• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    水產(chǎn)品中添加劑多聚磷酸鹽抑菌效果的研究

    2010-10-19 05:26:12胡興娟徐君輝貝文聯(lián)吳祖芳
    食品科學(xué) 2010年21期
    關(guān)鍵詞:抑菌劑三聚磷酸鹽

    沈 飚,胡興娟,徐君輝,貝文聯(lián),吳祖芳

    (1.舟山出入境檢驗檢疫局,浙江 舟山 316000;2.寧波大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院,浙江 寧波 315211)

    水產(chǎn)品中添加劑多聚磷酸鹽抑菌效果的研究

    沈 飚1,胡興娟1,徐君輝1,貝文聯(lián)1,吳祖芳2

    (1.舟山出入境檢驗檢疫局,浙江 舟山 316000;2.寧波大學(xué)生命科學(xué)與生物工程學(xué)院,浙江 寧波 315211)

    目的:分析多聚磷酸鹽中主要抑菌成分,并找出臨界抑菌濃度。方法:利用微生物法,用pH值分別為6.0、7.2、8.0的檢測瓊脂研究正磷酸鹽、三聚磷酸鹽、焦磷酸鹽和三偏磷酸鹽對枯草芽孢桿菌和滕黃微球菌的抑菌作用。結(jié)果:三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽是影響抑菌效果的主要因素,其引起抑菌劑陽性的臨界質(zhì)量濃度分別為0.2g/100mL 和0.2g/100mL,用P2O5計分別為1157.56mg/kg和1601.43mg/kg。通過對三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽進(jìn)行兩因素三水平正交試驗結(jié)果分析,發(fā)現(xiàn)兩者互存時,只要有一種質(zhì)量濃度達(dá)到臨界值就會產(chǎn)生抑菌陽性效果(抑菌圈寬度≥2mm)。結(jié)論:通過控制焦磷酸鹽和三聚磷酸鹽使用量,可降低由多聚磷酸鹽引起的抑菌劑陽性風(fēng)險。

    多聚磷酸鹽;三聚磷酸鹽;焦磷酸鹽;抑菌;微生物方法

    Abstract:Objective:To find out which ones of four polyphosphates are antimicrobial molecules and to determine their critical antimicrobial concentrations. Methods:Liquid agars at different pH values (6.0, 7.2 and 8.0) were used to test the inhibitory effects of orthophosphate, tripolyphosphate, pyrophosphate and trimetaphosphate onBacillus subtilisandMicrococcus luteus.Results:Two of the four polyphosphates were an antimicrobial, including tripolyphosphate and pyrophosphate. Their critical concentrations causing antimicrobial positivity were 0.2 g/100mL and 0.3 g/100 mL (1157.56 mg/kg and 1601.43 mg/kg,calculated as P2O5), respectively. A two-factor, three-level orthogonal array design was employed to evaluate the synergistic antimicrobial effect of tripolyphosphate and pyrophosphate, and the results revealed that as long as one of the two polyphosphates simultaneously added had a concentration in their mixed solution equalling or exceeding its own critical concentration, a positive antimicrobial result (inhibition zone equalling or exceeding 2 mm) could be observed. Conclusion:The risk of antimicrobial positivity caused by polyphosphates can be reduced by controlling the amounts of added tripolyphosphate and pyrophosphate.

    Key words:polyphosphate;tripolyphosphate;pyrophosphate;antimicrobial;microbiologic method

    多聚磷酸鹽類添加劑作為保水劑和品質(zhì)改良劑在水產(chǎn)品加工中被廣泛應(yīng)用,具有保持水分、改善口感色澤、增重等作用[1-2]。多聚磷酸鹽會促進(jìn)血液凝結(jié),其降解產(chǎn)物磷酸鹽也會增大攝入者心腦血管疾病發(fā)生的可能性[3-4],因此,歐盟等國對進(jìn)口蝦仁有限量要求(5g/kg)。另據(jù)研究表明多聚磷酸鹽具有抑菌作用[5-6],近幾年我國出口蝦仁多次被通報抑菌劑超標(biāo),主要是由添加抑菌劑多聚磷酸鹽所致[7]。因此如何突破歐盟抑菌劑技術(shù)壁壘成為水產(chǎn)出口企業(yè)關(guān)注的新問題。

    微生物法的樣品前處理簡單、操作簡便、靈敏度高,在一定范圍內(nèi)有良好的劑量-抑菌關(guān)系,被廣泛應(yīng)用于抗生素的抑菌效果檢測[8-10]??莶菅挎邨U菌既對抗革蘭氏陽性菌藥物敏感,又對抗革蘭氏陰性菌藥物敏感,同時還有芽孢的特性,能耐受高溫、干燥和滲透壓的影響,因此具有較好的穩(wěn)定性、安全性,對環(huán)境及人畜無污染。滕黃微球菌對多種藥物具有較好的敏感性[11]。此外,不同pH值培養(yǎng)基影響藥物敏感性。因此,本實驗以枯草芽孢桿菌和滕黃微球菌作為目標(biāo)敏感菌,通過微生物法研究多聚磷酸鹽主要成分正磷酸鹽、三聚磷酸鹽、三偏磷酸鹽和焦磷酸鹽在不同pH值培養(yǎng)基上的抑菌效果。

