、氧化破壞有關(guān)物質(zhì)測試液按“1.2”色譜條件進(jìn)行色譜分析,HPLC譜圖見圖2.由圖可知,在堿、酸、熱、氧化等破壞條件下得到的降解產(chǎn)物在該色譜條件下均能與洛伐他汀峰得到良好分離.結(jié)果表明,本文建立的HPLC法具有良好的專屬性.

圖1 系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)色譜Fig.1 Chromatogram of system suitability

圖2 HPLC方法專屬性考察色譜Fig.2 Chromatogram sof the exclusion inspection of HPLCmethod

2.4 線性范圍與檢出限

按“1.4”繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,所得線性方程為y=3.012×107x+1.071×105,r=0.999 9.結(jié)果顯示:洛伐他汀在質(zhì)量濃度0.004～1.000 g/L內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系.

取洛伐他汀對照品適量,分別用流動相配制成系列濃度的溶液,進(jìn)樣,按3倍信噪比計(jì)算檢測限,得到最低檢出限為3 ng.

2.5 精密度實(shí)驗(yàn)

取按“1.3”制備的對照品溶液,照“1.2”色譜條件進(jìn)行色譜分析,并記錄色譜峰面積,連續(xù)進(jìn)樣6次,計(jì)算峰面積的RSD=0.32%,符合精密度實(shí)驗(yàn)要求.

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

按“1.3”方法分別配制供試品溶液6份,照色譜條件進(jìn)行分析,并記錄洛伐他汀峰面積,其RSD=0.99%(n=6),結(jié)果表明測定方法重現(xiàn)性良好.

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

按“1.3”方法配制供試品溶液,分別在0,2,4,8,12 h進(jìn)樣,考察溶液的穩(wěn)定性.計(jì)算峰面積的RSD=0.074%(n=6),結(jié)果表明,在12 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定.

2.8 回收率實(shí)驗(yàn)

精密稱取洛伐他汀對照品,按供試品溶液質(zhì)量濃度(0.2 mg/m L)的80%,100%和120%分別配制低、中、高3種質(zhì)量濃度的溶液各3份(A,B,C),其中每份中分別按比例加入一定量的輔料,照“1.2”色譜條件進(jìn)樣測定,計(jì)算回收率,結(jié)果見表1.

表1 回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果(n=9)Tab.1 Results of recovery test(n=9)

2.9 有關(guān)物質(zhì)測定

精密稱取洛伐他汀膠囊內(nèi)容物和洛伐他汀標(biāo)準(zhǔn)品適量,分別加流動相制成每1 mL中約含洛伐他汀0.2 m g的供試品溶液和每1 m L中約含洛伐他汀2μg的對照品溶液.照“1.2”色譜條件進(jìn)樣20μL.供試品溶液的色譜圖中最大雜質(zhì)峰面積不得大于對照溶液主峰面積的30%,各雜質(zhì)峰面積的和不得大于對照溶液的主峰面積.結(jié)果見表2,表明:3批洛伐他汀膠囊的有關(guān)物質(zhì)測定結(jié)果符合以上相關(guān)規(guī)定.

2.10 樣品含量測定

對自制3批樣品及對照藥品按“1.3”方法配制供試品溶液,照“1.2”色譜條件進(jìn)樣分析,洛伐他汀占標(biāo)示量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)結(jié)果見表2.

表2 有關(guān)物質(zhì)和質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果Tab.2 Results of content and related substance determ ination

∑A雜代表各雜質(zhì)峰面積的和占對照溶液的主峰面積的百分?jǐn)?shù);A最大雜質(zhì)代表最大雜質(zhì)峰面積占對照溶液主峰面積的百分?jǐn)?shù).

3 結(jié)論

本研究應(yīng)用HPLC法測定洛伐他汀膠囊的含量和有關(guān)物質(zhì),方法簡單可靠,重現(xiàn)性好,可作為洛伐他汀的檢測方法,用于洛伐他汀膠囊的質(zhì)量控制.通過對本實(shí)驗(yàn)室自制洛伐他汀膠囊含量和有關(guān)物質(zhì)的檢查,結(jié)果均符合藥典相關(guān)規(guī)定,與市售對照藥品含量相近,且不同批號之間無明顯差異,穩(wěn)定性較好,可向藥廠推廣應(yīng)用.

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(責(zé)任編輯:梁俊紅)

Quality Control of Lovastatin Capsule by HPLC

HAN Yuan-yuan,ZHAO Yan-yan,LIYue-qiu,DU Guang-ling,BAIJie
(Experimental Center of Medicine,Hebei University,Baoding 071000,China)

The quality contro l method was established by determinating the content and related substance of lovastatin capsule by HPLC.The VP-ODS(150 mm×4.6 mm i.d)co lum n was used and the mobile phase was consisted of V(methano l)∶V(p H=4.0 phosphate)=78∶22,the flow rate was 1.0 m L/min,the detective wavelength was238 nm,the injiection vo lum n was10μL,the column temperatu re w as room temperature.A good linearity(r=0.999 9)w as obtained in the concentration range of 0.004～1.000 g/L,and the average recovery of lovastatin was 99.19%(n=9).The method p recision was 0.32%(n=6),and the lowest examination limitswas3 ng.Themethod is simp le,accurate and rep roducible.It can be app lied fo r the quality control of lovastatin capsule.

lovastatin cap sule;HPLC;quality contro l

R 917

A

1000-1565(2010)06-0662-05

2010-02-20

河北省教育廳資助項(xiàng)目(2009315);河北省衛(wèi)生廳資助項(xiàng)目(20090570);河北省中醫(yī)藥管理局資助項(xiàng)目(2008072);保定市科技局科學(xué)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目(09ZF010)

韓媛媛(1980—),女,河北固安人,河北大學(xué)講師,主要從事色譜分析方向的研究.

趙燕燕(1960—),女,天津人,河北大學(xué)教授,主要從事將現(xiàn)代分離技術(shù)用于藥學(xué)、臨床、環(huán)境等方面的研究工作.