    1 材料與方法

    1.1 材料與試劑

    枯草芽孢桿菌(ATCC6633)、滕黃微球菌(ATCC9341) 中國藥品生物制品檢定所。

    檢測瓊脂(pH6.0)、檢測瓊脂(pH7.2)、檢測瓊脂(pH8.0) 德國Merker公司;營養(yǎng)瓊脂 北京陸橋公司;標(biāo)準(zhǔn)品:正磷酸鹽、三聚磷酸鹽、焦磷酸鹽、三偏磷酸鹽 Sigma公司。

    1.2 儀器與設(shè)備

    BK-6160培養(yǎng)箱、FISHER-LEGEND MACH1.6R高速冷凍離心機(jī) Thermo公司;MSI渦旋混合儀 德國IKA公司;LDZX-50KBS高壓滅菌鍋 上海申安醫(yī)療器械廠;Logic A2生物安全柜 美國Labconco公司。

    1.3 方法

    1.3.1 菌株處理和平板制備方法

    枯草芽孢桿菌懸液制備:將枯草芽孢桿菌營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物用適量滅菌生理鹽水洗滌菌苔,制成懸液,用吸管將此懸液接種于盛有100mL普通營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的克氏瓶中,在35~37℃條件下培養(yǎng),鏡檢芽孢數(shù)達(dá)85%以上停止培養(yǎng)。用40mL滅菌生理鹽水洗下菌苔,制成懸液,65℃水浴加熱30min將菌體殺死,經(jīng)3000r/min離心20min,棄去上清液,如此重復(fù)洗滌芽孢兩次,然后用適量滅菌生理鹽水制成菌懸液。置2~8℃冰箱中保存。

    滕黃微球菌懸液制備:取滕黃微球菌的營養(yǎng)瓊脂斜面培養(yǎng)物,用適量的滅菌生理鹽水洗滌菌苔,制成懸液,用吸管移至盛有營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基克氏瓶中,26~27℃培養(yǎng)18~24h后,用滅菌生理鹽水洗下菌苔,制成菌懸液。置2~8℃冰箱中保存。

    Bs6平板:將枯草芽孢桿菌孢子懸浮液接種至pH6檢測瓊脂液中,調(diào)節(jié)濃度為5×104個孢子/mL瓊脂。取5mL被接種過的瓊脂液倒在平板上,備用。

    Bs7.2平板:將枯草芽孢桿菌孢子懸浮液接種至pH7.2檢測瓊脂液中,調(diào)節(jié)濃度為5×104個孢子/mL瓊脂。取5mL被接種過的瓊脂液倒在平板上,然后放在冷的平板上冷卻,備用。

    Bs8平板:將枯草芽孢桿菌孢子懸浮液接種至pH8檢測瓊脂液中,調(diào)節(jié)濃度為5×104個孢子/mL瓊脂。取5mL被接種過的瓊脂液倒在平板上,然后放在冷的平板上冷卻,備用。

    MI8平板:將滕黃微球菌孢子懸浮液接種至pH8檢測瓊脂液中,直至濃度為5×104個孢子/mL瓊脂。5mL被接種過的瓊脂液倒在平板上,然后放在冷的平板上冷卻,備用。

    1.3.2 抑菌劑檢測方法

    每一個樣品準(zhǔn)備Bs6、Bs7.2、Bs8和MI8四個平板,每一個平板上放置直徑為6mm的兩張紙片。吸取10μL試劑加在紙片上,在室溫(25℃左右)放置10min,以便使供試樣液能擴(kuò)散至培養(yǎng)基。Bs6、Bs7.2、Bs8平板(30±1)℃培養(yǎng)(20±2)h以及MI8平板(36±1)℃培養(yǎng)(26±2)h后用游標(biāo)卡尺測量出現(xiàn)的抑菌圈的寬度。同時在滕黃色微球菌平板上加紅霉素標(biāo)準(zhǔn)紙片(0.0025μg/片)做陽性對照,在枯草芽孢桿菌上加卡那霉素標(biāo)準(zhǔn)紙片(0.05μg/片)做陽性對照,6mm標(biāo)準(zhǔn)空白紙片加10μL無菌水做陰性對照。如果抑菌圈的寬度大于2mm則認(rèn)為抑菌劑陽性。如果結(jié)果可疑(同一樣品的檢測結(jié)果為一個陽性,另一個陰性),實驗必須重復(fù),如果第二次實驗仍然可疑,則判為陰性。

    1.3.3 多聚磷酸鹽各成分抑菌效果檢測

    將正磷酸鹽、焦磷酸鹽、三聚磷酸鹽和三偏磷酸鹽配制成0.1、0.2、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、7.0、10.0g/100mL不同質(zhì)量濃度,根據(jù)抑菌劑檢測方法分別進(jìn)行抑菌效果檢測,以空白作對照,測定抑菌圈寬度。

    1.3.4 磷酸鹽類質(zhì)量濃度換算為以P2O5計的方法

    三聚磷酸鹽質(zhì)量濃度以P2O5計的換算公式:M/367.86×141.94×3/2

    焦磷酸鹽質(zhì)量濃度以P2O5計的換算公式:M/265.90×141.94×2/2

    式中,M:如質(zhì)量濃度0.2g/100mL,換算為2000mg/kg,M即為2000。

    1.3.5 焦磷酸鹽和三聚磷酸鹽聯(lián)合作用對抑菌效果的影響

    對三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽進(jìn)行兩因素三水平的正交試驗設(shè)計,研究其對抑菌效果的影響。

    2 結(jié)果與分析

    2.1 多聚磷酸鹽各成分抑菌效果檢測

    對水產(chǎn)品添加劑的單一成分,包括正磷酸鹽、三聚磷酸鹽、焦磷酸鹽和三偏磷酸鹽,進(jìn)行抑菌效果檢測,結(jié)果見表1~4。正磷酸鹽、偏磷酸鹽產(chǎn)生抑菌效果時的質(zhì)量濃度太高,在實際加工中不用。因此,蝦仁產(chǎn)生抑菌劑是多聚磷酸鹽中三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽抑菌效果產(chǎn)生的。在三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽的質(zhì)量濃度分別為0.2、0.3g/100mL時,產(chǎn)生抑菌圈寬度為2.0mm。

    表1 不同質(zhì)量濃度正磷酸鹽產(chǎn)生的抑菌效果Table 1 Antimicrobial activity of orthophosphate at different concentrations mm

    表2 不同質(zhì)量濃度三聚磷酸鹽產(chǎn)生的抑菌效果Table 2 Antimicrobial activity of tripolyphosphate at different concentrations mm

    表3 不同質(zhì)量濃度焦磷酸鹽產(chǎn)生的抑菌效果Table 3 Antimicrobial activity of pyrophosphate at different concentrations mm

    表4 不同質(zhì)量濃度三偏磷酸鹽產(chǎn)生的抑菌效果Table 4 Antimicrobial activity of trimetaphosphate at different concentrations mm

    2.2 三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽抑菌效果臨界測試

    通過對三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽抑菌效果檢測發(fā)現(xiàn),質(zhì)量濃度分別為0.2g/100mL和0.3g/100mL時,在Bs7.2平板上產(chǎn)生寬度為2mm的抑菌圈。因此選擇Bs7.2平板研究三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽抑菌效果臨界測試、結(jié)果見表5。三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽的質(zhì)量濃度分別為0.2g/100mL和0.3g/100mL時,均可產(chǎn)生2.0mm抑菌圈。

    表5 三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽抑菌效果臨界測試Table 5 Critical antimicrobial concentrations of pyrophosphate and trimetaphosphate mm

    出口蝦仁多聚磷酸鹽的檢測結(jié)果是以五氧化二磷含量計算的。因此,本研究將三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽抑菌效果臨界質(zhì)量濃度換算為以五氧化二磷計。這兩種鹽的抑菌效果臨界值以P2O5計分別為1157.56mg/kg和1601.43mg/kg。

    2.3 焦磷酸鹽和三聚磷酸鹽交互作用對抑菌效果的影響

    不同焦磷酸鹽和三聚磷酸質(zhì)量鹽濃度有不同的抑菌效果,為了分析兩種磷酸鹽不同質(zhì)量濃度配比對抑菌效果的影響,選取了3個不同質(zhì)量濃度在Bs7.2平板上進(jìn)行正交試驗,各因素水平見表6。

    表6 正交試驗因素水平表Table 6 Factor and levels in the orthogonal array design

    表7 正交試驗結(jié)果Table 7 Orthogonal array design arrangement and experimental results

    從表7可以得出,三聚磷酸鹽的質(zhì)量濃度為0.4g/100mL、焦磷酸鹽的質(zhì)量濃度為0.6g/100mL時,其抑菌效果最強(qiáng),抑菌圈寬度為5.6mm;三聚磷酸鹽的質(zhì)量濃度為0.2 g/100mL、焦磷酸鹽的質(zhì)量濃度為0.3g/100mL時,抑菌圈寬度為2.3mm,即兩者同時作用時,抑菌圈并非會成倍增長,而是在單獨(dú)作用的基礎(chǔ)上有所增強(qiáng);三聚磷酸鹽質(zhì)量濃度為0.2g/100mL,焦磷酸質(zhì)量濃度為0.15g/100mL時,產(chǎn)生2.0mm抑菌圈;三聚磷酸鹽質(zhì)量濃度為0.1g/100mL、焦磷酸鹽質(zhì)量濃度為0.3g/100mL時,產(chǎn)生2.2mm抑菌圈,表明當(dāng)二者有一種質(zhì)量濃度達(dá)到臨界濃度,就能產(chǎn)生抑菌陽性作用。

    3 結(jié) 論

    目前,對于多聚磷酸鹽已有較多的研究,但國內(nèi)的研究大多是基于其對肉品質(zhì)的改善[2,12]或用離子色譜法測定含量[13-14],國外已有針對多聚磷酸鹽對金黃色葡萄球菌[5]以及蠟狀芽孢桿菌[6]抑菌效果的研究,但沒見多聚磷酸鹽對枯草芽孢桿菌以及滕黃微球菌抑菌作用的相關(guān)報道。本實驗選用了兩種微生物法常用菌種,并考慮到培養(yǎng)基pH值對抑菌效果的影響,采用了四平板法對多聚磷酸鹽抑菌效果進(jìn)行研究。結(jié)果表明,Bs7.2平板上磷酸鹽的抑菌效果最為明顯,其他平板上只有三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽在高質(zhì)量濃度情況下才表現(xiàn)出抑菌作用。

    對多聚磷酸鹽的4種主要成分抑菌效果研究發(fā)現(xiàn),主要抑菌成分為三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽。通過進(jìn)一步研究表明,在質(zhì)量濃度分別為0.2g/100mL和 0.3g/100mL時,產(chǎn)生2mm抑菌圈,即抑菌效果呈陽性。表明當(dāng)二者有一種質(zhì)量濃度達(dá)到臨界濃度,就能產(chǎn)生抑菌劑陽性作用。將三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽抑菌效果臨界質(zhì)量濃度換算為以五氧化二磷計分別為1157.56mg/kg和1601.43mg/kg。因此對水產(chǎn)品進(jìn)行多聚磷酸鹽理化檢測后,當(dāng)三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽含量超過臨界數(shù)值時,存在抑菌劑超標(biāo)潛在風(fēng)險;當(dāng)水產(chǎn)品檢測出抑菌劑陽性時,三聚磷酸鹽和焦磷酸鹽含量可能偏高,則存在多聚磷酸鹽含量超標(biāo)的潛在風(fēng)險。

    綜上所述,本實驗采用微生物法對多聚磷酸鹽的抑菌效果檢驗,操作簡便、具有很大的廣泛性和可操作性,有助于突破國外技術(shù)壁壘。

    [1] 李苗云, 張秋會, 柳艷霞, 等. 不同磷酸鹽對肉品保水性的影響[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報, 2008, 42(4):439-442.

    [2] 馮慧, 薛長湖, 高瑞昌, 等. 多聚磷酸鹽在冷凍羅非魚肉中的降解及其對魚肉品質(zhì)的影響[J]. 食品工業(yè)科技, 2008(9):239-241; 265.

    [3] SMITH S A, MUTCH N J, BASKAR D, et al. Polyphosphate modulates blood coagulation and fibrinolysis[J]. Proc Natl Acad Sci U S A,2006, 103(4):903-908.

    [4] SMITH S A, MORRISSEY H. Polyphosphate enhances fibrin clot structure[J]. Blood, 2008, 112(7):2810-2816.

    [5] JEN C M, SHELEF L A. Factors affecting sensitivity ofStaphylococcus aureus196E to polyphosphates[J]. Appl Environ Microbiol, 1986, 52(4):842-846.

    [6] MAIER S K, SCHERER S, LOESSNER M J. Long-chain polyphosphate causes cell lysis and inhibitsBacillus cereusseptum formation, which is dependent on divalent cations[J]. Appl Environ Microbiol, 1999, 65:3942-3949.

    [7] 沈飚. 一起冷凍水產(chǎn)品中超量使用抑菌劑的調(diào)查研究[J]. 公共衛(wèi)生雜志, 2006, 22(增刊1):122.

    [8] HORIE M, KOBAYASHI H, ISHII R, et al. Simple and rapid microbiological method for determination of residual antibacterials in meat[J].Shokuhin Eiseigaku Zasshi, 2008, 49(3):168-176.

    [9] GILBERTSON T J, MEJEUR R L, YEIN F S, et al. Modified microbiological method for the screening of antibiotics in milk[J]. J Dairy Sci,1995, 78(5):1032-1038.

    [10] KUSANO T, KANDA M, KAMATA K, et al. Microbiological method for the detection of antibiotic residues in meat using mixed-mode, reverse-phase and cation-exchange cartridge[J]. Shokuhin Eiseigaku Zasshi,2004, 45(4):191-196.

    [11] 熊業(yè)華, 謝長清. 抗菌藥物殘留微生物學(xué)快速檢測方法研究進(jìn)展[C]//“食品安全質(zhì)量檢測技術(shù)”試刊論文集, 2008-06-30:5-9; 12.

    [12] 胡坤, 何志波, 何國富. 復(fù)合多聚磷酸鹽肉丸品質(zhì)改良劑的研制[J].肉類工業(yè), 2008(3):33-36.

    [13] 崔晗, 陳溪, 黃大亮, 等. 離子色譜法同時測定水產(chǎn)品中的檸檬酸鹽和多聚磷酸鹽[J]. 分析試驗室, 2009, 28(B5):67-69.

    [14] 王雪, 陳笑梅, 朱巖. 離子色譜法測定冷凍水產(chǎn)品中的多聚磷酸鹽[J]. 分析試驗室, 2008, 27(7):82-84.

    Antimicrobial Effect of Polyphosphate Additives in Fishery Product

    SHEN Biao1,HU Xing-juan1,XU Jun-hui1,BEI Wen-lian1,WU Zu-fang2
    (1. Zhoushan Eentry-Exit Inspection and Quaratine Burea, Zhoushan 316000, China;2. Faculty of Life Science and Biotechnology, Ningbo University, Ningbo 315211, China)

    TS254.7

    A

    1002-6630(2010)21-0054-04

    2010-02-22

    浙江省科技廳重大科技專項(2008C12076)

    沈飚(1967—),男,高級工程師,本科,主要從事微生物與食品安全研究。E-mail:sb@zs.ziq.gov.cn

    猜你喜歡
    抑菌劑三聚磷酸鹽
    綜合創(chuàng)新實驗:異三聚茚的合成,表征與應(yīng)用
    眼用制劑中抑菌劑的使用
    藥品評價(2020年1期)2020-12-17 10:19:15
    眼氨肽滴眼液中抑菌劑的含量測定及活性炭對抑菌劑的吸附性研究
    A close look at Nauru’s ecosystem
    香蕉枯萎病菌快速檢測技術(shù)
    AZ91D鎂合金磷酸鹽轉(zhuǎn)化膜的制備與表征
    三聚環(huán)保
    三聚磷酸二氫鋁/載硫硅藻土催化合成阿司匹林
    磁性Fe3O4@SiO2@ZrO2對水中磷酸鹽的吸附研究
    超高壓處理與添加復(fù)合磷酸鹽對海鱸魚保水性的比較
    99热这里只有精品一区 | www日本在线高清视频| 国产激情久久老熟女| 夜夜躁狠狠躁天天躁| 国产激情欧美一区二区| 色尼玛亚洲综合影院| 99在线视频只有这里精品首页| 中文字幕精品亚洲无线码一区 | 国产精品二区激情视频| 国产伦人伦偷精品视频| 免费电影在线观看免费观看| 一级a爱片免费观看的视频| 少妇粗大呻吟视频| www日本黄色视频网| 亚洲精品久久成人aⅴ小说| 久久精品影院6| 叶爱在线成人免费视频播放| 欧美黑人巨大hd| 亚洲人成电影免费在线| 久久亚洲真实| 嫁个100分男人电影在线观看| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 亚洲真实伦在线观看| 国产不卡一卡二| 久久久久久久久久黄片| 精品久久久久久久毛片微露脸| 视频在线观看一区二区三区| bbb黄色大片| 中出人妻视频一区二区| 脱女人内裤的视频| 成人国语在线视频| 成人午夜高清在线视频 | 精品熟女少妇八av免费久了| 国产黄a三级三级三级人| 国产精品九九99| 麻豆av在线久日| 国产麻豆成人av免费视频| 日本 欧美在线| 午夜老司机福利片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 国产主播在线观看一区二区| 一夜夜www| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 两个人免费观看高清视频| 香蕉av资源在线| 一区福利在线观看| 亚洲性夜色夜夜综合| 一个人观看的视频www高清免费观看 | 中文字幕另类日韩欧美亚洲嫩草| a在线观看视频网站| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 午夜福利在线观看吧| 国产国语露脸激情在线看| 无遮挡黄片免费观看| 99久久综合精品五月天人人| 色播在线永久视频| 成人18禁在线播放| 国产国语露脸激情在线看| 丝袜人妻中文字幕| 黄片小视频在线播放| 一级黄色大片毛片| 狂野欧美激情性xxxx| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成人三级做爰电影| 欧美另类亚洲清纯唯美| 一夜夜www| 久久久精品欧美日韩精品| 国产又色又爽无遮挡免费看| 欧美日本视频| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区| 亚洲中文字幕一区二区三区有码在线看 | 老汉色av国产亚洲站长工具| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 国产精品 欧美亚洲| 黄色片一级片一级黄色片| 中国美女看黄片| 午夜a级毛片| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 久久精品国产亚洲av高清一级| 一进一出抽搐动态| 精品熟女少妇八av免费久了| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 国产熟女xx| 亚洲专区国产一区二区| 国产在线观看jvid| 俄罗斯特黄特色一大片| 成年女人毛片免费观看观看9| 99久久综合精品五月天人人| 一级毛片高清免费大全| 中文亚洲av片在线观看爽| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 嫩草影院精品99| 亚洲精品久久国产高清桃花| 欧美一级毛片孕妇| 日本熟妇午夜| 国产99白浆流出| 久久国产乱子伦精品免费另类| 波多野结衣巨乳人妻| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 精品熟女少妇八av免费久了| 黄色视频不卡| 日本 av在线| 欧美性长视频在线观看| 中文字幕最新亚洲高清| 一夜夜www| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 大型黄色视频在线免费观看| 一级a爱视频在线免费观看| 国产精品1区2区在线观看.| 中文字幕精品免费在线观看视频| 久久久久免费精品人妻一区二区 | 又黄又粗又硬又大视频| 成人18禁在线播放| 亚洲av电影不卡..在线观看| 高清毛片免费观看视频网站| 老汉色av国产亚洲站长工具| 亚洲第一av免费看| 真人做人爱边吃奶动态| 国产片内射在线| 亚洲第一电影网av| 国产国语露脸激情在线看| 在线观看日韩欧美| 99久久国产精品久久久| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 免费一级毛片在线播放高清视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 一级片免费观看大全| 欧美黄色淫秽网站| 国产免费男女视频| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 搡老岳熟女国产| 天天添夜夜摸| 国产v大片淫在线免费观看| 国产熟女xx| 国产av在哪里看| 免费电影在线观看免费观看| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 这个男人来自地球电影免费观看| 男女那种视频在线观看| 欧美亚洲日本最大视频资源| 午夜福利免费观看在线| 国产人伦9x9x在线观看| 亚洲美女黄片视频| 精品久久久久久久末码| 亚洲国产欧美网| 人人妻人人澡欧美一区二区| 成人午夜高清在线视频 | 久久香蕉国产精品| 色av中文字幕| 999久久久精品免费观看国产| a级毛片a级免费在线| 久久草成人影院| 欧美成人午夜精品| 国产91精品成人一区二区三区| www.www免费av| 91大片在线观看| 国产亚洲av高清不卡| 免费电影在线观看免费观看| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 日日爽夜夜爽网站| 亚洲欧美日韩无卡精品| 日日干狠狠操夜夜爽| 十分钟在线观看高清视频www| 国产精品野战在线观看| 午夜福利18| 搡老妇女老女人老熟妇| www.精华液| 国产精品免费视频内射| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆 | 男女床上黄色一级片免费看| 国产国语露脸激情在线看| 午夜日韩欧美国产| 精品人妻1区二区| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 女人被狂操c到高潮| 欧美国产精品va在线观看不卡| 精华霜和精华液先用哪个| 久久久国产精品麻豆| 男女之事视频高清在线观看| 国产伦人伦偷精品视频| 一边摸一边抽搐一进一小说| 午夜福利在线观看吧| 无人区码免费观看不卡| 欧美日韩福利视频一区二区| 99热6这里只有精品| 十分钟在线观看高清视频www| 午夜精品久久久久久毛片777| 国产欧美日韩一区二区精品| 在线观看免费午夜福利视频| 日韩高清综合在线| 女警被强在线播放| 亚洲国产精品久久男人天堂| 日韩大尺度精品在线看网址| 亚洲午夜理论影院| 精品不卡国产一区二区三区| 欧美+亚洲+日韩+国产| 黄片小视频在线播放| 最近最新中文字幕大全免费视频| 色尼玛亚洲综合影院| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 免费高清视频大片| 国产日本99.免费观看| 欧美人与善性xxx| 日本 av在线| 午夜免费激情av| 大又大粗又爽又黄少妇毛片口| 日韩一本色道免费dvd| 深爱激情五月婷婷| 乱码一卡2卡4卡精品| 国产精品一区二区性色av| 国产男人的电影天堂91| 麻豆av噜噜一区二区三区| 欧美激情久久久久久爽电影| 神马国产精品三级电影在线观看| 变态另类成人亚洲欧美熟女| 欧美色视频一区免费| 可以在线观看的亚洲视频| 久久久久性生活片| 在线看三级毛片| 日本黄色片子视频| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 欧美潮喷喷水| 搞女人的毛片| 国产一级毛片七仙女欲春2| 蜜臀久久99精品久久宅男| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 综合色丁香网| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久久久久久久久丰满| 女同久久另类99精品国产91| 少妇的逼好多水| 色视频www国产| 三级经典国产精品| 少妇的逼好多水| 成年免费大片在线观看| 黄色日韩在线| a级毛片a级免费在线| 亚洲欧美精品综合久久99| 女同久久另类99精品国产91| 听说在线观看完整版免费高清| 欧美极品一区二区三区四区| av.在线天堂| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| а√天堂www在线а√下载| 日韩欧美国产在线观看| 黄片wwwwww| 午夜激情福利司机影院| 搞女人的毛片| 欧美精品国产亚洲| 国产亚洲欧美98| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久精品影院6| 欧美中文日本在线观看视频| 国产熟女欧美一区二区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 国产单亲对白刺激| 欧美区成人在线视频| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲中文字幕日韩| 色综合站精品国产| 九九爱精品视频在线观看| av.在线天堂| 亚洲av.av天堂| 在现免费观看毛片| av在线亚洲专区| 久久婷婷人人爽人人干人人爱| 最近手机中文字幕大全| 99久久精品国产国产毛片| 内射极品少妇av片p| 国产成年人精品一区二区| 久久99热6这里只有精品| av天堂中文字幕网| 日韩欧美免费精品| 国产乱人偷精品视频| 欧美不卡视频在线免费观看| 97超视频在线观看视频| 美女高潮的动态| 小说图片视频综合网站| 午夜亚洲福利在线播放| 亚洲丝袜综合中文字幕| 菩萨蛮人人尽说江南好唐韦庄 | 天堂影院成人在线观看| av天堂在线播放| 99久久无色码亚洲精品果冻| 国产色婷婷99| 黄片wwwwww| 99在线视频只有这里精品首页| 免费看光身美女| 亚洲熟妇中文字幕五十中出| 中出人妻视频一区二区| 日本-黄色视频高清免费观看| 国产精品女同一区二区软件| 丝袜喷水一区| 精品人妻视频免费看| 春色校园在线视频观看| 精品少妇黑人巨大在线播放 | 一本久久中文字幕| 成人综合一区亚洲| 国产精品av视频在线免费观看| 日韩 亚洲 欧美在线| 色5月婷婷丁香| 99久久精品热视频| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 中文亚洲av片在线观看爽| 黄色视频,在线免费观看| 日本在线视频免费播放| 在线观看免费视频日本深夜| 亚洲av美国av| 国产中年淑女户外野战色| 国产黄片美女视频| 免费看美女性在线毛片视频| 可以在线观看毛片的网站| 欧美bdsm另类| 老司机午夜福利在线观看视频| 欧美成人精品欧美一级黄| 国产精品久久久久久久电影| 国产一区二区激情短视频| 日本一本二区三区精品| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 亚洲久久久久久中文字幕| 亚洲欧美日韩无卡精品| 色视频www国产| 亚洲av中文av极速乱| 久99久视频精品免费| 免费在线观看影片大全网站| 99久久精品国产国产毛片| 在线观看免费视频日本深夜| 久久久久九九精品影院| 在线a可以看的网站| 国产成人a∨麻豆精品| 日韩国内少妇激情av| 我要看日韩黄色一级片| 国产精品野战在线观看| 综合色av麻豆| 亚洲中文日韩欧美视频| 综合色av麻豆| 可以在线观看毛片的网站| 长腿黑丝高跟| 联通29元200g的流量卡| 国国产精品蜜臀av免费| 天堂av国产一区二区熟女人妻| 99在线人妻在线中文字幕| 国产精品一区二区免费欧美| 久久精品影院6| 精品一区二区三区av网在线观看| АⅤ资源中文在线天堂| 真人做人爱边吃奶动态| 亚洲性夜色夜夜综合| 国产亚洲精品综合一区在线观看| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美日本视频| 综合色丁香网| 少妇高潮的动态图| 97热精品久久久久久| 一级黄色大片毛片| 国模一区二区三区四区视频| 欧美日韩一区二区视频在线观看视频在线 | 香蕉av资源在线| 久久久久精品国产欧美久久久| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日本三级黄在线观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 日本在线视频免费播放| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 国产大屁股一区二区在线视频| av免费在线看不卡| 成人综合一区亚洲| 久久久精品94久久精品| 色5月婷婷丁香| 我要搜黄色片| 伦理电影大哥的女人| 欧美在线一区亚洲| 欧美日韩综合久久久久久| 久久久久九九精品影院| 国产女主播在线喷水免费视频网站 | 91狼人影院| 乱人视频在线观看| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看| 亚洲av熟女| 亚洲色图av天堂| 18禁在线无遮挡免费观看视频 | 欧美xxxx性猛交bbbb| 又粗又爽又猛毛片免费看| 99热6这里只有精品| 人人妻人人澡欧美一区二区| 99久国产av精品| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 色av中文字幕| 国产精品一及| 欧美潮喷喷水| 欧美性感艳星| 少妇熟女aⅴ在线视频| 卡戴珊不雅视频在线播放| 欧美最新免费一区二区三区| 99久国产av精品国产电影| 1000部很黄的大片| 久久久久性生活片| 欧美日韩精品成人综合77777| 校园春色视频在线观看| 免费电影在线观看免费观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 美女xxoo啪啪120秒动态图| 亚洲性久久影院| 两个人视频免费观看高清| 网址你懂的国产日韩在线| 日韩欧美精品免费久久| 成人av一区二区三区在线看| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产真实伦视频高清在线观看| 亚洲av电影不卡..在线观看| 国产精品免费一区二区三区在线| 亚洲丝袜综合中文字幕| 99九九线精品视频在线观看视频| 婷婷亚洲欧美| 国产亚洲精品久久久com| 国产精品综合久久久久久久免费| 成年免费大片在线观看| 国内揄拍国产精品人妻在线| 日本一本二区三区精品| 91久久精品国产一区二区三区| 国产伦一二天堂av在线观看| 欧美在线一区亚洲| 亚洲第一区二区三区不卡| 乱系列少妇在线播放| 国产男靠女视频免费网站| 中出人妻视频一区二区| 男人舔女人下体高潮全视频| 男女做爰动态图高潮gif福利片| 一级黄片播放器| 日本色播在线视频| 亚洲天堂国产精品一区在线| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲成人久久性| 国产成人aa在线观看| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 中文字幕久久专区| 一级毛片电影观看 | 九九热线精品视视频播放| 免费一级毛片在线播放高清视频| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 春色校园在线视频观看| 亚洲激情五月婷婷啪啪| 欧美成人免费av一区二区三区| 99热网站在线观看| 亚洲av中文字字幕乱码综合| 亚洲七黄色美女视频| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 久久午夜亚洲精品久久| 日韩人妻高清精品专区| 亚洲欧美精品综合久久99| 日韩制服骚丝袜av| 麻豆国产av国片精品| 国产在视频线在精品| 99精品在免费线老司机午夜| 国产 一区 欧美 日韩| 99热这里只有精品一区| 直男gayav资源| 亚洲三级黄色毛片| 欧美绝顶高潮抽搐喷水| 在线观看免费视频日本深夜| 1000部很黄的大片| 午夜影院日韩av| 免费电影在线观看免费观看| 久久精品影院6| 两个人视频免费观看高清| 一本一本综合久久| 免费看av在线观看网站| 精品99又大又爽又粗少妇毛片| 天堂网av新在线| 又黄又爽又免费观看的视频| 亚洲成人久久性| 最新中文字幕久久久久| 九色成人免费人妻av| 欧美激情在线99| 国产美女午夜福利| 亚洲图色成人| 在线播放无遮挡| 夜夜看夜夜爽夜夜摸| 成人三级黄色视频| АⅤ资源中文在线天堂| 欧美在线一区亚洲| 三级毛片av免费| 亚洲天堂国产精品一区在线| 国产伦一二天堂av在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲美女黄片视频| 哪里可以看免费的av片| 亚洲国产精品成人综合色| 最近的中文字幕免费完整| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲欧美成人精品一区二区| av.在线天堂| 日韩精品有码人妻一区| 国产精品爽爽va在线观看网站| 欧美成人一区二区免费高清观看| 在线免费观看不下载黄p国产| 丝袜喷水一区| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 男人舔奶头视频| 天堂动漫精品| 成人无遮挡网站| 国产视频内射| 成人一区二区视频在线观看| 全区人妻精品视频| 午夜a级毛片| 免费看美女性在线毛片视频| 久久久国产成人免费| 国产av一区在线观看免费| 国产精品99久久久久久久久| 午夜精品在线福利| 久久精品国产亚洲av天美| 尾随美女入室| 国产高潮美女av| 亚洲av免费在线观看| 岛国在线免费视频观看| 亚洲成a人片在线一区二区| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 国模一区二区三区四区视频| 国产v大片淫在线免费观看| 中国美白少妇内射xxxbb| 22中文网久久字幕| 久久精品影院6| 美女cb高潮喷水在线观看| 亚洲图色成人| 免费av不卡在线播放| 在线观看一区二区三区| 日韩成人av中文字幕在线观看 | 啦啦啦韩国在线观看视频| 永久网站在线| 日韩三级伦理在线观看| 国产精品久久视频播放| 九九爱精品视频在线观看| 欧美激情久久久久久爽电影| 日本与韩国留学比较| 18禁在线播放成人免费| 日本黄色片子视频| 国产成人一区二区在线| 深夜a级毛片| 男女之事视频高清在线观看| 日本黄色片子视频| 国产免费男女视频| 搡老岳熟女国产| 69av精品久久久久久| 亚洲av不卡在线观看| 少妇熟女aⅴ在线视频| www日本黄色视频网| 国产黄色小视频在线观看| 免费看av在线观看网站| 国产精品乱码一区二三区的特点| 91av网一区二区| 岛国在线免费视频观看| 色av中文字幕| 少妇熟女aⅴ在线视频| 国内揄拍国产精品人妻在线| 亚洲国产欧洲综合997久久,| 亚洲五月天丁香| 99热这里只有是精品在线观看| 久久久久久久久久久丰满| 国产视频一区二区在线看| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 日本欧美国产在线视频| 成人综合一区亚洲| 丰满的人妻完整版| 内地一区二区视频在线| 美女大奶头视频| 国产精品一二三区在线看| 久久热精品热| 国产欧美日韩一区二区精品| 全区人妻精品视频| 亚洲欧美清纯卡通| av天堂中文字幕网| 国产精品久久久久久av不卡| 色综合色国产| 欧美zozozo另类| 色综合色国产| 久久韩国三级中文字幕| 欧美日韩国产亚洲二区| 久久久精品94久久精品| 欧美潮喷喷水| 九色成人免费人妻av| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲av免费在线观看| 一本精品99久久精品77| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 国产v大片淫在线免费观看| 91av网一区二区| 晚上一个人看的免费电影| 亚洲国产精品sss在线观看| 久久精品国产99精品国产亚洲性色| 国产一区二区在线观看日韩| 国产在视频线在精品| 亚洲一级一片aⅴ在线观看| 中文资源天堂在线| 天天躁日日操中文字幕| 亚洲成人久久性| 人妻久久中文字幕网| 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看 | 美女xxoo啪啪120秒动态图| 日韩成人伦理影院| 免费观看人在逋| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 国产精品久久视频播放| 在线天堂最新版资源|